结构推理 简述DNA链末端合成终止法测定DNA序列的原理。
【正确答案】DNA链末端合成终止法也称为Sanger法,它用于DNA序列测定的基本原理是:将2',3'-双脱氧核苷酸(ddNTP)参入到合成的DNA链中,由于脱氧核糖的3'位碳原子上没有羟基,因此不能与下一位核苷酸反应形成磷酸二酯键,DNA合成反应即终止。在测定时,首先将模板分为四个反应管,分别加入引物和DNA聚合酶,将32P或35S标记的dNTP(仅标记一种即可)作为底物参入到新合成的DNA链中。反应一定时间后,每一管内加入四种ddNTP中的一种,就可获得一系列在不同部位终止的、大小不同的DNA片段。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离这些片段,再通过放射自显影就可以读出DNA的序列。
【答案解析】