摘要
目的观察载小干扰RNA（siRNAs）纳米微粒沉默B细胞淋巴瘤／白血病-2（bel-2）基因联合纳米砷剂协同抗急性髓性白血病效应。方法凝胶阻滞电泳、荧光显微镜、流式细胞仪及噻唑蓝（MTF）法分别用于评估正聚乙二醇（PEG）-多聚赖氨酸（PLL）负载siRNAs能力、细胞转染效率及对细胞活力影响，Western blot法观察siRNAs沉默靶基因，MTT法评估siRNAs联合纳米砷剂对U937协同抑制效应。结果N／P=10时，PEG—PLL和siRNAs基本复合，U937细胞活力为（85．06±5．80）％，转染效率为（83．70±0．37）％，转染后bcl-2蛋白表达下降为（44．11±4．39）％。空载体、纯砷单药、纳米As单药及联合用药组纠胞活力分别为（99．44±1．45）％、（87．76±2．21）％、（92．98±4．34）％、（67．93±8．16）％（P〈0．05）（砷1．25μmol／L）；（99．56±2．53）％、（54．08±4．46）％、（57．85±2．11）％、（38．60±6．24）％（P〈0．05）（砷2．50μmol／L）；（98．88±1．59）％、（37．62±1．38）％、（51．31±3．14）％、（28．92±4．97）％（P〈0．05）（砷5．00μmol／L）；（97．72±2．55）％、（29．44±4．14）％、（40．18±3．72）％、（20．56±4．97）％（P〈0．05）（砷10．00μmol／L）；（96．65±2．03）％、（21．49±1．60）％、（26．34±0．97）％、（15．90±1．70）％（P〈0．05）（砷20．00μmol／L）。结论PEG—PLL对U937细胞毒性较低、转染效率较高，PEG—PLL／siRNAs沉默bcl-2联合纳米As获得协同抗白血病效应。
Objective To observed the synergetic inhibitory effects on human acute myelogenous leukemia （AML） by nanoparticle-mediated small interfering RNA （siRNAs） and arsenic therapy in vitro. Methods Gel retardation assay, fluorescence microscopy, flow cytometry assay and methyl thiazol tetrazo- lium （MTT） assay was performed to evaluate siRNAs complexation capacity, transfection efficiency and influence on cell viability of polyethylene glycol （PEG）-poly （L-lysine） （PLL）. The down regulation of B cell lymphoma/leukemia-2 （bcl-2） gcne expression was comfirmed by Western blotting assay. The MTr assay was further performed to evaluate the synergetic inhibitory effects on U937 cells by siRNAs and arsenic nanoparticles. Results At N/P ratio of 10, PEG-PLL and siRNAs complexed completely, the cell viability was （ 85.06 ± 5.80 ） %, the transfection efficiency was （ 83.70 ± 0. 37 ） %, and the siRNAs knocked down bcl-2 protein expression up to （44. 11 ± 4. 39）%. When bcl-2 targeted siRNAs was combined with As for the therapy, the enhanced cytotoxicity on U937 cells was observed. The cell viabilities of bPDLLA-, As-sol-, As-NPs-and si ＋ As-NPs-treated group were （99. 44 ±1.45 ） %, （87. 76 ± 2. 21 ） %, （92.98±4.34）%, （67.93±8.16）% （As 1.25 μmol/L, P〈0.05）. （99.56±2.53）%, （54.08± 4.46）%, （57.85 ±2.11）%, （38.60±6.24）% （As 2.50 μmol/L, P〈0.05）. （98.88±1.59）%, （37.62±1.38）%, （51.31 ±3.14）%, （28.92 ±4.97）% （As 5.00 μmol/L, P〈0.05）. （97.72± 2.55）%, （29.44 ±4. 14）%, （40. 18 ±3.72）%, （20.56 ±4.97）% （As 10.00 μmol/L, P〈0.05） and （96.65 ±2.03）%, （21.49±1.60）%, （26.34 ±0.97）%, （15.90 ±1.70）% （As 20.00 μmoL/L, P 〈 0. 05 ）. Conclusion PEG-PLL was charaterized potent siRNAs complexation capacity, low cytotoxicity and high transfection efficiency. Combination of bcl-2 gene silencing and As delivery using nanoparticles exerted enhanced cytotoxicity on U937 ceils.
出处
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期1101-1104,共4页
Chinese Journal of Experimental Surgery
基金
国家自然科学基金资助项目（81072045、81302140）
广东省产学研资助项目（2009/3090300277）
珠海市科技计划资助项目（2013D0401990026）
