摘要
目的探究不同浓度肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人眼睫状体肌细胞体外存活率及其活性的影响。方法本研究选取的研究标本为体外培养的人眼睫状体肌细胞,观察组细胞来源于2012年1月至2014年1月广东省增城市人民医院眼科收治的10例（10只眼）原发性青光眼患者,患者眼压药物控制效果不佳,采用手术方法治疗;对照组细胞来源于2012年1月至2014年1月广东省增城市人民医院非眼部疾病死亡的患者。在细胞培养4~5代后,以5,10,15,25 ng/ml等4个浓度梯度将TNF-α加入体外培养的人眼睫状体肌细胞培养液中,分别于24,48,72 h后进行肌力检查,流式细胞检测细胞的存活率和活性。两组细胞的存活率和细胞活性以均数±标准差（x珋±s）的形式表示,并采用三因素重复测量方差分析的方法进行组间比较;当比较结果有统计学意义时,进一步采用SNK的方法进行组内比较。结果 TNF-α浓度为5 ng/ml时,细胞培养24,48,72 h后观察组细胞的存活率分别为（49.20±6.14）%,（55.63±4.21）%,（59.74±5.78）%,对照组细胞的存活率分别为（72.65±10.05）%,（75.93±11.25）%,（86.44±13.95）%;TNF-α浓度为10 ng/ml时,细胞培养24,48,72 h后观察组细胞的存活率分别为（61.24±8.52）%,（72.69±10.95）%,（83.66±12.47）%,对照组细胞的存活率分别为（85.94±15.87）%,（89.41±15.92）%,（93.67±17.25）%;TNF-α浓度为15 ng/ml时,细胞培养24,48,72 h后观察组细胞的存活率分别为（50.21±6.04）%,（57.28±5.09）%,（61.05±6.89）%,对照组细胞的存活率分别为（70.59±9.85）%,（72.65±10.96）%,（80.26±12.94）%;TNF-α浓度为25 ng/ml时,细胞培养24,48,72 h后观察组细胞的存活率分别为（40.16±3.26）%,（48.22±4.15）%,（50.46±4.65）%,对照组细胞的存活率分别为（69.36±8.85）%,（72.83±9.98）%,（79.84±11.54）%。对照组细胞的存活率高于观察组,差异有统计学意义（F=24.5,P〈0.05）。不同时间、不同TNF-α浓度时观察组细胞的存活率比较,差异有统计学意义（F=11.30,P〈0.05）,且在TNF-α浓度为10 ng/ml时细胞的存活率最高,与其他3种浓度比较,差异有统计学意义（t=2.86,2.23,3.82;P〈0.05）。不同时间、不同TNF-α浓度时对照组细胞的存活率比较,差异有统计学意义（F=12.21,P〈0.05）,在TNF-α浓度为10 ng/ml时细胞的存活率最高,与其他3种浓度比较,差异有统计学意义（t=2.87,3.22,3.34,P〈0.05）。TNF-α浓度为5 ng/ml时,细胞培养24,48,72h后观察组细胞的活性分别为（120.33±14.96）%,（135.92±18.55）%,（140.32±19.58）%,对照组细胞的活性分别为（150.26±19.65）%,（173.35±22.57）%,（191.33±24.71）%;TNF-α浓度为10ng/ml时,细胞培养24,48,72 h后观察组细胞的活性分别为（135.45±19.32）%,（176.95±23.64）%,（200.55±26.87）%,对照组细胞的活性分别为（185.25±25.43）%,（192.63±25.96）%,（200.45±26.45）%;TNF-α浓度为15 ng/ml时,细胞培养24,48,72 h后观察组细胞的活性分别为（130.40±16.95）%,（150.26±21.54）%,（177.89±23.21）%,对照组细胞的活性分别为（140.26±17.84）%,（170.65±21.33）%,（182.26±23.85）%;TNF-α浓度为25 ng/ml时,细胞培养24,48,72 h后观察组细胞的活性分别为（106.85±10.69）%,（115.35±11.47）%,（120.42±11.53）%,对照组细胞的活性分别为（135.98±16.33）%,（165.20±21.06）%,（174.35±21.84）%,对照组的细胞活性高于观察组,差异有统计学意义（F=19.20,P〈0.05）。不同时间、不同TNF-α浓度时观察组细胞的活性比较,差异有统计学意义（F=12.30,P〈0.05）,在TNF-α浓度为10 ng/ml时细胞的活性最高,与其他3种浓度比较,差异有统计学意义（t=2.96,2.02,3.41;P〈0.05）。不同时间、不同TNF-α浓度时对照组细胞的活性比较,差异有统计学意义（F=14.31,P〈0.05）,在TNF-α浓度为10 ng/ml时细胞的活性最高,与其他3种浓度比较,差异有统计学意义（t=2.72,3.12,3.74;P〈0.05）。结论 TNF-α浓度为10 ng/ml时人眼睫状体肌细胞的存活率及其活性最高,浓度为25 ng/ml时细胞的存活率及其活性最低;且随着时间的增加,人眼睫状体肌细胞的存活率和活性都在增加。
Objective To determine the effect of tumor necrosis factor alpha（ TNF-α） on the survival and functional activities of human ciliary muscle cells in vitro. Methods Primary ciliary muscle cells were isolated from10 primary glaucoma patients who underwent surgical treatment in our department between January,2012 and January,2014 and from control subjects who died of non-eye disease during the same time period. At passage 4-5,cells were treated with TNF-α at 5,10,15,or 25 ng / ml for 24,48 or 72 h.Cell viability and survival rate were determined by flow cytometry. Results At all time points and TNF-αconcentrations,the survival rate was significantly lower in cells isolated glaucoma than in cells from control subjects（ P〈0. 05）. In cells from glaucoma patients,the survival rate was significantly higher after TNF-αtreatment at 10 ng / ml than at other three concentrations（ P〈0. 05）. Conclusion TNF-α affects ciliary muscle cell survival and activity in a dose- and time-dependent manner. At the concentrations tested,10 ng / ml has the least detrimental effect and 25 ng / ml has the highest detrimental effect on ciliary muscle cell survival.
出处
《中华眼科医学杂志（电子版）》
2015年第1期5-9,共5页
Chinese Journal of Ophthalmologic Medicine(Electronic Edition)
基金
广东省医学科研基金(B2014385)
