【正确答案】正确答案:(1)体外无细胞蛋白质合成体系中加入人工合成的poly U的方法。在无细胞蛋白质合成系统中加入mRNA,研究蛋白质生物合成过程,表明加入mRNA能刺激无细胞系统中蛋白质合成,因此加入人工合成的多聚核苷酸亦将会有这种促进作用。以polyU作为模板,以观察无细胞系统中蛋白质合成速率。因为在反应体系中加入高Mg
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浓度,可有利于IF(起始因子)的作用和fMet-tRNANet的形成,从而保证肽链合成的起始不需mRNA的适当信号。当把翻译产物分离、纯化和做序列分析后,合成的肽链中的氨基酸残基全部是苯丙氨酸,即polyPhe。则确认了UUU是Phe的密码子。以polyA和polyC为模板,分别可指导合成polyLys和polyPro,即确定了AAA是Lys的密码子,CCC是pro的密码子。由于polyG产生牢固的氢键结合,形成三股螺旋,而不与核糖体结合,因而不能证明GGG是何种氨基酸的密码子。 (2)混合共聚物实验的方法。例如,以A和C原料,合成polyAC。polyAC含有8种不同的密码子:CCC、CCA、CAA、AAA、AAC、ACC、ACA和CAC。实验显示AC共聚物作模板翻译出的肽链由六种氨基酸组成,它们是Asp,His,Thr,Pro,和Lys,其中Pro和Lys的密码子早先已证明分别是CCC和AAA。根据共聚物成份不同的比例和翻译产物中氨基酸比例亦不同的关系,实验确定了Asp、Glu和Thr的密码子含2AlC;His的密码子含1A2C;Thr的密码子也可以含1A2C;Pro为3C或1A2C;Lys为3A。但上述方法不能确定A和C的排列方式,而只能显示密码子中碱基组成及组成比例。 (3)tRNA与确定密码子结合实验的方法。该方法利用了如下事实:即是在缺乏蛋白质合成所需的因子的条件下,特异氨基酸一tRNA(aa—tRNA)也能与核糖体-mRNA复合物结合。最重要的是这种结合并不一定需要长的mRNA分子,而三核苷酸实际上就可以与核糖体结合。虽然所有64个三核苷酸(密码子)都可按设想的序列合成,但并不是全部密码子均能以这种方法决定,因为有一些三核苷酸序列与核糖体结合并不像UUU或GUU等那样有效,以致不能确定它们是否能为特异的氨基酸编码。 (4)用重复共聚物破译密码的方法。应用有机化学和酶学技术,制备了已知的核苷酸重复序列。蛋白质在核糖体上的合成可以在这些有规律的共聚物的任一点开始,并把特异的氨基酸参入肽链。
【答案解析】