（1）实验原理：
考马斯亮蓝G-250分子通过范德华力、疏水作用等次级键与蛋白质中的碱性氨基酸相互作 用，两者互作的结果使G-250分子的最大光吸收从465nm转移至595nm。在一定的蛋白质 浓度范围内，由于G-250与蛋白质结合产物的最大光吸收与蛋白质含量成正比，因此，可 以通过测定G-250和蛋白质结合产物在595nm的最大光吸收来确定蛋白质的含量。
（2）实验步骤：
① Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml。
② 标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例 如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋 白。通常在20μg～150μg/100μl之间绘制标准曲线。
③ 将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同（最好用 PBS）。
④ 按1：4的比例用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
⑤ 每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色 变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min。
⑥ 根据标准曲线计算待测样本的浓度。