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小鼠LRP16基因打靶载体的构建和同源重组型胚胎干细胞筛选(英文) 被引量：1
1
作者 伍志强 韩为东 +4 位作者 赵亚力 司艺玲 母义明 孟元光 Masatoshi Nomura 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2391-2395,共5页
背景:LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。目的:构建针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(EmbryonicStemCell)并筛选同源重组克隆。设计:通过SA-RIES-βgeo插入小鼠LRP16基因组DNA构建... 背景:LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。目的:构建针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(EmbryonicStemCell)并筛选同源重组克隆。设计:通过SA-RIES-βgeo插入小鼠LRP16基因组DNA构建插入失活型打靶载体。单位:日本九州大学第三内科生物调控研究室与解放军总医院分子生物室。材料:本实验所用主要材料由日本九州大学生物调控研究室提供。实验所用鼠基因组文库(mousegenomiclibraryinpBeloBAC11Vector)购自invitrogen公司,TopF10感化态细菌购自北京天为时代公司,pCDNA3.1(+)由本室保存。鼠胚胎干细胞株由日本九州大学提供。方法:实验主要工作于2004-11/2005-05在日本九州大学生物调控研究室与解放军总医院分子生物室完成。PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染胚胎干细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southernblot方法鉴定同源重组胚胎干细胞克隆。主要观察指标:具有同源重组的胚胎干细胞克隆。结果:将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescriptSKII+载体,SA-IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染胚胎干细胞,Southernblot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的胚胎干细胞克隆。结论:成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组型胚胎干细胞。 展开更多
关键词 LRP16 基因打靶 胚胎干细胞
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小鼠LRP16基因打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆鉴定 被引量：1
2
作者 伍志强 韩为东 +4 位作者 赵亚力 司艺玲 母义明 孟元光 Masatoshi Nomura 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第3期167-171,共5页
目的既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(embryonicstem cell,ES cells)并筛选同源重组克隆。... 目的既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(embryonicstem cell,ES cells)并筛选同源重组克隆。方法PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组ES细胞克隆。结果将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescript SKⅡ+载体,SA-IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染ES细胞,Southern blot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的ES细胞克隆。结论成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组型ES细胞,为下一步建立LRP16缺失型小鼠并为从整体水平研究LRP16基因的生理功能奠定基础。 展开更多
关键词 LRP16 基因打靶 ES细胞
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HLH缺失型Id2在酵母双杂交系统中的表达及自激活检测 被引量：1
3
作者 伍志强 韩为东 +3 位作者 赵亚力 杨洁 田丽媛 司艺玲 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第6期410-412,共3页
目的:构建HLH结构域缺失的DNA结合抑制因子(Id2)诱饵质粒,并检测其在AH109酵母中的表达及表达产物对酵母的有无毒性作用和对报告基因的有无转激活作用。方法:用重叠延伸PCR方法将Id2中的HLH结构域缺失,并插入到pGBKT7载体,构建BD:Id2-D... 目的:构建HLH结构域缺失的DNA结合抑制因子(Id2)诱饵质粒,并检测其在AH109酵母中的表达及表达产物对酵母的有无毒性作用和对报告基因的有无转激活作用。方法:用重叠延伸PCR方法将Id2中的HLH结构域缺失,并插入到pGBKT7载体,构建BD:Id2-DBM-δHLH融合诱饵质粒,将构建成功的诱饵质粒转化AH109感受态酵母菌中,检测其是否具有自激活作用及对酵母的毒性作用,用Western blot方法检测其在酵母中表达的融合蛋白。结果:成功构建Id2的HLH缺失体,Id2的HLH缺失体在酵母中能够正确表达,对AH109酵母无毒性作用,对报告基因无自激活作用。结论:HLH结构域缺失型Id2蛋白适用于采用酵母双杂交系统筛选其相互作用蛋白。 展开更多
关键词 ID2 双杂交系统技术 蛋白相互作用
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红外光谱技术在鱼产品质量检测与安全评估中的应用 被引量：1
4
作者 伍志强 汪星宇 +7 位作者 邢圆莹 徐香富 解玉鑫 卞希慧 施蕊 何霞红 季超 郑文杰 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第4期153-161,共9页
近年来消费者对鱼产品的掺假问题愈发关注,从而针对鱼产品的质量评估的相关研究也逐渐增加。传统的鱼类成分分析和质量检测技术方法烦琐、费力、昂贵、费时,而光谱技术因其具有速度快、使用方便、样品制备最少或不需要样品制备,及避免... 近年来消费者对鱼产品的掺假问题愈发关注,从而针对鱼产品的质量评估的相关研究也逐渐增加。传统的鱼类成分分析和质量检测技术方法烦琐、费力、昂贵、费时,而光谱技术因其具有速度快、使用方便、样品制备最少或不需要样品制备,及避免样品破坏等优点而受到越来越多的关注。本文综述了以红外光谱技术为主的光谱技术,包括近红外光谱技术、中红外光谱技术等在鱼类及鱼产品的成分和其他质量特性监测中的应用,并对光谱技术的应用前景和发展方向进行了展望,以期为红外光谱技术在鱼类及鱼产品质量监测体系中推广应用提供指导,为解决鱼产品及相关行业的质量问题提供了一种新的途径。 展开更多
关键词 红外光谱技术 鱼产品 质量检测 溯源
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型钢—混凝土组合梁在震后加固工程中的应用研究 被引量：1
5
作者 伍志强 周杰 《四川建筑科学研究》 北大核心 2011年第6期105-108,共4页
型钢—混凝土组合梁是组合梁加固技术的一种,具有施工方便、湿作业少、周期短等优势。本文对型钢—混凝土组合梁在汶川地震后绵阳中学某教学楼震后维修加固工程中的应用进行了研究。
关键词 型钢-混凝土组合梁 结构加固 应用研究
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FHL2调控Id2功能活性的研究
6
作者 伍志强 韩为东 +4 位作者 赵亚力 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第2期197-199,共3页
目的:探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法:将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果:三个细胞系中E47均显... 目的:探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法:将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果:三个细胞系中E47均显著上调了报告基因的表达,Id2抑制了E47的转录激活活性,而FHL2通过与Id2相互作用显著消弱了Id2对E47功能的抑制效应。结论:通过相互作用FHL2抑制了Id2蛋白的功能活性,FHL2是一个新的Id2蛋白功能抑制子。 展开更多
关键词 FHL2 ID2 蛋白质相互作用域和基序 阻遏蛋白质类
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建筑节能的自然风利用技术及实证研究 被引量：2
7
作者 伍志强 《安徽建筑》 2010年第2期59-61,共3页
建筑节能已成为非常重要的建筑因素。文章基于节能的视角,总结了建筑自然风利用的四种技术并对其在建筑工程中的应用进行了实证研究。
关键词 建筑节能 自然风 技术
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HR-HPV载量与宫颈病变的相关性分析 被引量：32
8
作者 马晓星 李亚里 +12 位作者 胡凌云 宋磊 张全 范文生 李立安 黄柯 伍志强 张燕 张海燕 段玉坤 韩为东 苏红 孟元光 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期477-481,共5页
目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)载量与宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌病变程度的相关性。方法收集解放军总医院2006年1月-2011年8月5年中因宫颈病变行阴道镜活检或手术治疗的1248例患者,根据宫颈病变及临床分期分为5组:宫颈炎组、CI... 目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)载量与宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌病变程度的相关性。方法收集解放军总医院2006年1月-2011年8月5年中因宫颈病变行阴道镜活检或手术治疗的1248例患者,根据宫颈病变及临床分期分为5组:宫颈炎组、CINⅠ组、CIN Ⅱ-Ⅲ组、宫颈癌Ⅰ期组、宫颈癌Ⅱ期组,依据第二代杂交捕获实验(HC-Ⅱ)方法检测所有患者HR-HPV病毒载量(RLU/CO),将其分为0～0.99、1.00～9.99、10.00～99.99、100.00～999.99、1000.00～5个HR-HPV病毒载量组。对宫颈炎、CINⅠ、CIN Ⅱ-Ⅲ、宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期各组中不同的HR-HPV病毒载量进行比较,并分析HR-HPV病毒载量与宫颈病变发生的相关性。结果 CINⅠ组、CIN Ⅱ-Ⅲ组、宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期患者HR-HPV病毒载量(分别为842.1±98 3.9、690.1±795.0、893.1±974.2、699.5±908.3RLU/CO)显著高于宫颈炎患者(274.2±613.6,P<0.05);CINⅠ组和宫颈癌Ⅰ期的病毒载量高于CIN Ⅱ-Ⅲ组(P<0.05)。当HR-HPV病毒载量≥100RLU/CO时,CIN及宫颈癌的发生危险度随病毒载量的增加而增加,但HPV病毒载量分级与宫颈病变病理分级无相关性。对于宫颈鳞癌ⅠB-Ⅱ期患者,当HR-HPV病毒载量≥100RLU/CO时,宫颈癌淋巴结转移的危险性增加(P<0.05),且宫颈肿瘤最大直径≥4cm的危险性增加(P<0.05),而HR-HPV病毒载量与患者年龄、组织学类型、宫颈肌层癌浸润深度及淋巴管浸润无关。结论 HR-HPV病毒载量与CIN及宫颈癌的发生密切相关。病毒载量越高,发生CIN及宫颈癌的危险性越大,且与宫颈鳞癌的临床特征有关。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 病毒载量 宫颈上皮内瘤样病变 宫颈肿瘤 比值比
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LRP16通过调控E-钙黏着蛋白的表达促进MCF-7细胞的侵袭生长 被引量：17
9
作者 韩为东 孟元光 +6 位作者 廖代祥 李琦 伍志强 司艺玲 郝好杰 母义明 赵亚力 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期724-732,共9页
LRP16在原代乳腺癌组织中表达水平与雌激素受体α(ERα)表达状态以及腋窝淋巴结侵袭数目密切相关.为研究LRP16基因对乳腺癌MCF7细胞侵袭生长的影响,并探讨涉及的分子机制,采用基质胶黏附实验与Transwell方法,检测内源性LRP16表达抑制MCF... LRP16在原代乳腺癌组织中表达水平与雌激素受体α(ERα)表达状态以及腋窝淋巴结侵袭数目密切相关.为研究LRP16基因对乳腺癌MCF7细胞侵袭生长的影响,并探讨涉及的分子机制,采用基质胶黏附实验与Transwell方法,检测内源性LRP16表达抑制MCF7细胞的体外黏附、侵袭生长与迁移特征.结果表明,抑制LRP16在MCF7细胞中的表达,降低了细胞的体外黏附、侵袭与迁移能力;采用FVB小鼠进行的实验性转移试验结果显示,抑制LRP16显著降低了MCF7细胞的肺转移结节数目;为探索可能的分子机制,采用Western印迹方法,检测了LRP16对乳腺癌转移相关分子MMP2,MMP9,CD44和E钙黏着蛋白表达的影响,结果在LRP16抑制的MCF7细胞中只有E钙黏着蛋白蛋白表达上调.进一步的Northern印迹与免疫组化实验结果表明,抑制LRP16可上调MCF7细胞中E钙黏着蛋白基因的mRNA与蛋白表达水平;共转染与双荧光素酶方法检测LRP16对E钙黏着蛋白基因启动子的表达调控效应,结果显示,LRP16抑制E钙黏着蛋白基因基因5′近端启动子的转录激活,该抑制效应选择性存在于内源性ERα阳性细胞,并且依赖于雌激素的存在;染色质免疫共沉淀方法(ChIP)检测ERα与E钙黏着蛋白基因启动子的相互作用,结果显示,在LRP16基因表达缺陷的MCF7细胞中,ERα抗体沉淀到E钙黏着蛋白基因启动子的DNA序列;上述研究结果表明,抑制LRP16基因表达,削弱了激素依赖型乳腺癌细胞的侵袭生长能力,其分子机制涉及了LRP16通过ERα介导对E钙黏着蛋白基因基因转录激活的调控. 展开更多
关键词 LRP16 E-钙黏着蛋白 雌激素受体Α MCF-7 侵袭生长
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雌激素调控子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因表达及其意义 被引量：19
10
作者 孟元光 韩为东 +4 位作者 黄柯 伍志强 赵亚力 母义明 宋磊 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第11期980-983,共4页
目的:探讨子宫内膜癌Ishikawa细胞中雌激素(E2)对LRP16基因表达的调控作用,LRP16基因过表达对Ishikawa细胞增殖及侵袭生长能力的影响以及可能的分子机制.方法:采用Northernblot方法检测细胞中LRP16基因mRNA表达水平.双荧光报告系统检测... 目的:探讨子宫内膜癌Ishikawa细胞中雌激素(E2)对LRP16基因表达的调控作用,LRP16基因过表达对Ishikawa细胞增殖及侵袭生长能力的影响以及可能的分子机制.方法:采用Northernblot方法检测细胞中LRP16基因mRNA表达水平.双荧光报告系统检测相对荧光素酶活性.胎盘蓝死活细胞计数方法观察LRP16过表达对Ishikawa细胞增殖的影响,Matrigel包被的Transwell方法观察LRP16过表达对Ishikawa细胞侵袭生长能力的影响.Westernblot方法检测Ishikawa细胞中的蛋白水平.结果:雌二醇诱导了Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平表达上调;而ICI182780则Ishikawa细胞中LRP16mRNA水平下调.增加ERα表达量促使Ishikawa细胞中LRP16基因上调.pGL3S5与ERα共转染Ishikawa细胞的相对荧光素酶活性较单纯pGL3S5转染组细胞升高30倍.我们没有观察到LRP16基因过表达对Ishikawa细胞的促增殖效应.Transwell结果显示LRP16基因过表达Ishikawa细胞的侵袭率较对照组细胞增加了30%.LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E钙粘合素的mRNA以及蛋白水平较对照组细胞下调了3倍,而没有检测到MMP2,MMP9以及CD44蛋白水平的变化.结论:我结果表明E2通过激活ERα上调子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平,LRP16表达水平依赖于雌激素.LRP16基因表达上调没有促进子宫内膜癌细胞的增殖,但可能通过抑制E钙粘合素表达水平增加了细胞的侵袭能力. 展开更多
关键词 LRP16基因 雌激素 ISHIKAWA细胞 E-钙粘舍素 子宫内膜癌
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卵巢上皮肿瘤中LRP16蛋白表达的意义及其与ER、PR、E-cadherin的关系 被引量：8
11
作者 田丽媛 赵亚力 +5 位作者 韩为东 孟元光 伍志强 杨洁 陈美霞 张燕 《现代肿瘤医学》 CAS 2008年第4期629-632,共4页
目的:探讨LRP16在上皮性卵巢肿瘤中的定位,分析浆液性卵巢癌中LRP16与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达间的相关性及临床意义。方法:免疫组化染色法检测5例浆液... 目的:探讨LRP16在上皮性卵巢肿瘤中的定位,分析浆液性卵巢癌中LRP16与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达间的相关性及临床意义。方法:免疫组化染色法检测5例浆液性交界性卵巢癌、6例子宫内膜样腺癌、5例透明细胞癌、46例浆液性卵巢癌中LRP16、ER、PR和E-cadherin的表达。结果:LRP16在癌细胞胞浆和胞核内均有分布,但在浆液性交界性卵巢癌细胞核内的表达(0.0%)明显低于浆液性卵巢癌中(58.7%)(校正χ2=4.103,P=0.04),而浆内表达的差异则无统计学意义(分别为20.0%、52.2%);LRP16在核内的表达强度与浆液性卵巢癌临床分期的高低存在统计学意义的正相关性(r=0.348,P<0.05);子宫内膜样腺癌、透明细胞癌、浆液性卵巢癌三种类型间核内阳性率(分别为66.7%、60.0%、58.7%)和胞浆内阳性率(分别为50.0%、40.0%、52.2%)的差异均无统计学意义(P>0.05);LRP16与ER、PR以及E-cadherin的表达均无明显相关性(P>0.05)。结论:核内LRP16的表达可能与浆液性卵巢癌的病理进程有关,对卵巢癌的临床诊断和病情进展的预测可能具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 上皮性卵巢肿瘤 LRP16 ER PR E-钙黏着蛋白 免疫组织化学
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EGFR基因在非小细胞肺癌、乳腺癌中突变的研究 被引量：4
12
作者 赵亚力 李琦 +4 位作者 李向红 韩为东 郝好杰 司义玲 伍志强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期547-553,共7页
表皮生长因子受体(EGFR)基因酪氨酸激酶域体细胞突变与非小细胞肺癌(NSCLC)患者对酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼敏感性密切相关。文章分析和检测本院75例非小细胞肺癌、10例乳腺癌患者石蜡包埋标本EGFR基因突变状况。采用PCR技术进行EGFR基... 表皮生长因子受体(EGFR)基因酪氨酸激酶域体细胞突变与非小细胞肺癌(NSCLC)患者对酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼敏感性密切相关。文章分析和检测本院75例非小细胞肺癌、10例乳腺癌患者石蜡包埋标本EGFR基因突变状况。采用PCR技术进行EGFR基因19和21外显子突变分析。结果显示:75例NSCLC患者中有13例(13/75,17.33%)酪氨酸激酶域存在体细胞突变。其中7例(7/75,9.33%)为19外显子缺失突变,6例(6/75,8%)为21外显子替代突变(2573T>G,L858R)。病理分型显示,腺癌突变率高于其他几种类型NSCLC。乳腺癌患者均为免疫组化HER-2阳性女性,EGFR基因的19、21外显子中未见突变发生。中国非小细胞肺癌患者总突变率高于高加索人种,女性患者较男性患者突变率高,提示肺腺癌的患者突变率高可能在吉非替尼的治疗中获益。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体 吉非替尼 突变
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HeLa细胞中LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB核转位 被引量：3
13
作者 马晓星 伍志强 +4 位作者 段玉坤 赵亚力 李小雷 韩为东 孟元光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期638-643,共6页
前期研究显示抑制LRP16的表达可以明显增加肿瘤细胞对辐射诱导凋亡的敏感性,但具体机制尚不清楚.大量研究表明,NF-κB信号通路在肿瘤产生辐射抵抗中起着重要的作用.为研究LRP16影响肿瘤细胞对辐射敏感性的可能机制,首先通过免疫荧光技... 前期研究显示抑制LRP16的表达可以明显增加肿瘤细胞对辐射诱导凋亡的敏感性,但具体机制尚不清楚.大量研究表明,NF-κB信号通路在肿瘤产生辐射抵抗中起着重要的作用.为研究LRP16影响肿瘤细胞对辐射敏感性的可能机制,首先通过免疫荧光技术检测电离辐射刺激后不同时间点NF-κB的核转位情况;然后分别过表达和抑制LRP16的表达,采用Western印迹方法检测NF-κB在核蛋白与浆蛋白中的表达情况、IκB-α总体蛋白水平及磷酸化水平.结果发现,电离辐射后1 h,可见NF-κB明显入核;过表达LRP16可以促进NF-κB入核、提高IκB-α的磷酸化水平、促进IκB-α的降解;反之,抑制LRP16的表达可以抑制NF-κB入核、降低IκB-α的磷酸化水平、阻碍IκB-α的降解.上述研究结果表明,在HeLa细胞中LRP16可以影响电离辐射诱导的NF-κB核转位,该研究为LRP16参与肿瘤细胞产生辐射抵抗现象提供一种可能的机制. 展开更多
关键词 LRP16 NF-ΚB 电离辐射 核转位
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SKOV3卵巢癌细胞中雌激素对LRP16的调控作用及其影响 被引量：4
14
作者 田丽媛 赵亚力 +3 位作者 韩为东 孟元光 伍志强 杨洁 《现代肿瘤医学》 CAS 2010年第1期4-8,共5页
目的:研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法:Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果:雌... 目的:研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法:Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果:雌激素敏感的BG-1细胞系中,E2正调控LRP16的表达;而不同浓度雌激素处理雌激素不敏感SKOV3细胞,LRP16蛋白的表达下降,而ICI182780对其作用相反;LRP16对SKOV3细胞的生长、增殖有微弱的调节作用。结论:在雌激素不敏感的SKOV3细胞系中,E2对LRP16的调节作用及LRP16发挥的生长调节作用与雌激素敏感的BG-1卵巢癌细胞系及乳腺癌体外研究结果不同。提示雌激素不敏感浆液性卵巢癌中E2对LRP16的调控可能存在新的机制,可能用来解释部分卵巢癌对内分泌治疗敏感性不同的原因。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 雌激素受体 基因 LRP16 细胞增殖 基因表达调控
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FHL2抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭生长的机制探讨 被引量：2
15
作者 李沛雨 赵亚力 +3 位作者 刘娜 伍志强 司艺玲 韩为东 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期572-574,共3页
目的探讨FHL2对分化抑制蛋白1(Id1)的转录调控活性及Id1促乳腺癌细胞侵袭生长效应的影响。方法采用共转染双荧光素酶相对活性检测方法检测乳腺癌MCF-7细胞中FHL2对Id1介导的转录抑制功能的影响,MTT方法检测细胞的增殖能力,Transwell方... 目的探讨FHL2对分化抑制蛋白1(Id1)的转录调控活性及Id1促乳腺癌细胞侵袭生长效应的影响。方法采用共转染双荧光素酶相对活性检测方法检测乳腺癌MCF-7细胞中FHL2对Id1介导的转录抑制功能的影响,MTT方法检测细胞的增殖能力,Transwell方法观察细胞的侵袭能力。结果Id1对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子E47介导的转录激活功能具有显著抑制作用,而FHL2明显削弱了该效应,并呈现出对FHL2转染剂量的依赖性;与空载体转染组比较,Id1明显促进了MCF-7细胞的增殖速率与侵袭能力,而该效应可被FHL2显著削弱(P<0.05)。结论FHL2可通过抑制Id1的功能活性来抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭生长,为深入研究FHL2-Id1信号途径在乳腺癌发生发展中的功能效应奠定了基础。 展开更多
关键词 FHL2 分化抑制蛋白1 功能抑制蛋白 MCF-7细胞 细胞增殖
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Macro Domain家族成员LRP16是多种核受体的相互作用因子 被引量：2
16
作者 杨洁 赵亚力 +1 位作者 伍志强 韩为东 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期737-743,共7页
LRP16基因是macro domain家族成员之一,C末端含有唯一的1个保守的功能结构域.既往研究表明,该基因具有雌激素反应性,并可通过与雌激素受体α(ERα)相互作用调控其转录活性.近期我研究组发现,LRP16可与雄激素受体(AR)的共激活因子ART-27... LRP16基因是macro domain家族成员之一,C末端含有唯一的1个保守的功能结构域.既往研究表明,该基因具有雌激素反应性,并可通过与雌激素受体α(ERα)相互作用调控其转录活性.近期我研究组发现,LRP16可与雄激素受体(AR)的共激活因子ART-27相互作用.本研究首先通过GST pull-down方法验证LRP16/ART-27/AR三者之间相互作用关系,并用免疫共沉淀实验明确了LRP16与AR存在直接的相互作用,且这种相互作用并不依赖于ART-27的存在;采用GST pull-down进一步明确LRP16与AR相互作用的结构域.结果发现,LRP16通过C端的macro domain结构域与AR的LBD域相互作用;鉴于核受体家族有较高程度的氨基酸序列保守性与功能结构域的相似性,通过GST pull-down验证了LRP16与核受体超家族成员ERβ、GR、PPARα、PPARγ的相互作用,提示LRP16至少还可与ERα以外的5个核受体家族成员相互作用;进一步采用核受体荧光素酶报告基因转染细胞,通过检测荧光素酶活性证实LRP16可增强AR、GR、ERβ、PPARα、PPARγ的转录激活活性.本研究初步证实,macro domain家族成员LRP16可与多个核受体相互作用,并增强其转录激活活性,是核受体家族的共激活因子,为进一步研究LRP16在核受体转录调控中的生理病理学功能奠定基础. 展开更多
关键词 LRP16 雄激素受体 核受体 蛋白相互作用 结构域 共激活因子
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LRP16与ERα相互作用增强ERα介导的转录活性 被引量：2
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作者 韩为东 伍志强 +6 位作者 臧丽 赵亚力 孟元光 李琦 司艺龄 郝好杰 母义明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期566-573,共8页
LRP16是一个雌激素(E2)通过受体α(ERα)诱导表达的靶基因,LRP16不仅促进人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,而且促进细胞的侵袭生长,但对LRP16作用的分子机制尚不清楚.首先,检测到LRP16表达缺陷明显削弱了MCF-7细胞对E2的反应性增殖能力;采用Nor... LRP16是一个雌激素(E2)通过受体α(ERα)诱导表达的靶基因,LRP16不仅促进人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,而且促进细胞的侵袭生长,但对LRP16作用的分子机制尚不清楚.首先,检测到LRP16表达缺陷明显削弱了MCF-7细胞对E2的反应性增殖能力;采用Northern印迹与Western印迹法,进一步检测到抑制LRP16表达,明显损害了ERα靶基因对E2诱导上调的反应性,这些基因包括了cyclinD1,c-myc,c-fos,MTA3,pS2和维甲酸受体α基因(RARα)等;以上结果提示,LRP16参与了ERα介导的信号途径.将ERα模式启动子报告基因3×ERE-TATA-Luc,ERα以及LRP16表达载体共转染MCF-7与HeLa细胞.结果发现,LRP16增强了ERα对报告基因的转录激活,并呈现对LRP16的剂量依赖性;进而采用GST-pulldown以及免疫共沉淀方法证实了LRP16与ERα之间的直接相互作用,该作用不依赖于E2的存在,但可被E2增强;采用哺乳动物双杂交方法进一步证实了ERα与LRP16相互作用位点存在于A/B区的激活功能域-1(AF-1).以上结果表明,LRP16是ERα的一个共激活因子,通过相互作用,LRP16增强了ERα介导转录活性.该研究为LRP16促进ERα阳性乳腺癌细胞增殖与侵袭生长提供了合理的分子解释. 展开更多
关键词 雌激素受体Α LRP16 相互作用 共激活因子
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宫颈癌组织中LRP16和CIAP2的表达及其意义 被引量：4
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作者 于丹 伍志强 +3 位作者 梅倩 白桦 韩为东 孟元光 《现代肿瘤医学》 CAS 2015年第5期678-681,共4页
目的:探讨宫颈癌组织中LRP16和CIAP2蛋白的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化的方法检测正常宫颈组织24例,宫颈上皮内瘤变(CIN)30例(CINⅠ+CINⅡ18例,CINⅢ12例),宫颈癌组织66例中LRP16和CIAP2的表达,分析其与患者年龄... 目的:探讨宫颈癌组织中LRP16和CIAP2蛋白的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化的方法检测正常宫颈组织24例,宫颈上皮内瘤变(CIN)30例(CINⅠ+CINⅡ18例,CINⅢ12例),宫颈癌组织66例中LRP16和CIAP2的表达,分析其与患者年龄、宫颈癌临床分期、组织学分级、病理类型及有无淋巴结转移的关系。结果:LRP16在正常宫颈组织,CINⅠ+CINⅡ、CINⅢ,宫颈癌组织中的阳性表达率分别为16.67%,33.33%,66.67%,69.70%;CIAP2为8.33%,22.22%,50.00%,53.03%。宫颈癌组和正常宫颈组、CINⅠ-Ⅱ组相比较差异均有统计学意义(P<0.05),宫颈癌组和CINⅢ组比较差异无明显的统计学意义(P>0.05)。LRP16蛋白的表达水平与CIN及宫颈癌呈正相关,检测LRP16对了解CIN及宫颈癌生物学行为和评估预后具有一定的价值。LRP16和CIAP2的阳性表达率与临床分期、组织学分级和有无淋巴结转移均有相关性(P<0.05);LRP16和CIAP2的表达存在正相关性(P<0.05)。结论:LRP16和CIAP2在宫颈癌组织中表达水平的上调可能在宫颈癌的发生发展和转移浸润中起着重要的作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 免疫组织化学 LRP16 CIAP2
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FHL2通过相互作用抑制Id2的功能活性 被引量：2
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作者 韩为东 赵亚力 +4 位作者 伍志强 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期810-817,共8页
分化抑制蛋白2(Id2)通过抑制碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)类转录因子的功能活性调控多种组织细胞的分化发育,并参与人类多种肿瘤的发生与进展.Id2相互作用蛋白可能调控其翻译后的功能活性.本研究以HLH结构域缺失的Id2作为诱饵蛋白,采用酵母... 分化抑制蛋白2(Id2)通过抑制碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)类转录因子的功能活性调控多种组织细胞的分化发育,并参与人类多种肿瘤的发生与进展.Id2相互作用蛋白可能调控其翻译后的功能活性.本研究以HLH结构域缺失的Id2作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法对MCF-7 cDNA文库进行筛选,识别了1个新的Id2相互作用蛋白FHL2(属于LIM蛋白家族的一员),哺乳动物双杂交实验系统验证了Id2与FHL2之间的相互作用,同时证实,该作用不依赖于Id2中的HLH结构域;GST-pulldown、免疫共沉淀方法,进一步证实FHL2/Id2之间的相互作用;免疫荧光共定位实验结果证实,FHL2/Id2相互作用主要发生在细胞核内;共转染实验结果发现,FHL2通过相互作用阻抑了Id2对bHLH类转录因子E47的功能抑制活性.总之,本研究识别了1个新的Id2相互作用蛋白FHL2,通过直接的相互作用,FHL2抑制了Id2的功能活性,FHL2可能参与调控Id2介导的细胞分化与发育过程,并可能参与肿瘤的发生与进展. 展开更多
关键词 FHL2 分化抑制蛋白2(Id2) 相互作用 抑制子
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LRP16基因通过雌激素受体α介导抑制Ishikawa细胞中E-钙黏着素的转录活性 被引量：5
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作者 孟元光 韩为东 +3 位作者 赵亚力 黄柯 伍志强 母义明 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期368-370,共3页
目的:既往研究表明LRP16基因过表达通过下调E-钙黏着素促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭生长,本研究目的在于探讨LRP16基因下调E-钙黏着素的分子途径。方法:用免疫组化方法检测LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E-钙黏着素的表达;用共... 目的:既往研究表明LRP16基因过表达通过下调E-钙黏着素促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭生长,本研究目的在于探讨LRP16基因下调E-钙黏着素的分子途径。方法:用免疫组化方法检测LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E-钙黏着素的表达;用共转染与荧光素酶实验检测LRP16基因对E-钙黏着素启动子转录活性的影响;用染色质免疫共沉淀实验检测雌激素受体α(ERα)与LRP16蛋白在E-钙黏着素启动子区的招募状况。结果:E-钙黏着素在LRP16过表达的Ishikawa细胞中的表达水平明显下调;LRP16抑制了E-钙黏着素启动子的转录活性,该效应呈现对雌激素(E2)存在的依赖性特征;LRP16本身没有与E-钙黏着素启动子区结合,但明显抑制了ERα与E-钙黏着素启动子区的结合。结论:LRP16通过抑制ERα对E-钙黏着素基因的转录激活活性,下调E-钙黏着素在Ishikawa细胞中的表达水平。 展开更多
关键词 LRP16基因 E-钙黏着素 雌激素受体Α ISHIKAWA细胞
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