问答题 PCR的原理是什么?在PCR反应中是否循环次数越多,所合成产物数量也越多?为什么?

【正确答案】(1)PCR是聚合酶链式反应的简称,是体外快速扩增特定基因或DNA序列最为常用的方法之一。具体过程是将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子,DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合系中的四种脱氧核苷酸合成新生的DNA互补链。重复这一过程便可使目的DNA片段得到大规模扩增。
(2)PCR反应的特征是多次循环,每一次循环一般都包括三步:解链、退火、延伸。解链计DNA分子变性解旋,一般温度较高;退火时引性特异性结合到模板上;延伸步骤中DNA聚合酶开始催化新生链的合成。循环次数过多,并不会计产物也随之过度增加。因为再次循环都有高温到低的温度变化,聚合酶的活性有限,而且一般体系中引物和原料的量也不会是无限供应的,另外循环次数过多,产物间可能会形成较为复杂的结构,影响其作为模板的效率,因此循环次数不是越多越好,一般PCR反应的循环不超过35次。
【答案解析】