摘要
目的:探索适合表皮生长因子受体(EGFR)内吞转运免疫荧光观察的固定和渗透方法。方法:采用OLYMPUS BX61荧光显微镜及成像系统,对不同固定剂(4%多聚甲醛,甲醇,4%多聚甲醛+甲醇,丙酮,丙酮与甲醇体积比1∶1的混合液)配合不同渗透方法(0.04%saponin,0.1%Triton X-100)得到的EGF刺激后0 min和15 min两个时间点的EGFR免疫荧光图像进行对比分析。结果:0 min时EGFR主要定位于细胞质膜,4%多聚甲醛+甲醇的固定方法,配合使用0.04%saponin,可以观察到细胞膜上明显、清晰、连续的EGFR信号。针对EGF刺激15 min后内吞进入细胞的EGFR,不同固定方法对观察效果没有明显影响。但与配合使用0.04%saponin相比,0.1%Triton X-100进行渗透能充分暴露EGFR在细胞核内的信号。结论:温和的固定和渗透方法可获得较好的EGFR膜定位信号。针对内吞转运中的EGFR需要较强的渗透剂,以确定EGFR在细胞内准确的定位。
出处
《天津医科大学学报》
2015年第3期264-267,共4页
Journal of Tianjin Medical University
