摘要
目的:本研究应用基因工程技术方法,构建含重组编码CD13单链抗体和蝎毒素镇痛抗肿瘤缬精甘肽(analgesic antitumoral peptide,AGAP)融合蛋白基因的表达载体,并研究CD13-AGAP融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4影响。方法:克隆东亚钳蝎活性肽AGAP的基因,插入真核表达载体pSecTag2/CD13/RFP,得到pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体。酶切及测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染293T细胞,通过RT-PCR和免疫印迹方法检测融合基因和蛋白的表达。纯化融合蛋白,作用NB4细胞,CCK8检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:酶切及测序结果证实pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体构建成功,转染293T细胞后,RT-PCR和免疫印迹方法结果证实重组质粒得到有效表达,并纯化真核表达融合蛋白CD13-AGAP对血液肿瘤CD13阳性白血病细胞NB4有一定的生长抑制作用,并且使细胞周期G1期阻滞,S期减少。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pSecTag2/CD13/AGAP,并在293T细胞中成功表达,进一步证实融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4有杀伤作用。
AIM: To establish the eukaryotic expression vector of single-chain antibody fragments reacting with human CD13 and scorpion toxin polypeptide analgesic antitumoral peptide(AGAP)and the target lethal effect to NB4 cells by genetic engineering method.METHODS: Buthus martensii Karsch active peptide AGAP gene was inserted eukaryotic expression vector pSecTag2/CD13/RFP,and the recombinate eukaryotic expression vector pSecTag2/CD13/AGAP was obtained.After double enzyme digestion and DNA sequencing identification,...
出处
《中国临床药理学与治疗学》
CAS
CSCD
2008年第11期1231-1236,共6页
Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics
基金
浙江省自然科学基金资助项目(Y206383)
关键词
东亚钳蝎
蝎毒活性肽
抗肿瘤缬精甘肽
CD_(13)单链抗体
融合蛋白
Buthus martensii Karsch
scorpion venom active peptides
analgesic antitumoral peptide
CD_（13） single chain fragments
fusion protein
