摘要
以茄子基因组 DNA 为模板,利用正交设计方法对茄子 SSR 反应体系中的 Mg^(2+)、模板 DNA、Taq 聚合酶、dNTP、引物5个因素进行了优化,同时对反应程序中的退火温度及循环次数进行筛选。结果确定了茄子10 μL体积 SSR 反应体系的最优条件为:Buffer 为1 μL,Mg^(2+)为2.25 mmol·L^(-1),dNTP 为400 μmol·L^(-1),上下游引物各为39.60 ng,Taq 聚合酶为0.75 U,DNA 约为100ng。PCR 程序为94 ℃预变性2 min;然后进行35个循环的94℃变性30 s,52℃复性30 s,72℃延伸45 s;72℃延伸8 min 后4℃保存。
The orthogonal design was used to optimize SSR amplification system for eggplant in five factors： Mg^2＋, DNA template, Taq DNA polymerase, dNTP, Primer. A suitable 10μL SSR reaction system was established, and the system contained： PCR buffer 1μL, Mg^2＋ 2.25 mmol· L^-1, dNTP 400 μmol· L^-1 and Primer39.60 ng, DNA template 100 ng Taq DNA polymerase 0.75 U. The PCR amplification program were pre-denaturation 2min at 94℃, follaved by 35 cycle of denaturation 30 s at 94 ℃, ammealing 30 s at 52 ℃ and a extension 45 s at 72℃, ending with a final extension 8 min at 72 ℃.
出处
《上海交通大学学报（农业科学版）》
2008年第4期313-315,共3页
Journal of Shanghai Jiaotong University(Agricultural Science)
基金
沪农科攻字(2006)第2-1号
上海市重点学科建设项目(B209)
关键词
茄子
SSR
体系优化
正交设计
eggplant
SSR
optimization of system
orthogonal design .
