皮肤源性再程序化神经干细胞的制备以及定向分化为神经细胞的体外研究 被引量：2

1

作者 代学良 程峰 +2 位作者 郝怀勇 钱腾达 李立新 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期319-323,共5页

目的:研究制备皮肤源性再程序化神经干细胞以及诱导其定向分化为神经细胞的可行性。方法:体外培养大鼠皮肤来源前体细胞(skin-derived precursors,SKPs)并纯化、鉴定,用含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体系统作为基因转染工具,将第... 目的:研究制备皮肤源性再程序化神经干细胞以及诱导其定向分化为神经细胞的可行性。方法:体外培养大鼠皮肤来源前体细胞(skin-derived precursors,SKPs)并纯化、鉴定,用含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体系统作为基因转染工具,将第3代SKPs分3组:A组为慢病毒载体介导neurogenin2(Ngn2)基因转染的SKPs;B组为空载体慢病毒转染的SKPs;C组为未进行慢病毒介导基因转染的SKPs;7天后加入无生长因子含10%胎牛血清的诱导培养基诱导7天。光镜下观察比较各组细胞形态变化以及免疫荧光镜下研究各组SKPs诱导后定向分化为神经细胞的差异。结果:A组SKPs转基因后到第7天绿色荧光达到高峰,并可持续稳定表达绿色荧光至第8代;诱导7天后绝大部分细胞类似神经细胞,胞体呈梭形或椭圆形,有多个突起伸出;免疫荧光结果显示90.98%细胞表达微管相关蛋白-2(MAP-2),62.23%细胞表达神经元特异性蛋白NeuN。B组SKPs在空病毒转染7天以后有绿色荧光;诱导7天以后大多数细胞较诱导前无明显变化;免疫荧光结果显示,有34.35%的细胞表达MAP-2,无神经元特异性蛋白NeuN的表达。C组SKPs无绿色荧光;诱导7天以后大多数细胞较诱导前无明显变化;免疫荧光结果显示,29.54%的细胞表达MAP-2,无神经元特异性蛋白NeuN的表达。结论:慢病毒介导Ngn2基因转染SKPs可以制备出皮肤源性再程序化的神经干细胞,并提高其定向分化为神经细胞的能力。 展开更多

关键词 皮肤来源前体细胞 neurogenin2 再程序化 神经分化

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Ngn2促进皮肤干细胞神经分化的电生理学及其机制研究 被引量：1

2

作者 代学良 孙秀海 +3 位作者 李立新 王芳 王法钊 李涛 《神经损伤与功能重建》 2017年第2期95-98,共4页

目的:探讨Ngn2基因转染皮肤干细胞(SKPs)促进神经分化的电生理学机制及可能的机制。方法:体外培养SD大鼠乳鼠SKPs并纯化、鉴定。构建包装含Ngn2基因并用绿色荧光蛋白(GFP)标记的病毒载体。将SKPs分3组:Ngn2组为包装有Ngn2基因的慢病毒... 目的:探讨Ngn2基因转染皮肤干细胞(SKPs)促进神经分化的电生理学机制及可能的机制。方法:体外培养SD大鼠乳鼠SKPs并纯化、鉴定。构建包装含Ngn2基因并用绿色荧光蛋白(GFP)标记的病毒载体。将SKPs分3组:Ngn2组为包装有Ngn2基因的慢病毒转染的SKps,空病毒组为未包装任何基因的慢病毒转染的SKps,空白对照组为未经慢病毒转染的SKps,各组6皿。诱导液诱导14 d,全细胞膜片钳技术检测各组SKPs的电生理活动;Wetern Blot检测各组SKps钠离子通道相关蛋白Nav1.3及Notch信号通路相关蛋白Hes1和Dll1表达水平。结果:诱导14 d后,Ngn2组SKPs出现电压依赖性钠离子通道电流,而其他2组SKPs均未引出钠离子通道电流;Ngn2组SKPs的Nav1.3蛋白表达水平高于其他2组(P<0.01);Ngn2组SKPs Dll1蛋白的表达水平高于其他2组,Hes1蛋白的表达水平低于其他2组(P<0.01)。结论:Ngn2基因促使SKPs表达电压门控性钠离子通道,其机制可能与Notch信号通路有关。 展开更多

关键词 皮肤干细胞 Ngn2基因 神经分化 电生理 钠离子通道 NOTCH信号通路

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骨髓间充质干细胞旁分泌作用与脑缺血后的细胞凋亡 被引量：10

3

作者 程峰 李立新 +3 位作者 郝怀勇 田和平 代学良 胡卫星 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-5,共5页

背景:骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血的机制之一是骨髓间充质干细胞的旁分泌作用,而目前对于这一机制的研究报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对脑缺血后细胞凋亡的抑制作用并探索相关机制。方法:体外培养大鼠骨髓间充质... 背景:骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血的机制之一是骨髓间充质干细胞的旁分泌作用,而目前对于这一机制的研究报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对脑缺血后细胞凋亡的抑制作用并探索相关机制。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠大脑中动脉缺血模型。24只SD大鼠随机数字表法分为4组,每组6只。细胞移植给药组:大鼠纹状体内移植骨髓间充质干细胞后给予ERK1/2抑制剂U0126;非移植给药组:注射等量的PBS后给予U0126;细胞移植对照组:移植骨髓间充质干细胞后给予溶剂对照;非移植对照组:注射等量的PBS后给予溶剂对照。7d后通过Westernblot检测血管内皮细胞生长因子、磷酸化ERK1/2蛋白的表达;TUNEL染色检测梗死区周围及皮质区细胞凋亡情况。结果与结论:细胞移植组较非移植组大鼠纹状体内血管内皮细胞生长因子蛋白的表达明显增高,磷酸化ERK1/2表达增强,细胞凋亡数明显减少;经U0126处理后,血管内皮细胞生长因子的表达没有变化,而随着磷酸化ERK1/2的表达受到抑制,细胞凋亡数明显增高。提示骨髓间充质干细胞在大脑纹状体内可以旁分泌血管内皮细胞生长因子,并通过激活ERK1/2抑制了脑梗死区细胞的凋亡。 展开更多

关键词 旁分泌 骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子 凋亡 脑缺血

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体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及凋亡的研究 被引量：7

4

作者 程峰 郝怀勇 +2 位作者 田和平 代学良 李立新 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期54-58,共5页

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经细胞诱导分化的潜能,及分化后的凋亡情况。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基对第三代MSCs进行诱导分化,诱导分化的细胞... 目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经细胞诱导分化的潜能,及分化后的凋亡情况。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基对第三代MSCs进行诱导分化,诱导分化的细胞按分化时间3、7、14d分成A、B、C三组。三组诱导分化细胞分别进行NSE免疫组织化学,MAP2免疫荧光化学以及TUNEL凋亡细胞检测。结果:A、B、C三组细胞在细胞形态上与神经细胞相似,并且表达神经细胞特异性标记抗原NSE、MAP2,但是C组细胞表达强度弱于B组,并且阳性细胞比例少于B组(P<0.05)。A、B、C三组TUNEL凋亡阳性细胞比例呈逐渐增多趋势(P<0.05)。结论:含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,随着诱导时间的推移,分化细胞状态下降,凋亡比例增多。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 细胞分化 神经样细胞 凋亡

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再程序化脂肪源性干细胞的制备及体外定向分化为神经元的实验研究 被引量：1

5

作者 钱腾达 代学良 +2 位作者 陆晓诚 陶轶 李立新 《临床神经外科杂志》 CAS 2012年第3期129-132,共4页

目的制备再程序化脂肪源性干细胞以及探索诱导其定向分化为神经元的方法。方法体外培养脂肪来源干细胞(ADSCs),取纯化、鉴定过的第3代ADSCs接种于24孔板中并分A,B,C三组:A组为带有绿色荧光基因(GFP)的慢病毒载体介导Neurogenin2(Ngn2)... 目的制备再程序化脂肪源性干细胞以及探索诱导其定向分化为神经元的方法。方法体外培养脂肪来源干细胞(ADSCs),取纯化、鉴定过的第3代ADSCs接种于24孔板中并分A,B,C三组:A组为带有绿色荧光基因(GFP)的慢病毒载体介导Neurogenin2(Ngn2)基因转染的ADSCs,制备再程序化脂肪干细胞;B组为带有GFP的空载体病毒转染的ADSCs;C组为未进行慢病毒介导基因转染的ADSCs;转基因7d后加入含细胞生长因子诱导培养基诱导分化15d。光镜下观察各组细胞形态变化以及免疫荧光研究各组ADSCs诱导后定向分化为神经元的差异。结果与B组和C组相比,A组ADSCs转基因后再经诱导分化15d后绝大部分细胞类似神经元,胞体呈梭形或椭圆形,有两个或三个突起伸出,细胞表达神经丝蛋白NF、神经元特异性蛋白NeuN及神经元特异性烯醇化酯酶NSE比例大大提高。B组与C组的神经元分化效率,无显著差异,P>0.05。结论慢病毒介导Neurogenin2基因体外转染ADSCs可以制备出再程序化脂肪源性干细胞,诱导后具有更强的定向分化为神经元的能力。 展开更多

关键词 脂肪源性干细胞 神经元分化 再程序化

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缺血性卒中患者血清和脑脊液CysC及PAI-1水平变化及其临床意义 被引量：8

6

作者 孙秀海 代学良 刘洪义 《神经损伤与功能重建》 2018年第1期31-32,共2页

目的:探究缺血性卒中患者血清和脑脊液中CysC及PAI-1水平变化及其临床意义。方法:120例缺血性卒中住院患者及30例健康人(对照组)被纳入本研究。120例患者中,处于急性期60例(急性期组),处于恢复期60例(恢复期组)。分别取3组受试者血浆和... 目的:探究缺血性卒中患者血清和脑脊液中CysC及PAI-1水平变化及其临床意义。方法:120例缺血性卒中住院患者及30例健康人(对照组)被纳入本研究。120例患者中,处于急性期60例(急性期组),处于恢复期60例(恢复期组)。分别取3组受试者血浆和脑脊液,采用ELISA检测血浆和脑脊液中CysC及PAI-1水平。结果:急性期组和恢复期组患者血浆及脑脊液中CysC及PAI-1水平显著高于对照组(P<0.05),且急性期组显著高于恢复期组(P<0.05)。结论:缺血性脑卒中患者血浆及脑脊液中CysC及PAI-1水平显著升高,通过检测血浆和脑脊液中CysC及PAI-1水平有助于临床上对缺血性卒中患者的病情诊断及预后预测。 展开更多

关键词 缺血性脑卒中 内毒素 内毒素结合蛋白

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LED光源在海洋平台的应用研究 被引量：2

7

作者 柏继合 黄永豹 代学良 《照明工程学报》 2013年第3期58-63,共6页

本文以新光源的典型代表LED为例,从性能和经济性两个方面与海上平台使用的传统灯具进行对比,说明LED灯具的应用优势,随后给出了LED灯具在海上平台照明系统中的应用选型及设计原则,并介绍了LED灯具在海洋平台的实际应用案例,以期LED灯具... 本文以新光源的典型代表LED为例,从性能和经济性两个方面与海上平台使用的传统灯具进行对比,说明LED灯具的应用优势,随后给出了LED灯具在海上平台照明系统中的应用选型及设计原则,并介绍了LED灯具在海洋平台的实际应用案例,以期LED灯具能够在海洋平台得到广阔应用。 展开更多

关键词 海洋平台 LED 能源 节能

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急性颅脑创伤患者血浆FⅦ活性变化及其与凝血功能相关性 被引量：3

8

作者 孙秀海 代学良 刘洪义 《医学临床研究》 CAS 2017年第6期1096-1098,共3页

【目的】探讨急性颅脑创伤患者血浆凝血因子Ⅶ（FⅦ）活性变化及其与凝血功能的相关性。【方法】选取2014年3月至2016年3月本院收治的急性颅脑创伤患者92例作为观察组，同时选择同期在本院体检健康的92例健康志愿者作为对照组，检测两... 【目的】探讨急性颅脑创伤患者血浆凝血因子Ⅶ（FⅦ）活性变化及其与凝血功能的相关性。【方法】选取2014年3月至2016年3月本院收治的急性颅脑创伤患者92例作为观察组，同时选择同期在本院体检健康的92例健康志愿者作为对照组，检测两组血浆FⅦ活性值，并检测活化部分凝血活酶时间（AFFF）、血小板（PLT）、D-二聚体、纤维蛋白原（FIB）、血红蛋白（Hb）、血乳酸（Lac）等相关凝血指标，计算国际标准化比值（INR），并检测颅内压（ICP）。比较观察组和对照组血浆FⅦ活性及其与凝血功能指标的相关性。【结果】观察组血浆FⅦ活性值为（91．45±32．10）％，对照组为（97．20±16．03）％，两组比较差异无统计学意义（t=-1．537，P〉0．05）。血浆FⅦ活性低患者INR、APTT、Lac显著高于血浆FⅦ活性高的患者，血浆FIB水平显著低于血浆FⅦ活性高者，差异均具有统计学意义（均P〈O．05）。观察组伴凝血功能异常患者共计35例，其血浆FⅦ活性为（86．70±28．84）％，观察组不伴凝血功能异常患者57例，其血浆FⅦ活性为（97．83±30．16）％，两组比较差异具有统计学意义（t=-2．176，P〈0．05）。【结论】急性颅脑创伤患者血浆FⅦ活性与凝血功能有一定联系，凝血功能异常患者血浆FⅦ活性有所降低，值得临床进一步研究。 展开更多

关键词 颅脑损伤 急性病 因子Ⅶ 血液凝固

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螺栓预紧力对大型双排四点接触球轴承载荷分布的影响 被引量：2

9

作者 杜静 代学良 +3 位作者 杨显刚 金鑫 周云鹏 张禄 《太阳能学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第10期2645-2651,共7页

通过采用超单元法模拟滚珠-滚道接触,用等效梁法模拟螺栓,得到大型双排四点接触球轴承有限元简化模型,再与不加螺栓有限元算法以及理论算法对比,验证该模型的正确性,并利用此方法分析螺栓预紧力对轴承载荷分布的影响。研究表明:随着均... 通过采用超单元法模拟滚珠-滚道接触,用等效梁法模拟螺栓,得到大型双排四点接触球轴承有限元简化模型,再与不加螺栓有限元算法以及理论算法对比,验证该模型的正确性,并利用此方法分析螺栓预紧力对轴承载荷分布的影响。研究表明:随着均布螺栓预紧力的增加,滚珠-滚道最大接触载荷先降低后小幅增加;非均布螺栓预紧力使滚珠-滚道接触载荷波动加剧;内、外圈螺栓预紧力差异使上、下排滚珠-滚道接触载荷差异增大。 展开更多

关键词 有限元分析 变桨轴承 螺栓预紧力 载荷分布

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海洋平台发电机保护研究 被引量：1

10

作者 柏继合 代学良 黄永豹 《船电技术》 2013年第11期10-14,共5页

本文首先介绍了海洋平台电力系统发电机故障及异常运行方式的各类保护,随后就电压异常保护、过载保护和电流速断保护在整定设置过程中需要考虑的因素和注意问题展开讨论,最后以发电机综合保护继电器SR-489为例,讨论发电机综合保护装置... 本文首先介绍了海洋平台电力系统发电机故障及异常运行方式的各类保护,随后就电压异常保护、过载保护和电流速断保护在整定设置过程中需要考虑的因素和注意问题展开讨论,最后以发电机综合保护继电器SR-489为例,讨论发电机综合保护装置应用过程中需要关注的关键事项。 展开更多

关键词 海洋平台 发电机保护 SR-489

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当前农村干部应处理好三个关系

11

作者 高士范 代学良 《领导科学》 北大核心 1991年第3期38-38,共1页

一、计划种植与为农民服务的关系。近几年,农业计划种植遇到了相当大的困难,政府或集体规划的农作物种植面积落实不了,农民偏不按计划种植。最主要的原因就在于一些地方的干部没有处理好计划种植与为群众服务之间的关系,对农业生产的产... 一、计划种植与为农民服务的关系。近几年,农业计划种植遇到了相当大的困难,政府或集体规划的农作物种植面积落实不了,农民偏不按计划种植。最主要的原因就在于一些地方的干部没有处理好计划种植与为群众服务之间的关系,对农业生产的产前、产中、产后服务跟不上。 展开更多

关键词 农业计划 农作物种植面积 好计划 产后服务 农业生产 家庭经营 麦棉套种 单位面积 种烟面积 服务设施

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智能马达控制中心在海上平台的应用研究

12

作者 柏继合 代学良 黄永豹 《企业技术开发（中旬刊）》 2013年第1期40-41,共2页

文章首先介绍目前海洋平台电站管理系统的基本概况,提出海洋平台电气系统综合自动化的需求,随后从保护功能、信息测量管理功能和施工调试三个方面对智能马达控制中心和传统马达控制中心展开对比分析,明确智能马达控制中心的技术优势及... 文章首先介绍目前海洋平台电站管理系统的基本概况,提出海洋平台电气系统综合自动化的需求,随后从保护功能、信息测量管理功能和施工调试三个方面对智能马达控制中心和传统马达控制中心展开对比分析,明确智能马达控制中心的技术优势及智能马达控制中心在海洋平台电气系统的应用前景。 展开更多

关键词 海洋平台 智能 马达控制中心

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JAK2／STAT3信号通路调节骨髓间充质干细胞神经定向分化 被引量：8

13

作者 郝怀勇 王永广 +4 位作者 程峰 黄保胜 田和平 代学良 李立新 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期400-400,共1页

骨髓间充质干细胞（MSCs）是来源于中胚层的骨髓非造血干细胞，具有较强的自我更新和跨胚层分化潜能。探索MSCs神经诱导分化的内在调节机制，提高MSCs向神经元分化的比例，降低向神经胶质细胞分化比例，对于干细胞移植治疗中枢神经系统... 骨髓间充质干细胞（MSCs）是来源于中胚层的骨髓非造血干细胞，具有较强的自我更新和跨胚层分化潜能。探索MSCs神经诱导分化的内在调节机制，提高MSCs向神经元分化的比例，降低向神经胶质细胞分化比例，对于干细胞移植治疗中枢神经系统损伤有重要的临床意义。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 神经定向分化 内在调节 STAT3 信号通路 JAK2 中枢神经系统损伤 MSCS

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再程序化脂肪干细胞体外定向神经分化效率和机制 被引量：4

14

作者 钱腾达 代学良 +2 位作者 陆晓诚 陶轶 李立新 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1135-1139,共5页

目的探讨再程序化脂肪干细胞（adipose—derived stem cells，ADSCs）体外定向神经分化的效率和机制。方法体外培养大鼠ADSCs并纯化、鉴定，将第3代ADSCs分为三组：未进行慢病毒介导基因转染ADSCs组（空白组）；不含神经元生成素-2（neu... 目的探讨再程序化脂肪干细胞（adipose—derived stem cells，ADSCs）体外定向神经分化的效率和机制。方法体外培养大鼠ADSCs并纯化、鉴定，将第3代ADSCs分为三组：未进行慢病毒介导基因转染ADSCs组（空白组）；不含神经元生成素-2（neurogenin-2，Ngn2）基因慢病毒空载体转染ADSCs组（空病毒组）；慢病毒载体介导Ngn2基因转染ADSCs组（Ngn2组）；各组细胞均用含细胞生长因子的诱导培养基诱导15d。免疫荧光检测各组细胞神经元特异性蛋白（NeuN）阳性表达以观察神经元分化效率；Western blot检测各组细胞Mash1、Hes1、Dll1蛋白表达水平的差异，探索分化机制。结果诱导培养基诱导15d后，Ngn2组、空病毒组、空白组阳性表达NeuN分别为90．12％、45．34％、40．26％，各组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。Western blot结果显示，Ngn2组Dll1蛋白表达水平明显高于空病毒组和空白组（P〈0．01），Mashl、Hesl蛋白表达水平明显低于空病毒组和空白组（P〈0．01）；空病毒组和空白组Dll1、Mash1和Hes1蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论再程序化ADSCs诱导后神经元分化的比例较单纯ADSCs提高近99％，再程序化ADSCs定向分化神经元机制可能是通过上调Dll1蛋白水平，同时下调Mash1、Hes1蛋白水平，抑制notch信号通路，从而促进细胞的定向神经分化。 展开更多

关键词 脂肪组织 干细胞 神经元 再程序化

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