骨质疏松持续补钙导致高钙危象1例及文献复习 被引量：1

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作者 侯立安 宋桉 +4 位作者 王鸥 丁文一 徐二木 刘茜 夏良裕 《标记免疫分析与临床》 CAS 2023年第2期219-222,共4页

目的分析1例86岁女性患者高钙危象的实验室检验结果,分析高钙血症的病因,进一步为临床诊断提供参考依据。方法分析1例86岁高钙危象患者在疾病初期的实验室检查结果,以及停用钙剂2月后实验室检查结果,比较两次结果的变化,并分析变化产生... 目的分析1例86岁女性患者高钙危象的实验室检验结果,分析高钙血症的病因,进一步为临床诊断提供参考依据。方法分析1例86岁高钙危象患者在疾病初期的实验室检查结果,以及停用钙剂2月后实验室检查结果,比较两次结果的变化,并分析变化产生的原因,助力临床对患者高钙血症病因的鉴别诊断。结果该患者首诊时因长期服用钙剂抑制了甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)的分泌,PTH处于正常水平,停用钙剂后PTH异常升高。该患者最终诊断为原发性甲状旁腺功能亢进症(primary hyperparathyroidism,PHPT)。结论该患者高钙危象的原因为,在PHPT基础上,大剂量补充碳酸钙和骨化三醇,加重了高钙血症,产生呕吐症状,呕吐进一步加重血钙升高。 展开更多

关键词 高钙血症 高钙危象 原发性甲状旁腺功能亢进 甲状旁腺素

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4-苯基丁酸抗内质网应激诱导胰岛β细胞凋亡 被引量：7

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作者 孙琦 向若兰 +4 位作者 张文龙 杨燕丽 李娟 张葵 丁文一 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期784-788,共5页

目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛β细胞内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡的保护作用。方法高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立SD大鼠T2DM模型,造模成功后取其中10只给予4-PBA灌胃20d。放射免疫法检测... 目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛β细胞内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡的保护作用。方法高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立SD大鼠T2DM模型,造模成功后取其中10只给予4-PBA灌胃20d。放射免疫法检测各组大鼠游离脂肪酸(FFA)、血糖及胰岛素的变化。醛品红染色观察胰岛形态改变,RT-PCR检测内质网相关蛋白(Caspase-3、GRP78、CHOP)的mRNA表达变化。结果高脂对照组(n=10)和T2DM组(n=8)大鼠血清FFA比正常对照组(n=10)显著增加,4-PBA治疗后显著下降(n=8)。4-PBA治疗升高了T2DM造成的血清胰岛素水平降低,并降低了T2DM引起的高血糖。醛品红染色显示,T2DM大鼠胰岛萎缩,数量显著下降,胰岛细胞胞质内出现空泡,4-PBA治疗后胰岛数量相比T2DM组有所增多。与对照组相比,T2DM组Caspase-3和CHOP的mRNA表达升高,4-PBA治疗后显著降低。结论 4-PBA通过CHOP途径减轻ERS对胰岛β细胞的损伤,抑制胰岛细胞的过度凋亡,保护胰岛β细胞功能,从而延缓2型糖尿病的发展。 展开更多

关键词 2型糖尿病 内质网应激 4-苯基丁酸 放射免疫法 醛品红染色 反转录一聚合酶链反应 大鼠

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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264.7细胞自噬 被引量：5

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作者 安志远 丁文一 +1 位作者 郑春明 黄骁舾 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2267-2270,2276,共5页

目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,Omp A)对RAW264. 7细胞的自噬诱导作用。方法:建立Omp A刺激RAW264. 7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blo... 目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,Omp A)对RAW264. 7细胞的自噬诱导作用。方法:建立Omp A刺激RAW264. 7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blot和透射电子显微镜检测Omp A对RAW264. 7细胞自噬的影响。结果:Omp A可以引起自噬蛋白LC3B-II表达升高,并抑制Akt/mTOR/p70S6K的磷酸化水平;雷帕霉素可以进一步降低mTOR和p70S6K磷酸化,并提高Omp A引起的LC3B-II表达升高。结论:鲍曼不动杆菌Omp A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264. 7细胞自噬。这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌引起自噬的分子机制及找到对抗其感染的新方法提供理论依据。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白A RAW264.7细胞 自噬 Akt/mTOR/p70S6K信号通路

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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A真核表达载体构建及其诱导Hela细胞不完全自噬 被引量：6

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作者 安志远 黄骁舾 丁文一 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期996-1002,共7页

目的构建鲍曼不动杆菌ATCC19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)的真核表达载体pEGFP-OmpA,研究OmpA对Hela细胞自噬的影响。方法采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌ATCC19606的OmpA基因,将其... 目的构建鲍曼不动杆菌ATCC19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)的真核表达载体pEGFP-OmpA,研究OmpA对Hela细胞自噬的影响。方法采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌ATCC19606的OmpA基因,将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1,以构建重组质粒pEGFP-OmpA;用脂质体转染法将其转染Hela细胞;流式细胞术、细胞免疫荧光和Western blot检测OmpA表达水平;激光共聚焦显微镜检测OmpA在Hela细胞中的定位;Western blot及透射电子显微镜检测OmpA对Hela细胞自噬的影响。结果经双酶切及测序鉴定表明pEGFP-OmpA质粒构建成功;OmpA可以大量表达于Hela细胞的细胞质和细胞核中;OmpA可导致Hela细胞中自噬相关蛋白LC3BⅡ、p62和Beclin-1表达升高,而且在Hela细胞中发现自噬小体;OmpA会干扰p62降解,引发不完全自噬。结论本研究成功构建pEGFP-OmpA真核表达载体,它可以在Hela细胞中高效表达,并可导致Hela细胞不完全自噬,这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌OmpA引起自噬的机制奠定基础。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白A HELA细胞系 不完全自噬

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轧三小型棒材全连轧工艺介绍

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作者 丁文一 《天津冶金》 CAS 1998年第3期22-25,共4页

介绍了天津轧三制钢公司一分厂小型棒材全连轧改造工艺流程、工艺设备参数、孔型系统的选择。改造后运行一年达到了设计能力,实现了计算机在线控制,出口线速达16m/s。产品质量好,定尺率高,成本低。

关键词 棒材 全连轧 轧制 计算机

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轧三CIMS应用实践与体会

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作者 丁文一 《天津冶金》 CAS 1999年第B10期27-32,共6页

CIMS(计算机集成制造系统)在我国已被列为国家863高技术计划中自动化领域的一个主题。文章介绍了天津轧三制钢公司实施CIMS工程的特点、工程目标、系统总体结构及实施产生的效果,对流程工业,CIMS有着直接的示范意义。

关键词 轧制 轧钢企业 轧钢 CIMS

全文增补中

CIM与轧钢企业CIMS

7

作者 梁雨峰 钟约先 +4 位作者 鹿守理 沈维祥 丁文一 万秋伟 张贺利 《天津冶金》 CAS 1998年第3期9-12,共4页

CIMS是下个世纪制造业组织生产的主导模式,能够有效提高轧钢企业应变能力和新产品开发能力。文章回顾了CIMS的形成与发展,从概念、功能和技术三个角度分析轧钢企业CIMS的内容,简要探讨了轧钢企业CIMS中的关键技术与方法。

关键词 轧钢企业 CIMS CIM 计算机

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LncRNA-GAS5对鲍曼不动杆菌降解HeLa细胞中SNAP29的调控作用

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作者 丁文一 安志远 《微生物与感染》 CAS 2022年第4期220-226,共7页

本文旨在构建LncRNA-GAS5(长链非编码RNA-生长抑制特异性转录本5,long non-coding RNAgrowth arrest-specific transcript 5)的真核过表达载体及敲减载体,研究鲍曼不动杆菌对突触体相关蛋白29(synaptosomal-associated protein 29,SNAP... 本文旨在构建LncRNA-GAS5(长链非编码RNA-生长抑制特异性转录本5,long non-coding RNAgrowth arrest-specific transcript 5)的真核过表达载体及敲减载体,研究鲍曼不动杆菌对突触体相关蛋白29(synaptosomal-associated protein 29,SNAP29)表达的影响及LncRNA-GAS5在其中发挥的调控作用。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增LncRNA-GAS5基因,将其克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,形成pcDNA3.1-GAS5真核表达载体;通过RNA干扰技术,设计敲减GAS5的寡核苷酸序列,将其构建至pRNAT-U6.1/Neo载体中,形成pRNAT-U6.1-GAS5敲减载体;采用实时荧光定量PCR法检测GAS5的表达,以确定是否成功过表达和敲减;采用蛋白免疫印迹法检测过表达或敲减GAS5后HeLa细胞中SNAP29表达的变化,并检测鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞后不同时间点SNAP29的表达,以及敲减或过表达GAS5后再感染鲍曼不动杆菌的HeLa细胞中SNAP29的表达。结果显示:pcDNA3.1-GAS5和pRNAT-U6.1-GAS5构建成功;pcDNA3.1-GAS5可使LncRNA-GAS5在HeLa细胞中大量表达,而pRNAT-U6.1-GAS5可使HeLa细胞中GAS5表达明显减少;过表达LncRNA-GAS5可使HeLa细胞中SNAP29表达减少,而敲减LncRNA-GAS5可使SNAP29表达增加;随着鲍曼不动杆菌感染时间延长,HeLa细胞中SNAP29的表达减少,敲减LncRNA-GAS5可使SNAP29表达回复,而过表达LncRNA-GAS5可增强SNAP29的降解。结果提示,本研究成功构建了LncRNA-GAS5的过表达和敲减载体,并发现其对SNAP29表达具有负向调控作用,表明鲍曼不动杆菌对SNAP29的降解依赖LncRNA-GAS5,为进一步探讨鲍曼不动杆菌引起细胞自噬降解障碍的深层机制奠定了理论基础。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 LncRNA-GAS5 SNAP29 HELA细胞

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鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞与YY1互作的差异蛋白鉴定

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作者 丁文一 安志远 《生物技术》 CAS 2023年第1期9-13,共5页

[目的]鉴定鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞前后与YY1互作的差异蛋白。[方法]用脂质体转染法在HeLa细胞中过表达YY1;之后用Co-IP技术捕获与YY1相互作用的蛋白质;最后利用高效液相色谱质谱联用技术鉴定互作差异蛋白。用GO注释和KEGG分析预测蛋... [目的]鉴定鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞前后与YY1互作的差异蛋白。[方法]用脂质体转染法在HeLa细胞中过表达YY1;之后用Co-IP技术捕获与YY1相互作用的蛋白质;最后利用高效液相色谱质谱联用技术鉴定互作差异蛋白。用GO注释和KEGG分析预测蛋白质的功能。[结果]经Co-IP和蛋白银染发现鲍曼不动杆菌感染组和YY1捕获组与IgG组比较在45~55 kDa和70~100 kDa处有明显的差异条带;质谱结果显示YY1捕获组的特有蛋白有81个,GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核及核膜,具有RNA结合功能,主要参与了RNA剪切的生物学过程;与IgG组和YY1捕获组比较在鲍曼不动杆菌感染组中获得了SFRS4、CPSF2、LUC7L2和U2AF65这些差异蛋白。GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核散斑,具有RNA结合功能,主要参与了mRNA剪切和核输出的生物学过程。[结论]鲍曼不动杆菌感染的HeLa细胞中与YY1作用的蛋白均参与了RNA剪切过程,提示鲍曼不动杆菌很可能利用这些蛋白来调节YY1,为进一步研究鲍曼不动杆菌与YY1的相互作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 转录因子YY1 Co-IP/MS技术 HELA细胞 生信分析

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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活 被引量：7

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作者 安志远 丁文一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期146-150,共5页

目的建立OmpA过表达慢病毒载体并观察其对RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活。方法以鲍曼不动杆菌ATCC 19606为模板,设计引物扩增OmpA基因,将其克隆至慢病毒表达载体pCDH-MSCV-copGFP中。将此表达质粒和辅助质粒共转染HEK293T细胞包装病... 目的建立OmpA过表达慢病毒载体并观察其对RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活。方法以鲍曼不动杆菌ATCC 19606为模板,设计引物扩增OmpA基因,将其克隆至慢病毒表达载体pCDH-MSCV-copGFP中。将此表达质粒和辅助质粒共转染HEK293T细胞包装病毒,浓缩病毒上清液并用GFP报告基因法测定病毒滴度;用包装病毒颗粒感染RAW264.7细胞48h,Real-time PCR法检测OmpA的mRNA表达水平,用Western blot法检测OmpA蛋白以及感染后NLRP3炎症小体相关蛋白。结果成功构建OmpA过表达慢病毒载体并在HEK293T细胞中包装得到病毒,经测定病毒滴毒为1.5×109 TU/mL;重组OmpA病毒感染RAW264.7细胞表达OmpA蛋白,该蛋白能引起NLRP3炎症小体激活。结论成功构建OmpA过表达慢病毒载体并证明OmpA可激活RAW264.7细胞NLRP3炎症小体。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白A 慢病毒包装 RAW264.7细胞 NLRP3炎症小体

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鲍曼不动杆菌Omp34经线粒体途径诱导HeLa细胞凋亡 被引量：4

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作者 安志远 丁文一 《生物技术》 CAS 2018年第4期323-328,396,共7页

[目的]构建鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)外膜蛋白34(outer membrane protein 34,Omp34)的表达载体pcDNA3.1/myc-His-Omp34,研究Omp34引起HeLa细胞凋亡的机制。[方法]PCR扩增目的基因Omp34,将其克隆至载体pcDNA3.1/myc-His;菌... [目的]构建鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)外膜蛋白34(outer membrane protein 34,Omp34)的表达载体pcDNA3.1/myc-His-Omp34,研究Omp34引起HeLa细胞凋亡的机制。[方法]PCR扩增目的基因Omp34,将其克隆至载体pcDNA3.1/myc-His;菌液PCR和测序筛选阳性克隆;将pcDNA3.1/myc-His-Omp34转染HeLa细胞;反转录PCR和Western Blot检测Omp34在HeLa细胞中的表达;CCK8实验检测细胞增殖抑制率;JC-1探针检测线粒体跨膜电位;透射电镜观察HeLa细胞线粒体结构,Western Blot鉴定HeLa细胞线粒体凋亡相关蛋白。[结果]成功构建pcDNA3.1/myc-His-Omp34真核表达载体;并且Omp34可抑制HeLa细胞增殖,引起线粒体损伤及跨膜电位崩溃,导致促凋亡蛋白Bax和Bad表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL表达降低。[结论]成功构建pcDNA3.1/mycHis-Omp34表达载体,并证明Omp34可经线粒体途径导致HeLa细胞凋亡。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白34 HELA细胞系 线粒体 细胞凋亡

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