【正确答案】可以采用基因图位克隆的方法来确定影响某表型的相关基因。图位克隆分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行,无需预先知道基因的DNA序列及其表达产物的有关信息,通过分析突变位点与已知分子标记的连锁关系来确定突变表型的遗传基础。操作步骤如下: (1)通过诱变获得表型并建立遗传分离群体。 (2)筛选与目标基因紧密连锁的分子标记,利用目标基因的近等基因系或分离群体分组分析法(BSA)进行连锁分析,筛选出目标基因所在局部区域的分子标记。 (3)采用遗传作图和物理作图法对目标基因部位精细定位和作图。 (4)构建含有大插入片段的基因组文库。常用的载体有柯斯质粒,酵母人工染色体(YAc)以及BAC,PAC等几种以细菌为寄主的载体系统。 (5)用与目标基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库,得到阳性克隆。 (6)构建目的基因区域的跨叠克隆群。以阳性克隆的末端作为探针基因组文库,并进行染色体步行或登陆,直到获得具有目标基因两侧分子标记的大片段跨叠群。 (7)通过亚克隆获得含有目的基因的小片段克隆。 (8)通过遗传转化和功能互补验证最终确定目标基因的碱基序列。
【答案解析】