摘要
为了对鸡输卵管特异表达载体表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化及生物学特性进行鉴定,用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取溶菌酶,以兔抗hLYZ血清为一抗,HRP-标记的羊抗免IgG为二抗,进行Western blotting检测,结果表明表达在鸡蛋清中的rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ在不同温度的水浴中孵育30min,用RBB-R染料标记比色法检测溶菌酶活性的变化,结果显示二者的热稳定性无显著差异;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ用不同PH的溶液稀释,40C孵育30min后进行酶的活性测定,结果显示两者在pH3.0～11.0范围内具有活性,最强活性pH为7.0;以12种常见细菌为试验对象,用最小抑菌浓度法测定含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ的溶菌活性,结果显示两者对鲫鱼嗜水气单胞菌、变形杆菌、枯草杆菌、无鞭毛伤寒杆菌、白色念珠菌和柠檬色葡萄球菌具有很强的抑制作用,对痢疾杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强的抑制作用,对有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌无明显的抑制作用.这些试验结果显示,表达在重组载体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的相对分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱.
To identify the recombinant human lysozyme expressed in egg white,the lysozyme is purified from egg white of laying hens injected with pOV2LYZ and of negative control hens without injecting.The Western blotting of purification product showed that hLYZ was able to be recognized by hLYZ-specific antibody with expected molecular weight of 14 700.The characterization of purification product showed that the rhLYZ expressed in egg white had a similar thermo-stability,pH sensitivity and microbicidal effect to that of natural LYZ from human milk.The results indicated that the recombinant human lysozyme expressed in egg white is correct.
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期203-206,210,共5页
Chinese Journal of Veterinary Science
基金
江苏省高新技术发展计划资助项目(BJ2001315)
关键词
鸡蛋清
重组人溶菌酶
鉴定
egg white
recombinant human lysozyme
identification
