摘要
目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α（ PPARα）对D-氨基半乳糖（ D-GalN）联合脂多糖诱导的小鼠急性肝衰竭（ALF）的作用与机制。方法将C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为对照组、ALF组、WY14643组、3-MA＋WY14643组、对照小干扰RNA（ siRNA）＋WY14643组、自噬相关基因ATG7 siRNA（siAtg7）＋WY14643组，每组8只。通过腹腔注射溶于生理盐水中的D-GalN （700 mg/kg）联合脂多糖（10μg/kg）构建小鼠ALF模型。 WY14643作为PPARα的选择性激动剂于造模前2 h以6 mg/kg通过尾静脉注射；3-MA作为自噬抑制剂于造模前2 h以10 mg/kg通过尾静脉注射；siAtg7作为自噬抑制剂于造模前48 h以50μmol· L^-1· kg^-1过尾静脉注射；对照siRNA于造模前48 h以50μmol· L^-1· kg^-1过尾静脉注射。在D-GalN联合脂多糖注射造模后6 h麻醉小鼠取血，获取肝组织并迅速提取mRNA。组织病理学分析及血清转氨酶活性测定观察肝组织损伤的严重程度；实时定量PCR检测自噬相关基因ATG5、ATG7、溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）及肿瘤坏死因子（ TNF）-α、白细胞介素（ IL）-1β、IL-6、趋化因子配体（ CXCL）-1、CXCL-10的mRNA表达；蛋白质印迹检测自噬相关蛋白LC3、ATG5、ATG7、LAMP1的表达。结果与ALF组相比，WY14643组小鼠肝小叶结构较完整，部分肝细胞呈气球样变，小叶内及汇管区炎细胞浸润不明显，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平较低[（486±56）比（2705±423） U/L，（795±115）比（3709±820）U/L，均P＜0.05]，自噬相关基因LAMP1和蛋白表达更高（mRNA：4.28±0.57比2.67±0.43，P＜0.05）；与WY14643组相比，3-MA＋WY14643组和siAtg7＋WY14643组肝细胞呈大片状坏死，肝索解离，肝小叶结构无法辨认，汇管区及坏死区可见大量中性粒细胞和淋巴细胞等炎细胞浸润，血清ALT、AST水平更高[（2563±576）、（2148±221）U/L和（3474±858）、（3305±632）U/L，均P＜0.05]，促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及趋化因子CXCL-1、CXCL-10的mRNA表达更多（均P＜0.05）。结论 PPAR α可通过促进细胞自噬减轻炎症反应对D-GalN联合脂多糖诱导的小鼠ALF产生保护作用，PPAR α可能成为临床上防治ALF的一个新的、重要的靶点。
Objective To explore the protective effects of peroxisome proliferator-activated receptor-α（ PPAR α） in D-GalN/LPS-induced acute liver failure （ ALF ） and its pathogenetic mechanism.Methods C57BL/6 mice were randomly divided into control ,ALF,WY14643,3-MA＋WY14643,siAtg7 ＋WY14643 and control siRNA ＋WY14643 groups （ n =8 each ） .For inducing ALF , the mice were injected intraperitoneally with D-GalN （ 700 mg/kg ） and LPS （ 10 μg/kg ）.The selective activator of PPAR α-WY14643 （6 mg/kg） and autophagy inhibitor 3-MA （10 mg/kg） were administered via tail vein at 2 hours prior to D-GalN/LPS exposure.The autophagy inhibitor siAtg7 （50 μmol＆#183; L-1 ＆#183; kg -1 ） and control siRNA （50 μmol＆#183; L-1 ＆#183; kg-1 ） were dosed via tail vein at 48 hours prior to D-GalN/LPS exposure.At 6 hours afterD-GalN/LPS dosing, the mice were anesthetized and blood sample collected.Liver samples were freshly harvested for preparing mRNA.Liver histology and serum levels of aminotransferase （ ALT ） , aspartate aminotransferase （AST） were measured as markers of hepatic damage.Autophagy related genes （ATG5, ATG7,LAMP1）,inflammatory cytokines （TNF-α,IL-1β,IL-6） and chemokines （CXCL-1,CXCL-10） were detected by real-time quantitative PCR.Differential protein expressions of LC3, ATG5, ATG7, LAMP1 in autophagy pathways were detected by Western blotting.Results Compared with the model group , the hepatic architecture of WY 14643-treated mice was better preserved.And the serum levels of ALT and AST were significantly lower （（486 ±56）vs（2 705 ±423）U/L,（795 ±115）vs（3 709 ±820）U/L,both P＆lt;0.05） while the expression of autophagy related gene LAMP 1 and protein levels were significantly higher （mRNA：4.28 ±0.57 vs 2.67 ±0.43,P ＆lt;0.05）.As compared with WY14643-treated ALF,the mice receiving 3-MA or ATG7-specific siRNA suffered severe acute liver failure again as evidenced by worse preserved hepatic architecture,significantly higher levels of ALT and AST （（2 563 ±576）,（2 148 ±221） U/L and （3 474 ±858）,（3 305 ±632） U/L,all P＆lt;0.05）and mRNA levels of proinflammatory cytokines and chemokines （ all P＆lt;0.05 ）.Conclusions PPARα-mediated induction of autophagy ameliorates liver injury in ALF by attenuating inflammatory responses.Thus it may become a potential target for ALF treatment.
出处
《中华医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第26期2059-2063,共5页
National Medical Journal of China
