问答题 某一肿瘤细胞系,已知在其基因组中抑癌基因Z的一个拷贝发生突变导致其所编码的蛋白N端的50个氨基酸缺失(ΔZ)。分别从正常细胞内分离出野生型的Z蛋白,从肿瘤细胞内分离出突变的ΔZ蛋白,并分别与32P标记的Z蛋白结合序列温育,进行凝胶阻滞试验,结果如图所示,图中使用的抗体(antibody)特异性识别Z蛋白N端的20个氨基酸,试解释a.为何在第三泳道中有三条迟滞的条带?b.第四泳道中三条迟滞条带中所包含的蛋白组成是什么?并解释第四泳道与第三泳道带型不同的原因?
【正确答案】a.Z蛋白以二聚体的形式与DNA结合,细胞内有Z与ΔZ两种单体,因而形成ZZ,ZΔZ,ΔZΔZ三种二聚体蛋白与DNA结合,在EMSA中出现三条带。 b.抗体不能与ΔZ结合,因而ΔZΔZ二聚体与DNA结合后的电泳位置不变,但ZΔZ,ZZ分别可以结合一分子或两分子的抗体,因此比第三泳道中的相应条带位置滞后。
【答案解析】