结构推理 放射性标记物制备的常用方法有哪些?各有何优缺点?
【正确答案】有直接标记法和间接村记法 (1)直接标记法:是将125I直接结合在蛋白质 侧链的酷氨到残基苯环上,形成单碘酷氨酸或双碘酷氨酸。常用的氧化剂是氯胺T。氯胺T是一种温和的氧化剂。在水溶液中产生次氯酸,使125I氧化。优点;操作简便、迅速、高效且重复性好,氧化剂还有应用乳过氧化物酶、N-溴代琥珀酰亚胺等。缺点:只能标记含酷氨酸的化合物,有时可能会损害蛋白质活性。 (2)间接标记法:亦称联结标记法,是先将放射性碘连接到一个小分子载体上,再将这个小分子载体与蛋白结合。具有代表性的方法是Bolton-Hunter法,使用的勒体分子是N-琥珀酰本来亚胺3-(4-羟基苯)-丙酸)(SHPP)。标记方法分两步,先用氯胺T法使SHPP碘化,再将碘化SHPP分子偶联到蛋白质分子上。优点:①避免氧化剂和蛋白质直接接触,对蛋白质活性影响较小;②SHPP主要连接到蛋白分子表面赖氨酸残基的氯基或蛋白质的尖性中心,不影响蛋白质在性。缺点:①在蛋白质分子内载体分子上起位阻效应,影响其生物活性,对分子量小的蛋白质影响更明显;②标记过程分两步,故碘标记蛋白质的比较放射性和碘利用率较直接标记法低。
【答案解析】