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理学生物学
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结构推理假设你需要将一段cDNA克隆到表达载体中并转化到大肠杆菌中。cDNA的两端和载体上均有BamHⅠ的酶切位点,你需要用BamHⅠ切割eDNA和载体然后将它们连接在一起。下面是实验方法要求的具体步骤:a.用BamHⅠ处理载体DNA,然后用碱性磷酸酶去除5端的磷酸基;b.用BamHⅠ处理cDNA,然后与步骤a中得到的载体DNA混合,加入DNA聚合酶,在适当的条件下使cDNA与载体连接;C.将步骤b的产物转入大肠杆菌感受态细胞中,培养后均匀涂在含有抗生素的琼脂培养皿上。 因为表达载体中含有抗性基因,能表达抵制抗生素的酶,所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长,而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。 你还参照实验手册做了下面四组对照: 对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的(即不含有载体的)大肠杆菌感受态细胞(cells alone)。 对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞,将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面(vector alone)。 对照三、用BamHI酶切载体DNA后,不用碱性磷酸酶处理,不需要cDNA,直接加入DNA聚合酶,然后转化、涂板(Omit phosphatase,omit eDNA)。 对照四、除使用碱性磷酸酶外,其它与对照三相同(Omit cDNA)。 你一共做了三次实验,在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果,转化成功,具体克隆数见下表: Preparation of Sample NO.of Colonies 1 2 3 Control 1 Ceils alone TMTC 0 0 Control 2 Uneut vector TMTC 0 >1000 Control 3 Omit phosphatase,omit cDNA TMTC 0 435 Control 4 Omit CDNA TMTC 0 25 Experimental sample TMTC 0 34 TMTC=too many to count 请回答下列问题:
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