摘要
目的探讨用Western blot技术检测胞质中细胞色素C(Cyt C)的最佳转膜时间。方法取大鼠小肠上皮细胞,提取胞质蛋白。蛋白定量后,取20μg样品上样于聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。取22μm孔径硝酸纤维素膜(NC膜),电压100 V,分别电转移15、30、60、90、120 min。NC膜用丽春红染色,蒸馏水漂洗后加入Cyt C一抗、二抗孵育,放射自显影显色。结果在转膜过程中,随着时间的增加,转移到NC膜的总蛋白增多;而Cyt C条带出现了先增加(30 min),后减少,再增加(120 min)的趋势。结论 Cyt C虽然是小分子量蛋白,但Western blot的转膜时间并不需要减少,相反要增加到120 min才能得到最佳效果。
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2011年第20期45-46,I0002,共3页
Shandong Medical Journal
基金
中国医学科学院2010协和青年基金
