摘要
目的利用RNA干扰技术研究沉默DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,Dnmt1)对结肠癌细胞株HT-29细胞增殖及细胞周期的影响,并探讨其可能的作用机制。方法利用LipofectamineTM2000将Dnmt1 siRNA转染HT-29细胞,实验中将细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组和Dnmt1siRNA组。利用CCK-8试剂盒和流式细胞术分别研究其对HT-29细胞增殖和细胞周期的影响,进一步通过Real-time PCR和Western blotting技术研究与增殖和周期相关基因表达的变化。结果与未处理组和对照siRNA组相比,Dnmt1siRNA组中HT-29细胞的增殖受到明显的抑制(P<0.05)。Dnmt1siRNA组中HT-29细胞在G0/G1期的比率高达66.93%,高于未处理组和对照siRNA组中HT-29细胞在G0/G1期的比率(分别为53.45%和54.71%)(P<0.05)。此外,与未处理组和对照siRNA组相比,Dnmt1siRNA组中HT-29细胞的cdk2,cyclin D1和cyclin E基因的mRNA和蛋白的表达明显下调(P<0.05)。结论干扰Dnmt1能明显诱导HT-29细胞周期静止,其可能的机制与cdk2,cyclins D1和cyclin E基因的表达下调密切相关,操纵该基因有可能成为新的结肠癌的分子治疗靶点。
出处
《广东医学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第14期1798-1800,共3页
Guangdong Medical Journal
基金
中国临床肿瘤学科基金CSCO-康莱特-诺华基金(编号:京ICP备05047300号)
