填空题 有一组单亚基蛋白质,具有不同的分子量和等电点。分别为:A(45ku,pI5.4)、B(13ku,pI10.6)、C(17ku,pI7)、D(69ku,pI4.8)、E(90ku,pI5.9)。①请指出经过SDS-PAGE后,从凝胶的上样孔到前沿指示剂方向(即从负极到正极方向)蛋白质的条带顺序。并说明原因;②指出经过等点聚焦电泳(电泳方向从负极到正极)后,从负极到正极方向蛋白质在凝胶上的排列顺序,并说明原因。
【正确答案】(1)经过SDS-PAGE后,从凝胶的上样孔到前沿指示剂方向(即从负极到正极方向),这些蛋白质的排列顺序是:{{U}}E—D—A—C—B{{/U}}。 原因:SDS-PAGE为变性电泳;蛋白质迁移速度只与分子质量有关,分子质量小的分子跑在最前面。 (2)经过分离后,从负极到正极蛋白质的排列顺序是:{{U}}B—C—E—A—D{{/U}}。 原因:等电聚焦电泳是按等电点分离。进行等点聚焦电泳时,从负极到正极方向凝胶的pH梯度从高到低,因此偏碱性条件下蛋白质样品中所有蛋白质均带负电荷,这样在电场中可向正极移动。蛋白质pI越高,聚焦条带越靠近负极;反之,则靠近正极。
【答案解析】