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脂肪间充质干细胞来源外泌体对施万细胞增殖功能及早期神经再生特征影响的研究 被引量：1
1
作者 任致奇 尚爱加 +4 位作者 杨博尧 柏钧 贾志博 刘修志 王玉 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2023年第6期694-699,共6页
背景施万细胞是神经系统的重要构成部分,为促进轴突再生和诱导靶神经再生提供必要的信号和空间线索。脂肪间充质干细胞来源广泛,在再生医学方向效果明确,外泌体作为神经系统细胞间的重要信息媒介,在调节再生方面发挥着重要作用。目的探... 背景施万细胞是神经系统的重要构成部分,为促进轴突再生和诱导靶神经再生提供必要的信号和空间线索。脂肪间充质干细胞来源广泛,在再生医学方向效果明确,外泌体作为神经系统细胞间的重要信息媒介,在调节再生方面发挥着重要作用。目的探索脂肪间充质干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cells-derived exosomes,ADSCs-exos)对施万细胞增殖功能及早期神经再生特征的影响。方法提取ADSCs-exos进行鉴定;利用显微镜和流式细胞学对ADSCs鉴定,通过超速离心法提取ADSCs来源外泌体并通过透射电镜拍摄图片;将ADSCs-exos与大鼠施万细胞进行直接共培养,观察ADSCs-exos对施万细胞增殖的影响;取雌性SD大鼠8只,Matrigel基质胶搭载ADSCs-exos注入商用硅胶管构建神经移植物为外泌体组,Matrigel搭载PBS注入商用硅胶管为空导管组(Hollow),每组4只。构建坐骨神经1 cm缺损模型,将神经移植物缝合于近端和远端神经残端之间,缝合伤口后放回笼中安置。3周取出神经移植物评价轴突再生情况。结果成功提取ADSCs,能够表达间充质干细胞表面标记蛋白CD73、CD90、CD105。成功提取ADSCs-exos,能在透射电镜下观察到磷脂双分子层结构。在ADSCs-exos和施万细胞共培养体系中,比较24 h和48 h施万细胞增殖情况,施万细胞增殖与ADSCsexos浓度呈剂量依赖性。动物实验结果表明,外泌体组3周时轴突生长优于Hollow组(P<0.05)。结论ADSCs-exos可以促进施万细胞增殖,负载ADSCs-exo神经移植物的轴突生长长度在3周时即具有优势。 展开更多
关键词 外周神经损伤 脂肪来源干细胞 外泌体 修复 施万细胞
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微组织修复大鼠坐骨神经缺损的早期实验研究 被引量：3
2
作者 张健 李超超 +9 位作者 孟繁琪 管延军 杨博尧 张铁元 任致奇 刘修志 赵杰 杨凯 王玉 彭江 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2022年第1期87-94,共8页
背景微组织是种子细胞在细胞-细胞或细胞-细胞外基质(extracellular matrix,ECM)作用下聚集而成的微型组织,这种三维培养方式有利于提高细胞活性,提高组织修复效果,然而神经组织工程中微组织的研究却很少。目的将脂肪来源间充质干细胞(a... 背景微组织是种子细胞在细胞-细胞或细胞-细胞外基质(extracellular matrix,ECM)作用下聚集而成的微型组织,这种三维培养方式有利于提高细胞活性,提高组织修复效果,然而神经组织工程中微组织的研究却很少。目的将脂肪来源间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs)构建成微组织,探索微组织对大鼠坐骨神经缺损模型的早期修复效果。方法提取ASCs进行鉴定;利用悬浮液滴法和低黏附细胞培养板法构建微组织,并对其性质进行研究;将微组织与大鼠背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)进行直接和间接共培养,观察微组织对DRG轴突生长的影响;利用静电纺丝机构建聚己内酯(polycaprolactone,PCL)神经导管,并验证其取向性;最后取SD大鼠24只,随机分为空导管组、2D细胞组、微组织组和自体神经移植组,每组6只。构建坐骨神经1 cm缺损模型,分别采用PCL导管桥接后注射培养基、PCL导管桥接后注射2D ASCs、PCL导管桥接后注射微组织和自体神经反向移植。术后4周取出神经移植物进行组织学评价。结果成功提取ASCs,能够表达间充质干细胞表面标记蛋白CD73、CD90、CD105。微组织构建后,对其形态和直径进行连续7 d的动态观察,微组织的直径与细胞数量呈正相关,且随着培养时间延长,微组织呈现“压实”的状态,直径逐渐变小。在微组织和DRG间接共培养体系中,微组织组的轴突长度明显长于2D细胞组(P<0.05)和单纯培养基组(对照组)(P<0.05)。在微组织和DRG直接共培养体系中,DRG发出的轴突与附近的微组织紧密相连。PKH26标记的ASCs在PCL薄膜上呈取向性排列。动物实验结果表明,微组织组轴突生长明显优于2D细胞组(P<0.05)和空导管组(P<0.05)。结论微组织可促进DRG轴突生长,有效促进坐骨神经缺损大鼠模型的神经再生。 展开更多
关键词 周围神经损伤 间充质干细胞 微组织 三维细胞培养 神经导管 大鼠
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细胞外基质修饰的电纺纤维对施万细胞及神经生长的影响
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作者 管延军 许文静 +9 位作者 张健 李超超 孟繁琪 杨博尧 张铁元 任致奇 刘修志 仪鹏朝 王玉 彭江 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2022年第3期328-333,共6页
背景组织工程周围神经再生材料聚焦于还原周围神经再生微环境,传统聚己内酯-丝素静电纺丝材料可模拟周围神经基质的拓扑线索,但缺乏再生相关生物位点。目的将施万细胞外基质与静电纺丝材料结合,在物理和生物信息两个方面重现周围神经再... 背景组织工程周围神经再生材料聚焦于还原周围神经再生微环境,传统聚己内酯-丝素静电纺丝材料可模拟周围神经基质的拓扑线索,但缺乏再生相关生物位点。目的将施万细胞外基质与静电纺丝材料结合,在物理和生物信息两个方面重现周围神经再生微环境,研究复合材料对神经纤维再生以及施万细胞的影响。方法进行大鼠原代施万细胞提取、纯化与增殖培养;将聚己内酯与丝素共纺获取取向性电纺材料,将纯化的施万细胞种植在材料上并利用抗坏血酸刺激细胞外基质分泌,利用Triton X-100和氨水进行脱细胞处理,得到无细胞的复合材料。通过扫描电镜以及免疫荧光化学染色手段对材料进行表征。验证复合材料组装成功后,将大鼠背根神经节组织种植于复合材料表面,单纯取向材料作为对比;背根神经节生长7 d后,免疫荧光染色评估轴突生长速度以及施万细胞迁移能力。结果成功提取、纯化施万细胞并增殖。电镜与免疫荧光结果证明施万细胞外基质成功与电纺纳米纤维复合,且保留取向纤维的形貌;脱细胞处理后仅残留少量DNA[(2.398±0.2329)ng/mg]。背根神经节轴突在复合材料表面的延伸长度显著大于单纯支架材料[(1503±147.4)μm vs(567.7±34.63)μm,P<0.0001]。施万细胞在复合材料的迁移距离大于轴突的延伸[(2073±112.9)μm vs(1503±147.4)μm,P=0.0056]。结论施万细胞外基质与静电纺丝材料结合的策略可以支持背根节轴突的快速生长,且支持施万细胞的快速迁移。 展开更多
关键词 周围神经损伤 静电纺丝 细胞外基质 神经导管 组织工程
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