摘要
目的探讨miR-484在宫颈癌细胞中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响,探讨具体作用机制是否与肝细胞核因子1A(HNF1A)有关。方法研究起止时间2021年11月15日—2022年3月10日。正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7与宫颈癌细胞HeLa、SiHa、Caski传代培养,采用qRT-PCR法检测各细胞中miR-484与HNF1A mRNA的表达,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-484与HNF1A的靶向关系。将宫颈癌HeLa细胞分为miR-NC组(转染miRNA空质粒)、miR-484组(转染miR-484 mimics)、anti-miR-484组(转染miR-484 inhibitor)、si-NC组(转染siRNA空质粒)、si-HNF1A组(转染si-HNF1A)、anti-miR-484+si-NC组(转染miR-484 inhibitor和siRNA空质粒)、anti-miR-484+si-HNF1A组(转染miR-484 inhibitor和si-HNF1A),采用MTT法检测细胞增殖情况;采用Transwell法检测细胞迁移情况;采用Western Blot法检测细胞中CyclinD1、CDK4、β-catenin蛋白表达情况。结果HNF1A mRNA在Ect1/E6E7、Caski、SiHa、HeLa细胞中的表达量分别为(1.07±0.11)、(1.47±0.12)、(1.51±0.14)、(1.86±0.20);miR-484mRNA在Ect1/E6E7、Caski、SiHa、HeLa细胞中的表达量分别为(1.14±0.10)、(0.56±0.06)、(0.52±0.05)、(0.33±0.03)。miR-NC组HNF1A-WT和HNF1A-MUT荧光素酶活性分别为(1.03±0.10)和(1.01±0.10),miR-484组HNF1A-WT和HNF1A-MUT荧光素酶活性分别为(0.42±0.06)和(0.98±0.09)。与miR-NC组比较,miR-484组显著抑制HNF1A-WT荧光素酶活性(t=12.813,P<0.05),对HNF1A-MUT荧光素酶活性无显著影响(t=0.546,P>0.05)。与miR-NC组比较,miR-484组HeLa细胞中miR-484表达显著上调,细胞活力显著降低,迁移能力显著下降,CyclinD1、CDK4、β-catenin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。与miR-NC组比较,anti-miR-484组HeLa细胞中miR-484表达显著下调,细胞活力显著升高,迁移能力显著上升,CyclinD1、CDK4、β-catenin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-HNF1A组HeLa细胞中HNF1A mRNA表达显著下调,细胞活力显著降低,迁移能力显著降低,CyclinD1、CDK4、β-catenin蛋白表达显著下调(均P<0.05)。与si-NC组比较,anti-miR-484+si-NC组HeLa细胞中miR-484表达显著降低,HNF1A mRNA表达显著升高,细胞活力与迁移能力均显著升高,CyclinD1、CDK4、β-catenin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与anti-miR-484+si-NC组比较,anti-miR-484+si-HNF1A组HeLa细胞中miR-484表达差异无统计学意义(P>0.05),HNF1A mRNA表达显著降低,细胞活力与迁移能力显著降低,CyclinD1、CDK4、β-catenin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论miR-484过表达可能通过靶向抑制HNF1A表达而抑制宫颈癌细胞增殖、迁移。
出处
《中国妇幼保健》
CAS
2024年第4期725-729,共5页
Maternal and Child Health Care of China
