脂蛋白脂肪酶(LPL)基因缺陷相关疾病与治疗进展

1

作者 乌日乐 余双庆 +2 位作者 夏艳 吴小兵 董小岩 《中国医药导刊》 2024年第3期213-223,共11页

脂蛋白脂肪酶(LPL)是人体脂蛋白中甘油三酯代谢的关键限速酶,由心肌、骨骼肌、脂肪细胞等实质细胞合成,分泌到细胞间隙与硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)结合,在肝素的作用下解离,被毛细血管内皮细胞上的糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白... 脂蛋白脂肪酶(LPL)是人体脂蛋白中甘油三酯代谢的关键限速酶,由心肌、骨骼肌、脂肪细胞等实质细胞合成,分泌到细胞间隙与硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)结合,在肝素的作用下解离,被毛细血管内皮细胞上的糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(GPIHBP1)捕获转位入血,将血液中脂蛋白中核心甘油三酯水解,释放游离脂肪酸,供机体氧化利用或储存。其活性受多种互作蛋白调节,包括ApoCs、ANGPTLs、LMF1等。编码LPL的基因发生突变、蛋白合成加工过程出现错误或相关互作蛋白异常都会导致LPL缺失或功能异常,出现血脂升高或伴发胰腺炎等临床症状,严重威胁患者的生命健康。目前LPL缺陷相关疾病的临床常规治疗手段是降脂药与严格饮食控制相结合,治疗效果并不理想。近年来,以LPL及其互作蛋白基因为靶点的药物相继进入临床研究和上市阶段,取得了良好的临床效果,其中以基因替代、寡核苷酸和小RNA类药物最受关注。本综述结合LPL的特性、LPL缺乏症(LPLD)的病理机制,总结现有的治疗方法及药物研发进展,以期对LPLD的药物研发和医学干预提供思路。 展开更多

关键词 脂蛋白脂肪酶 基因缺陷 高甘油三酯血症 基因治疗

下载PDF 职称材料

HIV-1B亚型gp120基因密码子优化前后免疫原性的比较 被引量：8

2

作者 余双庆 冯霞 +3 位作者 陈国敏 龚非 周玲 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期214-217,共4页

对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两... 对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两者免疫Balb/C小鼠后的抗体和CTL应答。Westernblot检测结果显示:优化后基因的体外表达量明显高于野生型基因,rAAV modgp120与rAAV wtgp120相比可更好地诱导Balb/C小鼠的CTL应答,但检测不到明显的抗体反应。由此得出结论,优化后gp120基因的体外表达量明显高于野生型基因,并且可以诱导更强的特异性CTL应答,但检测不到gp120抗体。 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒I型 HIV-1 GP120 基因 密码子 免疫原性 重组腺伴随病毒

下载PDF 职称材料

1型和2型外壳蛋白构建的AAV载体携带HIV-1 gag诱导免疫反应的比较研究 被引量：3

3

作者 刘红梅 余双庆 +4 位作者 冯霞 刘新蕾 董小岩 吴小兵 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期177-182,共6页

比较两种血清型的腺病毒伴随病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体携带HIV-1gag基因肌肉注射诱导小鼠免疫反应的特点。分别制备携带EGFP和HIV-1gag基因的重组AAV2/1(AAV1)和AAV2载体。小鼠肌肉注射rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP,观察注射局部... 比较两种血清型的腺病毒伴随病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体携带HIV-1gag基因肌肉注射诱导小鼠免疫反应的特点。分别制备携带EGFP和HIV-1gag基因的重组AAV2/1(AAV1)和AAV2载体。小鼠肌肉注射rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP,观察注射局部EGFP的表达。将rAAV1-gag和rAAV2-gag分别以0、3周初免/加强方式肌肉注射免疫BALB/c小鼠以及新西兰白兔。ELISA法检测抗HIV-1 Gag P24蛋白的特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测Gag特异性的CTL反应。结果表明,rAAV1-EGFP在小鼠肌肉的表达强度显著高于rAAV2-EGFP;用Western blot法和间接免疫荧光法检测rAAV1-gag和rAAV2-gag体外转染的293细胞,均可检测到HIV-1 Gag蛋白的表达;在小鼠体内rAAV1-gag和rAAV2-gag组均可检测到特异性P24抗体,抗体滴度rAAV1-gag组显著高于rAAV2-gag组;而无论rAAV1-gag组还是rAAV2-gag组,特异性CTL反应均较低,与阴性对照组相比均无显著性差异;两种载体免疫兔子也都可检测到特异性P24抗体,同样地,rAAV1-gag组显著高于rAAV2-gag组。结论:携带HIV-1gag基因的rAAV1或rAAV2以肌肉注射方式免疫小鼠主要诱导特异Gag的体液免疫反应;且rAAV1可诱导很强的抗HIV-1 Gag特异性抗体,抗体水平显著高于rAAV2。 展开更多

关键词 HIV-1 GAG 腺病毒伴随病毒 免疫反应

下载PDF 职称材料

HIV-1B亚型gag基因密码子优化及其免疫原性的研究 被引量：2

4

作者 冯霞 余双庆 +4 位作者 刘红梅 刘新蕾 王小利 周玲 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期190-195,共6页

从河南HIV-1流行区感染者中克隆HIV-1 B亚型gag基因,通过序列比对获得其一致性共有序列,对该共有序列按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Western blot方法比较优化前后gag基因体外表达量。发现对gag基因进行密码子优化可显著... 从河南HIV-1流行区感染者中克隆HIV-1 B亚型gag基因,通过序列比对获得其一致性共有序列,对该共有序列按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Western blot方法比较优化前后gag基因体外表达量。发现对gag基因进行密码子优化可显著提高其表达水平。将优化后的mod.gag基因插入重组腺病毒载体,构建了重组病毒rAdV-mod.gag。在BALB/c小鼠体内分别以108PFU及109PFUr AdV-mod.gag疫苗单独免疫两次均可产生较高水平的gag特异性细胞免疫反应。由此得出结论,对gag基因的密码子优化是成功的;表达优化后gag基因的重组腺病毒疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答。 展开更多

关键词 HIV-1 GAG 密码子优化 重组腺病毒 CTL应答

下载PDF 职称材料

AAV载体基因药物临床生物样本分析要点及挑战

5

作者 余双庆 吴小兵 《中国医药导刊》 2023年第7期669-676,共8页

细胞和基因治疗已进入高速发展期,多种病毒和非病毒载体被应用于细胞和基因治疗领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)载体因其对治疗基因的高效转导率、持久的表达能力和良好的安全性等特点,在遗传病的体内基因治疗领域... 细胞和基因治疗已进入高速发展期,多种病毒和非病毒载体被应用于细胞和基因治疗领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)载体因其对治疗基因的高效转导率、持久的表达能力和良好的安全性等特点,在遗传病的体内基因治疗领域得到广泛应用。随着越来越多的AAV载体基因药物进入临床研究阶段,AAV载体药物的生物分析也越来越受关注,涉及药物代谢动力学(pharmacokinetics, PK)、药效学(pharmacodynamics, PD)、免疫原性、病毒脱落和基因整合监测等方面,目前均缺乏标准化的分析方法、标准品和对照品,在分析方法验证方案、接受标准等方面亦尚无统一规定。囿于AAV载体药物组成和作用机制的复杂性,无论是分析方法、结果解释,还是监管机构的建议和要求等方面均不同于传统小分子和蛋白药物。本研究结合AAV载体基因药物特点、监管机构建议和已发表的临床研究,概述AAV载体基因药物临床生物样本给药前、给药后分析工作要点及面临的挑战,以期为临床上AAV载体基因治疗药物的研究开发提供借鉴和参考。 展开更多

关键词 AAV载体 基因治疗 生物分析 临床试验

下载PDF 职称材料

中国流行株C基因型HBV稳定复制表达小鼠模型的建立 被引量：2

6

作者 杨悦 高俪 +9 位作者 许智慧 余双庆 李瑞生 黄鹏宇 乔艳 李进 董小岩 吴小兵 刘妍 徐东平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期793-797,共5页

目的构建稳定复制中国流行株C基因型HBV的小鼠模型。方法将携带1.3倍C基因型HBV基因组（adr血清型）的重组腺相关病毒r AAV8-1.3HBV-C转导人肝癌细胞Hu H7,采用ELISA法评估HBV抗原（HBs Ag、HBe Ag）在肝癌细胞中的表达。筛选高表达的... 目的构建稳定复制中国流行株C基因型HBV的小鼠模型。方法将携带1.3倍C基因型HBV基因组（adr血清型）的重组腺相关病毒r AAV8-1.3HBV-C转导人肝癌细胞Hu H7,采用ELISA法评估HBV抗原（HBs Ag、HBe Ag）在肝癌细胞中的表达。筛选高表达的重组病毒,经尾静脉注射入6~8周龄C57BL/6小鼠体内,建立HBV-C复制小鼠模型（实验组,n=8）;同时建立文献已报道HBV-D复制小鼠模型（对照组,n=7,r AAV8-1.3HBV-D,ayw血清型）。动态监测两组小鼠血清（眼底静脉丛采血）HBV DNA载量和HBs Ag、HBe Ag的抗原表达量;于第9周处死小鼠,HE染色观察肝组织病理改变,免疫组化染色分析HBs Ag和HBc Ag的表达。结果重组病毒r AAV8-1.3HBV-C体外转导人肝癌细胞Hu H7,72h后细胞上清中可检测到HBs Ag和HBe Ag的表达。小鼠注射重组病毒后第2、3、5、7、9周,血清HBV DNA存在稳定复制,血清HBe Ag表达水平较稳定,但血清HBs Ag表达存在波动。两组小鼠肝组织未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常,但可检测到HBs Ag和HBc Ag蛋白。结论利用高嗜肝性重组8型腺相关病毒载体携带1.3倍C基因型HBV基因组体内转导C57BL/6小鼠,成功地建立了稳定复制并持续表达C基因型HBV的小鼠模型。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 基因型 模型 动物

下载PDF 职称材料

海联科藻源素,一斤白鲢少4毛!

7

作者 余双庆 《渔业致富指南》 2015年第12期61-62,共2页

洪湖养殖人均拥有池塘面积大，饲料投喂量低，因此养户为了追求花白鲢产量，每年使用大量的生物肥、磷肥、尿素以及碳铵，但是各生物肥的质量参差不齐，很多养殖户使用高价低效的生物肥后，效益没有得到大的改善，近几年花白鲢产量一直... 洪湖养殖人均拥有池塘面积大，饲料投喂量低，因此养户为了追求花白鲢产量，每年使用大量的生物肥、磷肥、尿素以及碳铵，但是各生物肥的质量参差不齐，很多养殖户使用高价低效的生物肥后，效益没有得到大的改善，近几年花白鲢产量一直没有大的突破，亩产仅400斤左右。2015年，海大以提升池塘花白鲢产量效益为初衷，推出海大生态肥藻源素，旨在为养户提高花白鲢产量，提升池塘效益。 展开更多

关键词 花白鲢 产量效益 池塘面积 藻 饲料投喂量 生物肥 养殖户 生态肥

下载PDF 职称材料

C基因型多重耐药乙型肝炎病毒稳定复制表达小鼠模型的建立

8

作者 刘璐洁 杨悦 +7 位作者 余双庆 许智慧 赵丽 刘新光 吴小兵 徐东平 董小岩 刘妍 《传染病信息》 2018年第6期532-536,共5页

目的建立高嗜肝性重组8型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 8, rAAV8)介导的C基因型多重耐药乙型肝炎病毒(multidrug resistant hepatitis B virus, MDR HBV)稳定复制表达小鼠模型。方法分别构建rAAV8-1.3倍C基因型多重... 目的建立高嗜肝性重组8型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 8, rAAV8)介导的C基因型多重耐药乙型肝炎病毒(multidrug resistant hepatitis B virus, MDR HBV)稳定复制表达小鼠模型。方法分别构建rAAV8-1.3倍C基因型多重耐药型(HBV逆转录酶区含有rtL180M+S202G+M204V+N236T位点)和野生型HBV重组质粒,然后包装纯化并筛选高滴度重组病毒(rAAV8-1.3HBV-C-MDR和rAAV8-1.3HBV-C-WT),将病毒经尾静脉注射至6～8周龄的C57BL/6小鼠,建立C基因型多重耐药型(实验组,n=6)和野生型(对照组,n=6)HBV稳定复制表达小鼠模型,监测病毒复制和抗原表达至9周并于第9周末处死小鼠,取肝脏组织进行HE染色和免疫组化染色,观察肝组织病理改变并分析HBsAg和HBcAg的表达。结果小鼠注射重组病毒后第2、3、5、7、9周,血清HBV DNA表达较稳定,实验组和对照组小鼠血清HBV DNA波动范围分别为3.67～4.06 lg IU/ml和4.36～5.11 lg IU/ml。血清HBsAg和HBeAg在观察期间均高表达,第2周实验组和对照组血清HBsAg和HBeAg OD值分别为3.501±0.230和2.989±0.250,3.967±0.230和3.384±0.230。2组小鼠肝组织未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常,但可检测到HBsAg和HBcAg蛋白表达。结论利用高嗜肝性rAAV8载体携带1.3倍C基因型MDR HBV基因组体内转导C57BL/6小鼠,成功建立了稳定复制并持续表达C基因型MDR HBV的小鼠模型,为后续评价抗MDR HBV药物疗效提供实验平台。 展开更多

关键词 多重耐药突变 乙型肝炎病毒 病毒复制 抗原表达 小鼠模型

下载PDF 职称材料

生物样本中9型腺相关病毒结合抗体ELISA检测方法的建立和评价

9

作者 刘华凤 曾杏梅 +4 位作者 董哲岳 丰宇晨 朱智明 余双庆 董小岩 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期742-749,共8页

建立生物样本中9型腺相关病毒(Adeno⁃associated virus type 9,AAV9)结合抗体的体外检测方法,验证该方法的临界值、灵敏度、精密度、特异性和药物耐受性指标。建立间接酶联免疫吸附方法(Enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA),用健... 建立生物样本中9型腺相关病毒(Adeno⁃associated virus type 9,AAV9)结合抗体的体外检测方法,验证该方法的临界值、灵敏度、精密度、特异性和药物耐受性指标。建立间接酶联免疫吸附方法(Enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA),用健康人血清、AAV9载体基因药物干预的小鼠免疫血清对方法的关键性能进行验证。该检测方法对人血清样本的筛选临界值(Screening cut point,SCP)是1.50,滴度临界值(Titer cut point,TCP)是2.46,确证临界值(Confirmation cut point,CCP)是45.75%,灵敏度是75.79 ng/mL,批间精密度变异为7.28%。未检测到5μg/mL的抗AAV5小鼠单抗、抗AAV8小鼠单抗特异性结合AAV9载体。高、中、低浓度的质控样品均可耐受AAV9病毒颗粒的药物浓度为1×109 CP/mL。检测5只给药小鼠血清,给药前血清AAV9结合抗体筛选阴性;给药后28d血清抗体筛选阳性;再经确证实验,28 d血清8000倍稀释后,AAV9病毒颗粒抑制率均>CCP,为确证阳性;测得抗体滴度是1∶128000~1∶256000。本研究建立的AAV9结合抗体ELISA检测方法符合《药物免疫原性研究技术指导原则》要求,可用于以AAV9为载体的基因药物临床试验样本中AAV9结合抗体的检测。 展开更多

关键词 AAV9 ELISA 结合抗体 生物分析

原文传递

表达HIV-1 gag基因的重组AAV2／1和Ad5疫苗免疫原性比较 被引量：2

10

作者 余双庆 冯霞 +3 位作者 刘红梅 杨海儒 李红霞 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期421-423,共3页

目的在小鼠体内比较表达HIV-1 gag基因的重组AAV2／1和Ad5疫苗的免疫原性。方法分别用rAAV2／1-gag或rAd5-gag单独免疫BALB／c小鼠一次或两次，于免疫后不同时间点用CFSE染色法和胞内细胞因子染色法检测Gag特异性细胞免疫应答，用ELISA... 目的在小鼠体内比较表达HIV-1 gag基因的重组AAV2／1和Ad5疫苗的免疫原性。方法分别用rAAV2／1-gag或rAd5-gag单独免疫BALB／c小鼠一次或两次，于免疫后不同时间点用CFSE染色法和胞内细胞因子染色法检测Gag特异性细胞免疫应答，用ELISA方法检测Gag特异性抗体反应。结果单次免疫结果显示，在所有检测点tAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答都比rAAV2／1-gag强，抗体反应在免疫后4周无明显差异。两次免疫后4周的检测结果表明，rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTE应答比rAAV2／1-gag强，但抗体反应比rAAV2／1-gag组弱。结论rAd5-gag诱导了很好的HIV-1特异性细胞和抗体反应，而rAAV2／1-gag诱导的HIV-1特异性抗体反应很强，但细胞免疫应答较弱。 展开更多

关键词 HIV-1 细小病毒科 腺病毒科 艾滋病疫苗

原文传递

重组HIV-1 gp120 AAV2/1在小鼠和恒河猴体内的免疫原性 被引量：1

11

作者 余双庆 冯霞 +3 位作者 刘红梅 杨海儒 李红霞 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期115-120,共6页

本文旨在研究表达HIV-1中国流行株gp120基因的重组腺相关病毒疫苗在小鼠和恒河猴体内的免疫原性。用rAAV2/1-gp120免疫BALB/c小鼠和恒河猴,分别用ELISA和HIV-1假病毒中和试验检测免疫动物血清中HIV-1特异性IgG抗体水平和中和抗体水平,用... 本文旨在研究表达HIV-1中国流行株gp120基因的重组腺相关病毒疫苗在小鼠和恒河猴体内的免疫原性。用rAAV2/1-gp120免疫BALB/c小鼠和恒河猴,分别用ELISA和HIV-1假病毒中和试验检测免疫动物血清中HIV-1特异性IgG抗体水平和中和抗体水平,用ELISPOT方法和体内杀伤实验检测HIV-1特异性细胞免疫应答水平。结果显示在小鼠体内用rAAV2/1-gp120仅免疫一次就能诱导较高水平的IgG抗体,IgG抗体至少能持续21周,但没有检测到中和抗体。rAAV2/1-gp120在小鼠体内诱导微弱水平的HIV-1特异性细胞免疫应答。rAAV2/1-gp120在恒河猴体内诱导的HIV-1特异性细胞和抗体反应均很弱,且检测不到中和抗体。提示rAAV2/1载体在诱导抗体反应方面具有特殊优势,但若希望诱导HIV-1特异性中和抗体,则需要改造env基因以提高其免疫原性。 展开更多

关键词 HIV-1 包膜糖蛋白Gp120 重组腺相关病毒 免疫原性

原文传递

河南省有偿供血者HIV-1外膜蛋白env基因序列分析及表型预测 被引量：5

12

作者 冯霞 杨海儒 +4 位作者 余双庆 周玲 李红霞 李泽琳 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期88-94,共7页

应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)从60例河南省HIV-1抗体阳性有偿献血者的外周血单核细胞的DNA样品中扩增全长env基因并对扩增产物测序,共扩增到21个全长env基因,序列分析发现其中15个env基因有完整的可读框(ORF),14个为B'亚型,与... 应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)从60例河南省HIV-1抗体阳性有偿献血者的外周血单核细胞的DNA样品中扩增全长env基因并对扩增产物测序,共扩增到21个全长env基因,序列分析发现其中15个env基因有完整的可读框(ORF),14个为B'亚型,与国际参考株RL42的基因离散率为4.87%±0.31%,1个为B亚型,与国际参考株HXB2的基因离散率为5.43%。根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并且分析及比较了重要的功能结构域。发现这15个序列的N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及净电荷数目,预测大多数分离株使用CCR5辅助受体;V3环四肽序列以典型欧美B亚型GPGR最多,占40%;gp120/gp41剪切位点高度保守,预测所有gp160前体都能有效剪切;四种广谱中和抗体2G12I、gG1b12、4E10及2F5的识别位点高度保守,表明大多数分离株对这四种中和抗体敏感。有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗研究和药物开发提供依据。 展开更多

关键词 供血者 HIV-1 序列测定 基因 env

原文传递

北京市性传播HIV-1感染者流行毒株gag基因序列测定和亚型分析 被引量：6

13

作者 叶景荣 郭蕾 +4 位作者 白立石 辛若雷 卢红艳 余双庆 曾毅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期136-139,共4页

目的 了解北京市性传播HIV-1感染者流行毒株亚型特点和流行规律.方法 随机采集北京市2008年新确证性传播HIV感染者的抗凝全血标本100份,分离血浆,提取病毒RNA,用套式聚合酶链反应扩增病毒gag基因,并进行序列测定和亚型分析.结果 系统进... 目的 了解北京市性传播HIV-1感染者流行毒株亚型特点和流行规律.方法 随机采集北京市2008年新确证性传播HIV感染者的抗凝全血标本100份,分离血浆,提取病毒RNA,用套式聚合酶链反应扩增病毒gag基因,并进行序列测定和亚型分析.结果 系统进化分析确定北京市性传播HIV-1感染者流行毒株存在8个亚型或流行重组型,分别为B亚型22份,B＇亚型8份,C亚型1份,CRF01_AE 38份,CRF02_AG 2份,CRF07 BC 9份,CRF08_BC 3份,疑似C/CRF01_AE重组型1份.结论 CRF01_AE和B亚型分别占45.2%和26.2%,为性传播感染者主要的亚型,应该加强我市HIV-1亚型流行情况的监测. 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒 亚型 套式聚合酶链反应

原文传递

含密码子优化型HIV-1 gp120基因重组腺病毒的构建及其免疫效果研究 被引量：3

14

作者 冯霞 余双庆 +3 位作者 陈国敏 左建民 周玲 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期113-117,共5页

目的　构建能表达野生型和密码子优化型人免疫缺陷病毒Ⅰ型 (HIV 1)B亚型中国流行株gp12 0基因的非复制型腺病毒。方法　按哺乳动物细胞偏好的密码子对HIV 1B亚型中国流行株Chgp4 2的gp12 0基因进行优化 ,合成优化基因。将野生型和密码... 目的　构建能表达野生型和密码子优化型人免疫缺陷病毒Ⅰ型 (HIV 1)B亚型中国流行株gp12 0基因的非复制型腺病毒。方法　按哺乳动物细胞偏好的密码子对HIV 1B亚型中国流行株Chgp4 2的gp12 0基因进行优化 ,合成优化基因。将野生型和密码子优化的gp12 0基因插入穿梭质粒 ,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1共转化E coliBJ5 183,获得重组子 ,转染 2 93细胞后获得重组病毒。分别以两种重组腺病毒疫苗免疫小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的特异性抗体 ,乳酸脱氢酶法检测小鼠细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)反应。结果　获得两株重组腺病毒rAd wt gp12 0和rAd mod gp12 0 ,能正确表达Gp12 0。rAd mod gp12 0比rAd wt gp12 0蛋白表达水平明显提高。重组腺病毒免疫小鼠后能产生HIV 1特异性的抗体及CTL反应 ,rAd mod gp12 0组明显优于rAd wt gp12 0组。结论　成功构建了表达野生型和密码子优化的HIV 1gp12 0基因的重组腺病毒 ,能诱导HIV 1特异性体液和细胞免疫反应。 展开更多

关键词 HIV-1 GP120 重组腺病毒 免疫效果 人免疫缺陷病毒Ⅰ型 密码子优化型 野生型 基因优化

原文传递

HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因改造及其重组DNA疫苗的构建 被引量：4

15

作者 陈丹瑛 汪孟冉 +6 位作者 何小周 叶景荣 余双庆 李秦剑 徐柯 曾毅 冯霞 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期227-229,共3页

目的 构建表达含有密码子优化的HIV-1 CRF01_AE亚型env基因的DNA疫苗,为多载体艾滋病治疗性疫苗的应用提供候选疫苗.方法 对HIV-1感染者血液样本进行型别分析,分型得到的AE亚型标本采用亚型特异性引物克隆env基因,通过序列比对获得其共... 目的 构建表达含有密码子优化的HIV-1 CRF01_AE亚型env基因的DNA疫苗,为多载体艾滋病治疗性疫苗的应用提供候选疫苗.方法 对HIV-1感染者血液样本进行型别分析,分型得到的AE亚型标本采用亚型特异性引物克隆env基因,通过序列比对获得其共有序列,对该序列按照哺乳动物密码子使用的偏嗜性进行优化,将人工合成的优化基因克隆至pVR载体,构建DNA疫苗.通过Western Blot方法比较优化前后env基因的表达.结果 成功获得32条具有完整的开放性阅读框的env克隆,型别分析确认均为CRF01_AE亚型.成功对其共有序列进行了优化、合成并构建了DNA疫苗pVR-mod.AE env,该疫苗与野生型的env基因（wt.AE env）相比可以高水平表达env基因,且不依赖Rev的存在.结论 对HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因的优化改造及重组DNA疫苗的构建是成功的. 展开更多

关键词 艾滋病疫苗 基因 env 质粒 密码子

原文传递

表达HIV-1 B亚型env基因的质粒DNA及腺病毒载体疫苗的免疫原性研究 被引量：4

16

作者 杨海儒 张凌斐 +4 位作者 冯霞 余双庆 庄著伦 李红霞 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期415-417,共3页

目的 构建表达中国B亚型HIV-1流行株env基因的DNA及重组腺病毒载体疫苗,将其用于预防或治疗HIV感染.方法 构建质粒DNA疫苗pVR-gp160及重组腺病毒载体疫苗rAdV-gp160.将这两种疫苗以不同的方式免疫BALB/c小鼠,分别采用ELISPOT方法 和ELIS... 目的 构建表达中国B亚型HIV-1流行株env基因的DNA及重组腺病毒载体疫苗,将其用于预防或治疗HIV感染.方法 构建质粒DNA疫苗pVR-gp160及重组腺病毒载体疫苗rAdV-gp160.将这两种疫苗以不同的方式免疫BALB/c小鼠,分别采用ELISPOT方法 和ELISA方法 检测免疫小鼠中HIV-1 Gp120特异性细胞免疫反应及抗体反应.结果 DNA疫苗单独免疫及DNA疫苗初免/腺病毒疫苗加强免疫的联合免疫方案皆可诱导较高水平的Gp120特异性细胞免疫反应;而在体液免疫方面,各实验组产生的Gp120特异性抗体水平都较低.结论 所构建的DNA疫苗及rAdV疫苗能有效表达Gp160蛋白,并可有效激活机体的细胞免疫反应. 展开更多

关键词 艾滋病疫苗 基因 env 质粒 腺病毒科

原文传递

含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究 被引量：2

17

作者 冯霞 余双庆 +5 位作者 陈国敏 吴小兵 左建民 董温平 周玲 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期312-315,共4页

目的　探讨含HIV 1gp12 0基因的重组腺相关病毒 (rAAV)和重组腺病毒 (rAdV)疫苗在BALB c小鼠中联合免疫的效果。方法　将密码子优化的HIV 1gp12 0基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒 (AdV)载体质粒 ,构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫... 目的　探讨含HIV 1gp12 0基因的重组腺相关病毒 (rAAV)和重组腺病毒 (rAdV)疫苗在BALB c小鼠中联合免疫的效果。方法　将密码子优化的HIV 1gp12 0基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒 (AdV)载体质粒 ,构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗。将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的gp12 0特异性抗体 ,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)应答。结果　两种重组病毒均可表达目的基因gp12 0 ;在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应 ,但用rAAV初免 2次 ,再用rAdV加强 3次所诱发的CTL和血清IgG反应最强。 展开更多

关键词 GP120 联合免疫 HIV-1 血清 重组腺相关病毒 小鼠 基因 载体疫苗 重组病毒 抗体反应

原文传递

Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究 被引量：2

18

作者 莫武宁 周玲 +8 位作者 吴小兵 王湛 唐安洲 黄光武 余双庆 王琦 叶树清 杜海军 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期226-228,共3页

目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2），免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量（1．5×10^10TCID50/只）、中剂量（1．5×10^9TCID50/只）、低剂量（1．5×10^8TCID50... 目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2），免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量（1．5×10^10TCID50/只）、中剂量（1．5×10^9TCID50/只）、低剂量（1．5×10^8TCID50/只）Ad5F35-LMP2重组腺病毒，同时设对照组（PBS4．0 ml／只）。肌内注射免疫恒河猴，每个月一次，共免疫3次，第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV—LMP2细胞毒性T细胞应答，同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答，免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系，较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV—LMP2特异性细胞和体液免疫反应。 展开更多

关键词 重组 遗传 腺病毒 人 疱疹病毒4型 人 膜蛋白质类 恒河猴 免疫 细胞

原文传递

含密码子优化的SIV gag基因的DNA疫苗与rAd5疫苗构建及免疫原性评价 被引量：3

19

作者 陈丹瑛 何小周 +5 位作者 汪孟冉 余双庆 徐柯 李秦剑 曾毅 冯霞 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2014年第1期17-19,共3页

目的 构建含有SIVgag基因的DNA疫苗和重组腺病毒疫苗,为后期在SIV感染的猴模型中进行多载体疫苗联合免疫策略的治疗效果评价奠定基础.方法 将SIV gag基因按照哺乳动物偏嗜密码子进行优化并构建至pVR载体,作为DNA疫苗.以Western Blot方... 目的 构建含有SIVgag基因的DNA疫苗和重组腺病毒疫苗,为后期在SIV感染的猴模型中进行多载体疫苗联合免疫策略的治疗效果评价奠定基础.方法 将SIV gag基因按照哺乳动物偏嗜密码子进行优化并构建至pVR载体,作为DNA疫苗.以Western Blot方法比较优化前后gag基因表达水平.将优化后的gag基因插入重组腺病毒载体,构建rAd5-SIVgag疫苗.在BALB/c小鼠中分别比较DNA疫苗及rAd5-SIV.gag疫苗单独及联合免疫的效果.结果 密码子优化的SIVgag基因的表达水平远高于野生型SIVgag基因.重组腺病毒疫苗免疫一次或两次诱导的细胞免疫反水平分别高于DNA疫苗免疫一次或两次.两种疫苗联合免疫的反应水平与腺病毒疫苗免疫两次的水平相当,高于DNA疫苗单独免疫及腺病毒疫苗单独免疫一次的结果.结论 成功优化了SIV gag基因,使其不依赖Rev高水平表达；成功构建了表达优化后SIV gag基因的DNA疫苗和rAd5疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答. 展开更多

关键词 艾滋病疫苗 质粒 腺病毒科

原文传递

慢病毒介导白介素IL15在人树突状细胞中表达研究 被引量：3

20

作者 徐柯 冯霞 +2 位作者 余双庆 曾毅 胥少华 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期132-134,共3页

目的本研究建立了表达人白细胞介素15的重组慢病毒，验证其在人树突状细胞中的表达，希望以此用于疫苗佐剂或基因免疫治疗。方法从人PBMC中扩增IL15基因，克隆至慢病毒表达质粒中，用plvx．ILl5-Ires—gfp包装出重组慢病毒，感染293T细... 目的本研究建立了表达人白细胞介素15的重组慢病毒，验证其在人树突状细胞中的表达，希望以此用于疫苗佐剂或基因免疫治疗。方法从人PBMC中扩增IL15基因，克隆至慢病毒表达质粒中，用plvx．ILl5-Ires—gfp包装出重组慢病毒，感染293T细胞用以验证目的基因IL15表达。结果抗生素筛选获得表达IL15的细胞系，目的基因能够在体外稳定的表达。结论构建的慢病毒能够在人未成熟树突状细胞中稳定的表达IL15，可以进一步作为疫苗佐剂或基因免疫治疗使用。 展开更多

关键词 白细胞介素15 基因 树突细胞

原文传递