摘要
介绍一种简便高效的两步纯化重组组织型纤溶酶原激活剂 (rt PA)的方法 ,产rt PA的CHO工程细胞SGG培养上清 ,经微孔玻璃珠 (MPG)吸附和赖氨酸 Sepharose 4B柱亲和吸附色谱纯化 ,纯化倍数平均达到 380倍 ,比活性为 390 0 0 0U/mg蛋白 ,rt PA活性回收率达到 1 4 0 % ,经SDS PAGE还原电泳分析主要为t PA蛋白 ,其中高分子t PA占 80 %左右 .用纤维蛋白自显影法检测均有溶纤活性 ,蛋白质印迹证实具有t
Asimpleandefficientmethodforthe purificationofrecombinanttissue typeplasmino genactivitor (rt PA)fromageneticallymanipu latedCHOcellline (SGG)hasbeendeveloped . Theconditionedmediumcontainingabout 1 5 0 0 U/mlofrt PAfromculturesofSGGcellin DMEM∶F1 2 (1∶ 1 )supplementedwith 1 % NBSwaspurifiedbyacombinationofabsorbtion chromatographyonMPGandaffinitychromato graphyonLysine Sepharose 4B .Thefinalprod ucthasaspecificactivityof 390 0 0 0U/mg protein.Theoverallactivityrecoverywasabout 1 40 %with 380foldincreaseinspecificactivity . AnalysisbySDS PAGEinthe presenceofa reducing agentfollowedbysilverstaining showedonebandwithmassofmolecularabout 6 5 0 0 0andtwobandsof 33 0 0 0～ 35 0 0 0 . ReversefibrinautographyandWesternblotting analysisshowedthattheproducthasnatural t PAcharacterization .
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
1997年第1期71-75,共5页
Progress In Biochemistry and Biophysics
关键词
组织型
纤溶酶原激活剂
重组
纯化
鉴定
recombinant tissue typeplasmino genactivitor,MPG ,lysine sepharose 4B
