摘要
目的合成沉默p38基因的特异小分子干扰RNA（siRNA），通过模拟的肺移植模型，探讨p38 siRNA对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）缺氧复氧损伤的影响。
方法将p38 siRNA或非靶向siRNA转染至大鼠PMVEC并暴露于模拟的肺移植型。再灌注2 h和4 h，检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、丙二醛水平、超氧化物歧化酶（SOD）含量和细胞凋亡；检测细胞培养上清液白细胞介素（IL）-1、IL- 6和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；检测细胞核转录因子-κB（NF-κB）和激活蛋白1（AP-1）的表达。结果与非靶向siRNA比较，p38 siRNA在再灌注2 h和4 h降低LDH漏出率（22.3±5.7与45.1±6.2，46.3±7.3与75.6±12.4），减少丙二醛水平（4.1±2.2与7.1±2.1，3.9±0.5与6.1±1.2），增加SOD含量（12.8±3.2与9.4±1.1，10.8±1.2与7.0±1.1），降低IL-1（288±89与592±95, 380±94与775±175）和IL-6（38±5与70±12，80±20与118±17）水平，抑制细胞凋亡（2.8±0.6与4.1±1.4，3.1±1.1与5.8±1.3）。p38 siRNA对TNF-α的表达无影响。p38 siRNA在再灌注2 h和4 h减少NF-κB p65磷酸化和NF-κB抑制剂激酶β磷酸化，增加NF-κB抑制剂α表达，但不影响AP-1的磷酸化表达。结论通过抑制NF-κB激活经典通路，p38 siRNA减轻大鼠PMVEC氧化应激、炎症和细胞凋亡，保护细胞完整性，减轻缺氧及复氧损伤。
ObjectiveUsing small interfering RNA （siRNA） against p38 and simulated lung transplantation model, we discussed the effect of p38 siRNA on hypoxia/reoxygenation injury of pulmonary microvascular endothelial cells （PMVECs） after lung transplantation.MethodsWe transfected the PMVECs with p38 siRNA or non-targeting （NT） siRNA. After 48 h, these cells were exposed to simulated ischemia-reperfusion. At 2 h and 4 h of reperfusion, we detected lactate dehydrofenase （LDH） leakage rate, malondialdehyde （MDA） levels, superoxide dismutase （SOD） activity, cell apoptosis, and the serum levels of interleukin （IL）-1, IL-6 and tumor necrosis factor （TNF）-α. Protein levels of p38, NF-κB and AP-1 were detected. Untreated PMVECs served as the negative control.ResultsAs compared with NT siRNA, p38 siRNA reduced LDH leakage rate （22.3±5.7 vs. 45.1±6.2 and 46.3±7.3 vs. 75.6±12.4）, decreased MDA levels （4.1±2.2 vs. 7.1±2.1 and 3.9±0.5 vs. 6.1±1.2）, increased SOD activity （12.8±3.2 vs. 9.4±1.1 and 10.8±1.2 vs. 7.0±1.1）, and inhibited apoptosis （2.8±0.6 vs. 4.1±1.4 and 3.1±1.1 vs. 5.8±1.3）. p38 siRNA reduced the levels of IL-1 （288±89 vs. 592±95 and 380±94 vs. 775±175） and IL-6 （38±5 vs. 70±12 and 80±20 vs. 118±17）, however, had no influence on TNF-α level. Silencing p38 gene decreased phosphorylation of p65 and inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase β, and increased inhibitor of nuclear factor kappa-B expression. However, p38 siRNA had no effect on the phosphorylation of c-Jun and c-Fos.ConclusionThrough inhibiting the NF-κB classic activation pathway, p38 siRNA reduced oxidative stress, inflammation and apoptosis of rat PMVECs, protected membrane integrity, and reduced hypoxia/reoxygenation injury.
作者
谭晶
王林林
崔晓光
周华成
杨万超
Tan Jing;Wang Linlin;Cui Xiaoguang;Zhou Huacheng;Yang Wanchao.(Department of Anesthesiology, Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin 150086, China)
出处
《中华器官移植杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期104-108,共5页
Chinese Journal of Organ Transplantation
基金
黑龙江省自然科学基金（QC2015125）
哈尔滨医科大学附属第二医院科研基金（KYBS2015-05）
关键词
肺微血管内皮细胞
缺血-再灌注
P38
核因子κB
激活蛋白-1
Pulmonary microvascular endothelial cells
Ischemia-reperfusion
p38
Nuclear factor kappa B
Activator protein-1
