问答题 说朗变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。
【正确答案】变性定位法(denaturation mapping)是根据环状双链DNA基因组中某些特异性区段比该分子上其他区段对热、碱、酶等变性因子有较高的敏感性,而采用热、碱、酶等变性因子使环状DNA进行变性,结合电子显微镜技术,比较不同复制时间的复制区同变性部位的距离变化,以确定环状双链DNA复制起点和方向的方法。用此法确定λ噬菌体的复制是一个起点、双方向对称复制。
   限制性内切核酸酶定位法(restriction endonuclease mapping)是用限制性内切核酸酶切割质粒DNA,结合电子显微镜技术,比较不同复制时间的复制叉同两端距离的变化,以确定复制的起点和方向。用这种方法确定了ColE1质粒复制是从离EcoR Ⅰ切点的17/%的特异位点开始的,并从起点开始单向复制。
【答案解析】