摘要
利用ＰＣＲ技术，从人胎盘ｃＤＮＡ文库扩增出４个截短的人血管内皮生长因子受体（Ｆｉｔ－ｌ）ｃＤＮＡ，分别含胞外第２，１－２，２－３，１－３个ｌｏｏｐ，应用酵母双杂交系统对Ｆｌｔ－１的最小配体结合域进行了研究，结果表明，不仅其胞外 １－３ ｌｏｏｐ能与 ｈＶＥＧＦ１６５结合，比其更小的片段 ２－３ ｌｏｏｐ也具有与配体结合的能力．进一步构建了重组表达质粒ｐＰＩＣ９Ｋ／Ｆｌｔ－１（１－３）和 ｐＰＩＣ９Ｋ／Ｆｌｔ－１（２－３），转化 Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母菌 ＧＳ１１５，摇瓶培养，经１％甲醇诱导，表达的 Ｆｌｔ－１以可溶性分子形式存在于上清中，诱导４ｄ的表达量占上清总蛋白质的 ６０％以上．表达产物经 ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ阳离子交换层析和 ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析纯化，纯度达９０％以上．体外生物学活性检测表明，表达的可溶性Ｆｌｔ－１（２－３）具有与Ｆｌｔ－１（１３）接近的结合ｈＶＥＧＦ１６５的能力和抑制ｈＶＥＧＦ１６５对ＨＵＶＥＣ的促增殖功能．进一步的动物模型实验证实，可溶性Ｆｌｔ－１（２－３）具有显著的抑制ｈＶＥＧＦ１６５促进新生血管形成的功能．
出处
《中国科学（C辑）》
CSCD
北大核心
2001年第4期320-326,共7页
Science in China(Series C)
基金
国家"863"计划(批准号:102-08-01-03)
广东省自然科学基金(批准号:001098)
高等学校骨干教师资助项目
