摘要
为了进行血管性血友病因子（ｖＷＦ）的基因重组及体外表达，采用高保真长逆转录－多聚酶链反应技术从人脐静脉血管内皮细胞总ＲＮＡ中扩增出了５个相互重叠的ＤＮＡ片段，并在体外将它们拼接。最终的拼接产物长８５１５ｂｐ，包含ｖＷＦｃＤＮＡ编码区全长，经多种限制性内切酶酶切分析，酶切条带大小符合预期酶切谱。体外翻译实验表明该基因克隆具有正确的读框。
TheessentialdefectofvonWilebranddiseaseisthequalitativeor/andquantitativeabnor-malityofthevWF(vonWilebrandfactor).ThispaperreportedthesuccessfulPCRamplificationof5overlapingfragmentsofvWFcDNAfromthetotalRNAofthehumanumbilicalveinendothelialcelsandtheassemblingofthemintopGEM-3Zf(+)andpBluescriptSK(+).Thefinalyassembledproductwas8515bpinlengthandcontainedthewholecodingregionofvWFcDNA.Theresultofenzyme-cutinganalysisofthisvWFcDNAconformedtowhatwasexpectedaccordingtopublishedsequencedata.Theauthenticityofthisgene′sreading-framewasdeterminedinTNTtranslationsystemandvWFantigenwasrevealedbothinCHOcelsandinthesupernatantaftertransfectionwiththevWFcDNAinsertedpCIeu-karyoticexpressionvector.
出处
《中华血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第9期475-478,共4页
Chinese Journal of Hematology
基金
国家自然科学基金
上海高教局博士点基金
上海血液学研究所胡应洲基金
关键词
血管性
血友病因子
DNA克隆
真核表达
vonWilebrandfactorPolymerasechainreactionDNAcloningInvitrotranslationEukaryoticexpression
