摘要
目的利用辐射敏感的早期生长反应基因1（Egr-1）启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK），观察其在胰腺癌细胞中的表达效果。方法以细菌内同源重组法构建含绿色荧光蛋白（GFP）做标志基因的TK基因的腺病毒载体pAdEgr-1-TK，转染人胰腺癌细胞系PC-360Co-γ射线照射后，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量分析各不同照射剂量组TK基因的mRNA表达。Western印迹法分析60Co-γ射线照射后转染pAdEgr-1-TK细胞中TK蛋白质的表达量。结果重组腺病毒载体pAdEgr-1-TK转染胰腺癌细胞系PC-3，不同剂量60Co-γ射线照射后，经RT-PCR半定量分析，TKmRNA表达结果分别为0Gy（67．3±2．1）％、5Gy为（89．3±1．0）％、7．5Gy为（114．7±5．7）％、10Gy为（140．5±3．1）％、15Gy为（134．5±4．0）％、20Gy为（117．4±3．4）％，各照射组TKmRNA表达均明显高于对照组0Gy（均P〈0．01），尤以剂量为10．0Gy时最为显著。Western印迹分析结果分别为0Gy为（5．4±0．7）％，5Gy为（7．6±0．9）％，7．5Gy为（21．5±1．5）％，10Gy为（35．7±1．4）％，15Gy为（32．1±1．2）％，20Gy为（28．8±1．5）％，60Co-γ射线照射可明显提高转染pAdEgr-1-TK细胞中TK的蛋白质表达量，且蛋白质表达量与辐射剂量呈正相关性。结论放射敏感性启动子Egr-1基因可驱动TK自杀基因在胰腺癌细胞中高效表达。
Objective To investigate the expression of radio-inducible herpes simplex virus thymidine kinase （TK） suicide gene controlled by early growth response-1 （Egr-1） promoter in pancreatic cancer cells. Methods Adenoviral vector pAdEgr-1-TK containing green fluorescent protein （GFP） was constructed. Human pancreatic cancer cells of the line PC-3 were cultured, transfected with pAdEgr-1-TK, and then exposed to 60Co source γ-radiation at the doses of 0, 5, 7.5, 10, 15, and 20 Gy respectively for 24 hours. RT-PCR and Western blotting were used to detect the TK mRNA and protein expression in the PC3 cells. Results The TK mRNA expression levels of the PC3 cells exposed to γ-radiation at the doses of 0, 5, 7. 5, 10, 15, and 20 Gy respectively were （67.3±2.1）%, （89.3±1.0）%, （114.7±5.7）%, （ 140. 5 ± 3.1 ） %, （ 134. 5 ± 4. 0） %, and （ 117.4 ± 3.4） % respectively. The TK mRNA expression level was markedly increased after exposure to 7-radiation, especially that t the dose of 10 Gy （ all P 〈 0. 01 ）. The TK protein expression levels of the PC3 cells exposed to γ-radiation at the doses of 0, 5, 7.5, 10, 15, and20 Gywere （5.4±0.7）%, （7.6±0.9）%, （21.5±1.5）%, （35.7±1.4）%, （32.1 ±1.2）%, and （28.8 ±1.5 ） % respectively. Conclusion The Egr-1 promoter causes high expression of TK suicide gene in cancer cells after exposure to 60Co-γ-radiation. These data provide an experimental basis for gene therapy.
出处
《中华医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第28期1952-1955,共4页
National Medical Journal of China
基金
国家自然科学基金资助项目（30471691）
关键词
胰腺肿瘤
基因疗法
腺病毒载体
Pancreatic neoplasms
Gene therapy
Adenovirus vector
