问答题 已知用传统的方法确知动物细胞中有角蛋白纤维以及已知克隆的角蛋白基因。欲检测植物细胞和低等动物细胞是否存在角蛋白纤维,有哪几种方法证明之?
【正确答案】首先要制备抗体:分离提取动物细胞的角蛋白,并以之作为抗原,免疫兔获得抗角蛋白抗体,再购买或制备荧光素或胶体金或酶标记的羊抗兔免疫球蛋白抗体。其次要制备DNA探针:从动物细胞中分离角蛋白基因,用放射性核素进行标记制成DNA探针。
   证明的方法可有以下几种:
   (1)免疫荧光技术:对植物细胞或低等动物细胞切片,在切片上加入兔抗角蛋白抗体,洗涤后再加荧光素标记羊抗兔免疫球蛋白抗体。荧光显微镜下观察,根据有无荧光确定是否存在角蛋白纤维。
   (2)免疫电镜技术:对植物细胞或低等动物细胞做超薄切片,在切片上加入兔抗角蛋白抗体,洗涤后再加胶体金标记的羊抗兔免疫球蛋白抗体。透射电镜下观察,根据有无胶体金颗粒确定是否存在角蛋白纤维。
   (3)免疫印迹技术:将植物细胞或低等动物细胞匀浆后分离蛋白质,用SDS凝胶电泳分离蛋白质条带,再通过印迹转移到硝酸纤维素膜上,在膜上依次加入兔抗角蛋白抗体和酶标记的羊抗兔免疫球蛋白抗体,最后再加酶的底物进行显色反应,根据有无显色条带确定是否存在角蛋白纤维。
   (4)原位杂交技术:对植物细胞或低等动物细胞做切片或超薄切片或染色体制片,将切片或制片上的DNA做变性处理,加入放射性DNA探针进行杂交,经显微放射自显影或电镜放射自显影分析,根据银粒出现与否确定是否存在角蛋白纤维。
   (5)Southern杂交技术:将植物细胞或低等动物细胞匀浆后分离核酸,用琼脂凝胶电泳分离DNA条带,再通过印迹转移到硝酸纤维膜上,将膜上的DNA做变性处理,加入放射性DNA探针进行杂交,经放射自显影后分析,根据银粒出现与否确定是否存在角蛋白纤维。
【答案解析】