摘要
目的 :研究起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配关系对基因表达效率的影响。方法 :我们一方面对人IL_2、人IL_8、人IL_6 ,人GM_CSF、人G_CSF、人IL_1ra、人IL_9等全长cDNA序列及 5′末端局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列进行匹配性进行分析 ,寻找序列匹配性与表达效率间的关系 ;另一方面 ,对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′端序列进行沉默突变 ,增强其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列间的匹配性 ,并克隆入pKpL4表达型质粒载体 ,通过大肠杆菌进行表达 ,实验验证序列匹配性与基因表达效率的关系。结果 :分析发现起始密码下游局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482核酸匹配性越好 ,则目的蛋白表达效率越高 ;目的基因编码区内与 16srRNA 3′ +146 9——— +1482间的最大匹配区域越靠近 5′末端 ,目的蛋白表达效率越高。通过对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′末端序列进行沉默突变 ,改善其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列的匹配性后 ,目的蛋白的表达量均呈不同程度地提高。结论 :提高起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配性 ,可增强目的基因的表达效率。
In order to study the correlation between the downstream of initation codon and the efficiency of the initation signals in E.coli.We analysed the complementary between the nucleotides+1469——+1482 of the 16s rRNA to the cDNA sequences of human IL_1ra,IL_2,IL_6,IL_8,IL_9,GMCSF,GCSF,etc that we had been cloned and expressed in E.coli,and found that the nearer the apparent base pairing region to initation codon,the higher the target gene expressed.Subsequently ,the 5′_coding region of the human IL_6 cDNA and human GM_CSF cDNA were silent mutated to rised the base complementary to nucleotides+1469——+1482 of the 16s rRNA and expressed in E.coli,result that the expressing level of human IL_6 and human GM_CSF from 12% rised to 13.8%,and 0 to 3% respectively.Shown that the apparent base pairing region specifies a stimulatory interaction during the translation step.
出处
《川北医学院学报》
CAS
2000年第2期1-4,共4页
Journal of North Sichuan Medical College
基金
四川省青年基金
四川省教委科研基金
