二聚体往往是细胞中许多蛋白质分子发挥功能的有效形式。试举例并简述细胞生物学研究中常用以鉴定蛋白质以二聚体形式存在的两种方法。
 
【正确答案】蛋白二聚体又称双体、二聚物,其基本涵义都表示相同或同一种类的蛋白质,以成双的形态出现,可能具有单一状态时没有的性质或功能。蛋白质单体是否能够形成二聚体,可以通过以下两个方法来进行鉴定。 (1)非变性PAGE胶电泳 ①提取蛋白,并且蛋白提取后不可煮沸变性; ②将提取的蛋白进行非变性PAGE胶电泳; ③将得到的非变性PAGE胶转膜,然后封闭,利用一抗和二抗使蛋白显色,因为蛋白形成二聚体后会聚合在一起,其在胶图上的位置是大概2倍单体位置。 因此,通过非变性电泳的位置,可以判断蛋白质是否为二聚体。 (2)密度梯度离心法 ①提取蛋白,并且蛋白提取后不可煮沸变性; ②将提取的蛋白进行蔗糖或者CsCl密度梯度离心; ③将得到的不同密度组分的蛋白利用一抗和二抗使蛋白显色,因为蛋白形成二聚体后会聚合在一起,其经过密度梯度离心后的位置是大概2倍单体位置。 因此,通过密度梯度离心的位置,可以判断蛋白质是否为二聚体。
【答案解析】