问答题 细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程,受到严格的遗传机制的调控,它与细胞坏死有截然不同的细胞学现象。试设计1~2个实验方案来检测凋亡细胞,要求写明实验原理、主要实验仪器、主要方法步骤。
【正确答案】1.染色法
   (1)原理:吖啶橙(AO)只进入活细胞,正常的细胞和处于凋亡早期的细胞和呈现绿色;溴乙啶(EB)只进入死细胞,将死细胞及凋亡晚期细胞染成橙红色,所以,用AO和EB复染,可检测到凋亡细胞。
   (2)主要实验仪器:显微镜。
   (3)主要实验步骤:①对培养的细胞用紫外线照射,诱导凋亡细胞;定期取样;②配制染液;③染色;④观察。
   2.DNA电泳
   (1)原理:细胞凋亡时,DNA发生特征性的核小体单位之间的断裂,形成大小不同的DNA片段,但都是180~200bp的整数倍,琼脂糖凝胶电泳时呈现“梯状”电泳图谱。
   (2)主要实验仪器:紫外灯照射装置,离心机,电泳槽,紫外透射仪。
   (3)主要实验步骤:①对培养的细胞用紫外线照射,诱导凋亡细胞;②对诱导的细胞进行固定、离心等处理;定期取样,提取DNA;③电泳;④用紫外透射仪观察。
   3.凋亡细胞原位末端标记法
   (1)原理:凋亡细胞中染色体断裂后可产生3'-OH末端。荧光素标记的dUTP在TDT酶的作用下可掺AN凋亡细胞DNA的3'-OH末端,然后用荧光显微镜进行检测。
   (2)主要实验仪器:紫外灯照射装置,离心机等。
   (3)主要实验步骤:①对培养的细胞用紫外线照射,诱导凋亡细胞;②对诱导的细胞定期取样,进行固定、离心等处理,提取DNA;③进行标记;④观察。
   4.彗星电泳法
   (1)原理:凋亡细胞的DNA降解片段在电泳时速度较快,使细胞核呈现一种彗星式的图案,而正常细胞的细胞核在泳动时保持圆球形。
   (2)主要实验仪器:电泳槽,离心机等。
   (3)主要实验步骤:①对培养的细胞用紫外线照射,诱导凋亡细胞;②裂解处理;③用荧光染料染色后电泳;④观察。
【答案解析】