摘要
目的探讨微小RNA 147a (miR-147a)对子宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其可能的作用机制。方法(1)应用实时RCR技术检测miR-147a和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA在正常子宫上皮细胞系HcerEpic细胞以及子宫颈癌细胞系C-33A、CaSKi、HeLa细胞中的表达,选取其中低表达miR-147a和高表达EGFR mRNA的子宫颈癌细胞系(即HeLa细胞)进行后续实验。(2)实验分为3组,即转染组[转染miR-147a模拟物(mimics-miR-147a)]、阴性对照组[转染阴性对照模拟物(mimics-NC)]、空白对照组(未转染),四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后3组HeLa细胞的存活率,克隆形成实验检测转染后3组HeLa细胞的增殖能力,穿膜小室(transwell小室)的体外侵袭实验检测转染后3组HeLa细胞的侵袭能力,实时RCR技术和蛋白印迹法检测转染后3组HeLa细胞中EGFR mRNA和蛋白的表达。(3)实验分为4组,即mimics-NC+EGFR野生型(EGFR-WT)组、mimics-NC+EGFR突变型(EGFR-Mut)组、mimics-miR-147a+EGFR-WT组、mimics-miR-147a+EGFR-Mut组,采用双荧光素酶报告基因实验检测4组肾上皮细胞系293T细胞中EGFR基因的启动子活性(以相对发光值表示)。结果(1)C-33A、CaSKi、HeLa细胞中EGFR mRNA的表达水平均显著高于HcerEpic细胞(P<0.05),其中HeLa细胞中EGFR mRNA的表达水平最高;C-33A、CaSKi、HeLa细胞中miR-147a表达水平均显著低于HcerEpic细胞(P<0.01),其中HeLa细胞中miR-147a的表达水平最低。故选用HeLa细胞进行以下实验。(2)转染组、阴性对照组、空白对照组HeLa细胞的存活率分别为(63.1±1.2)%、(99.2±1.8)%、(100.0±1.5)%,克隆形成率分别为(51.3±0.3)%、(96.7±0.3)%、(100.0±0.3)%,穿膜细胞数分别为(12.3±3.1)、(44.3±4.5)、(48.3±2.5)个,上述指标转染组均显著低于阴性对照组、空白对照组(P<0.01);转染组、阴性对照组、空白对照组HeLa细胞中EGFR mRNA的表达水平分别为0.32±0.04、0.97±0.06、1.00±0.04,EGFR蛋白的表达水平分别为0.32±0.03、0.57±0.03、0.62±0.03,转染组EGFR mRNA和蛋白的表达水平均显著低于阴性对照组、空白对照组(P<0.01)。(3)双荧光素酶报告基因实验检测显示,mimics-NC+EGFR-WT组、mimics-NC+EGFR-Mut组、mimics-miR-147a+EGFR-WT组、mimics-miR-147a+EGFR-Mut组293T细胞中EGFR基因的启动子活性分别为3.57±0.37、3.83±0.25、1.09±0.13、3.63±0.46,mimics-miR-147a+EGFR-Mut组显著高于mimics-miR-147a+EGFR-WT组(P<0.01),mimics-miR-147a+EGFR-WT组显著低于mimics-NC+EGFR-WT组(P<0.01),mimics-NC+EGFR-WT组与mimics-NC+EGFR-Mut组比较无显著差异(P>0.05)。结论miR-147a表达上调通过调控靶基因EGFR的表达抑制子宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭。
出处
《中华妇产科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期557-560,共4页
Chinese Journal of Obstetrics and Gynecology
