摘要
目的建立小鼠甲状腺细胞的原代培养方法,并研究其体外摄碘功能,为甲状腺功能的体外研究奠定基础。方法取小鼠甲状腺组织,去筋膜和结缔组织,剪碎后用1mg/mL的胶原酶于37℃消化2h,其间间歇振荡数次,1,200g离心收集细胞沉淀,Ficoll分离得甲状腺单个核细胞,灭菌PBS洗涤细胞2遍,用RPMI1640完全培养基调整细胞浓度至2×105/mL,24孔板常规接种培养,以"半量换液法"连续培养数天。用抗甲状腺球蛋白抗体为识别抗体的间接免疫荧光法检测原代培养细胞甲状腺球蛋白的表达状况。体外摄碘试验于每孔加入0.1μCi125I后继续培养2h,用冰冷的PBS洗涤细胞数遍,裂解细胞并进行蛋白浓度测定及放射性计数。温度及竞争物阻断试验分别在0℃～4℃和加入100mmol/L NaClO4的条件下进行。结果采用上述方法获得的小鼠甲状腺原代培养细胞在体外可形成甲状腺细胞所特有的"次级滤泡样"结构。免疫荧光检测结果显示,细胞上有甲状腺细胞特有的甲状腺球蛋白的表达。体外摄碘试验结果显示,用该方法培养的甲状腺细胞具备良好的摄碘功能,该功能具有对温度和高氯酸盐的双重敏感性。结论建立了简便可行的小鼠甲状腺细胞的原代培养方法,为开展甲状腺细胞的摄碘及其他相关功能的研究奠定了基础。
Objective To establish a method of mouse thyrocyte primary culture and evaluate its radioactive iodide uptake function in vitro.Methods Mice thyroid lobes were dissected aseptically from the trachea, and disrupted mechanically.The fragments were collected and transferred to PBS containing 1mg/mL of type Ⅰ collagenase. Enzymatic digestion was carried out for 2h in 37℃.After digestion,the pellet were collected,resuspended and further isolated by density gradient centrifuge with Ficoll. Thyroid mononucleus cel...
出处
《中国血液流变学杂志》
CAS
2008年第4期465-467,510,共4页
Chinese Journal of Hemorheology
基金
江苏省自然科学基金(No.BK2006025)
江苏省卫生厅面上项目(No.H200529)
江苏省科技厅公益研究项目(No.BM2006711)资助
关键词
小鼠
甲状腺
甲状腺细胞
原代培养
碘
Mouse
Thyroid gland
Thyrocyte
Primary culture
Iodide
