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已选分类 理学生物学生物化学与分子生物学
问答题小RNA
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问答题基因扩增(gene amplification)
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问答题为了用双杂种系统选出与Ras相互作用的蛋白质,可建立一cDNA文库,在此cDNA文库中cDNA连接在VP16基因片段的C末端。接着,将此文库转染已含Lex-Ras质粒的酵母细胞,在有XGAL、无组氨酸的平板上生长转化的酵母细胞,并分离蓝色菌落以进行下一步实验。 选择出不含LexA-Ras质粒,仅含VP16-cDNA质粒的“痊愈”细胞,这些细胞可用在缺乏组氨酸的平板上检查是否生长和在有XGAL存在时的显色情况而被挑选出来。那些不能在组氨酸平板上生长和有XGAL存在时形成白色菌落的“痊愈”细胞用LexA-核纤层蛋白质粒转化,并再次在上述平板上测试生长,只有那些在缺乏His的平板上不生长且形成白色菌落(含XGAL)的含LexA-核纤溶蛋白基因质粒的细胞可用于进一步分析。 在1.4×106个原始转化体中仅有19个菌落满足详细分析的严格标准。再测定每种细胞中插入到VP16基因片段的下游的cDNA序列时,将发现:9个菌落(克隆)均有插入的cDNA,均与Raf丝氨酸/苏氨酸激酶的N末端相对应,6个与C-Raf对应,3个与A-Raf对应。 这是一个令人兴奋的发现,因为其他的工作仅能显示Raf的免疫沉淀物可使MAP-激酶磷酸化而激活,如果Raf真能与Ras结合,我们就能找到GTPase单体与MAP-激酶之间的级联中所缺少的一环。 为了验证上述发现所暗示的相互作用是否正确,可构建一些含融合蛋白基因的质粒,如麦芽糖结合蛋白与Raf间的融合蛋白(MBP-Raf)、谷光甘肽-S-转移酶和Ras的融合蛋白(GST-Ras),之后让这两种融合蛋白质粒在细菌中扩增,在直链淀粉亲和柱上通过它们的混合物检验他们结合的能力,而直链淀粉亲和柱可与MBP-Raf结合。用麦芽糖洗脱被束缚的蛋白质,这时会发现一条明显的GST-Ras蛋白随着MBP-Raf蛋白一起洗脱的曲线。这个结论为双杂交系统的遗传学结论提供了生化证据。
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问答题信号肽(signal peptide)
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问答题生物氧化
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问答题向DNA溶液中加入无水乙醇和盐会使DNA形成沉淀,请解释原因。
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问答题何谓染色体步移(chromosome walking)?
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问答题gratuitous inducer
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问答题什么是cDNA文库(complement DNA library)?同基因组文库有何差别?
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问答题RNA编辑
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问答题增强子(enhancer)
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问答题复制叉(replication fork)
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问答题突变能影响高等真核生物结构基因表达的几个水平?并指出每种突变最明显的分子表型。
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问答题限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)
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问答题用两组实验大鼠进行试验:第一组每天喂食正庚酸(7:0)作为唯一碳源;第二组喂食正辛酸(8:0)。一个月之后,第一组大鼠表现得很健康,体重还有增加;第二组无力,因肌肉萎缩而体重减轻。试解释导致这两组大鼠出现这些差异的原因。
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问答题遗传密码
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问答题重组率和交换率的定义各是什么?说明二者之间的关系。
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问答题操纵子
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问答题用图描述在线粒体内膜上的电子传递复合体和电子载体的顺序,确定要列出最初的电子供体和最终的电子受体。
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问答题RNA剪接(RNA splicing)
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