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sFas、sFasL及细胞因子在类风湿关节炎疾病中的意义 被引量：5
1
作者 余奇文 张勇 +3 位作者 张冬青 李宁丽 马安伦 周光炎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期141-142,共2页
目的研究sFas,sFasL,细胞因子及抗单链DNA抗体与类风湿关节炎rheumatoidarthritisRA致病的关系及意义。方法采用ELISA法检测32名RA患者的血清标本。结果RA患者血清sFassFasLIL6及IL8的水平均高于正常对照组。活动期sFasL,IL6及IL... 目的研究sFas,sFasL,细胞因子及抗单链DNA抗体与类风湿关节炎rheumatoidarthritisRA致病的关系及意义。方法采用ELISA法检测32名RA患者的血清标本。结果RA患者血清sFassFasLIL6及IL8的水平均高于正常对照组。活动期sFasL,IL6及IL8的水平显著高于非活动期P0.01,而sFas的水平未见显著差异。在32例RA患者中,有8例sFas和sFasL的水平同时升高,9例抗单链DNA抗体和sFasL同时升高。结论IL6和IL8的水平与RA的炎症程度有关。高浓度的sFas和sFasL可抑制Ts细胞对TH细胞的负向调节。由Fas/FasL启动淋巴细胞凋亡产生的核抗原,可致机体产生抗单链DNA抗体。检测sFassFasLIL6及IL8有助于对RA的诊断,并可为RA的免疫生物治疗提供依据。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 SFAS SFASL 细胞因子 抗单链DNA抗体
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槲寄生凝集素的制备与免疫学功能研究 被引量：2
2
作者 余奇文 张继英 +5 位作者 龚芳 马妍慧 程伟志 陈雪华 马安伦 张冬青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期59-62,共4页
目的:分析从中国槲寄生中提取的55 kD凝集素诱导T淋巴细胞增殖和肿瘤细胞凋亡的免疫学活性。方法:通过CM-Sepharose和ConA柱分离和纯化了分子量为55 kD的槲寄生凝集素。用流式细胞术和ELISA检测纯化的槲寄生凝集素诱导T淋巴细胞表型和... 目的:分析从中国槲寄生中提取的55 kD凝集素诱导T淋巴细胞增殖和肿瘤细胞凋亡的免疫学活性。方法:通过CM-Sepharose和ConA柱分离和纯化了分子量为55 kD的槲寄生凝集素。用流式细胞术和ELISA检测纯化的槲寄生凝集素诱导T淋巴细胞表型和细胞因子分泌格局。并经Annexin V染色法研究其诱导肿瘤细胞凋亡的免疫学机制。结果:从中国槲寄生中分离纯化了由两个30 kD亚基组成的55 kD槲寄生凝集素蛋白,其具有特异诱导人γδT细胞扩增和以Caspase依赖途径诱导Jurkat细胞凋亡,并能促进TNFα-释放和抑制IL-10的释放的作用。结论:中国槲寄生凝集素具有免疫学调节作用和诱导肿瘤细胞凋亡作用。在研究抗肿瘤和免疫学机制中具有应用价值。 展开更多
关键词 槲寄生凝集素 CASPASE 细胞凋亡 ΓΔT细胞
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T细胞疫苗接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠免疫机制的调节作用 被引量：1
3
作者 余奇文 沈帆霞 +6 位作者 柏峻 马安伦 张继英 王利 沈佰华 陈生弟 张冬青 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2004年第5期257-260,共4页
目的　探讨 T细胞疫苗 ( TCV)接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)免疫机制的调节作用。方法　取正常及 EAE大鼠腹股沟淋巴结细胞 ,经 MBP抗原诱导 ,制备 MBP特异的 TCV用于接种 ,以 HE染色观察髓鞘病变 ,MTT法检测细胞毒反应 ,FACS... 目的　探讨 T细胞疫苗 ( TCV)接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)免疫机制的调节作用。方法　取正常及 EAE大鼠腹股沟淋巴结细胞 ,经 MBP抗原诱导 ,制备 MBP特异的 TCV用于接种 ,以 HE染色观察髓鞘病变 ,MTT法检测细胞毒反应 ,FACS方法检测 T细胞亚群 ,ELISA方法检测血清中细胞因子含量。结果　接种 TCV后 ,CD8+细胞百分率上升 ,T细胞对脑细胞的杀伤率下降 ,血清中 IFN-γ与 TNF-α含量下降以及脑髓质炎症反应减弱 ,EAE发病率下降。结论　特异性 TCV接种可降低自身免疫反应性。 TCV通过淋巴细胞亚群的变化及细胞因子的调节 ,发挥对 展开更多
关键词 T细胞疫苗 LEWIS大鼠 实验性自身免疫性脑脊髓炎
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口服MBP诱导免疫耐受预防实验性变态反应性脑脊髓炎的研究
4
作者 余奇文 张冬青 +4 位作者 柏峻 马安伦 李宁丽 张继英 聂红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期473-474,478,共3页
目的 :探讨口服耐受对实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)的预防作用。方法 :给予健康Lewis大鼠口服MBP抗原诱导免疫耐受 ,随后以MBP +CFA于足底免疫 ,检测口服耐受对实验大鼠EAE发病的预防作用及对MBP特异性淋转率、细胞因子和抗MBP抗体... 目的 :探讨口服耐受对实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)的预防作用。方法 :给予健康Lewis大鼠口服MBP抗原诱导免疫耐受 ,随后以MBP +CFA于足底免疫 ,检测口服耐受对实验大鼠EAE发病的预防作用及对MBP特异性淋转率、细胞因子和抗MBP抗体等免疫功能的变化情况。结果 :致病组EAE发病率为 91 7% ,MBP特异性淋转率、IFN γ与TNF α含量升高 ,IL 10降低 ;口服耐受组EAE发病率为 2 1 4 % ,MBP特异性淋转率、IFN γ、TNF α回复至正常 ,IL 10含量低于正常。MBP抗体水平两组均比正常对照组高。结论 :口服耐受可降低宿主自身免疫反应性 ,减低EAE的发病率。 展开更多
关键词 MBP 诱导 免疫耐受 预防 实验性变态反应性脑脊髓炎 研究
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^(14)C放射酶分析西那普利药动学及生物利用度
5
作者 余奇文 张冬青 +3 位作者 李宁丽 沈伯华 李端 葛海良 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第1期17-19,共3页
目的研究抑平舒 (国产 )与西那普利药动学及生物等效性。　方法 14名志愿者分别单剂量口服2 .5mg抑平舒与西那普利 ,采用以14 C -HHL为ACE底物的放射酶分析法测定血药对ACE的抑制率及两者的药动学参数 ,并以AUC0→∞ 与Cmax/AUC0→∞ ... 目的研究抑平舒 (国产 )与西那普利药动学及生物等效性。　方法 14名志愿者分别单剂量口服2 .5mg抑平舒与西那普利 ,采用以14 C -HHL为ACE底物的放射酶分析法测定血药对ACE的抑制率及两者的药动学参数 ,并以AUC0→∞ 与Cmax/AUC0→∞ 为指标 ,用t检验法分析两种制剂的生物等效性。　结果两者的药 -时曲线可用二室模型拟合 ,两者的Cmax(ng·ml 1)分别为 82 .4与 83.5 ;tmax(h)分别为 2 .3与 2 .3;AUC0→∞(ng·ml 1·h)分别为175 9.0与 2 16 2 .9;Imax(% )分别为 97.11与 97.49。两者AUC0→∞ 与Cmax/AUC0→∞ 无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论抑平舒与西那普利为生物等效制剂 ,抑平舒的相对生物利用度为 81.3%。 展开更多
关键词 西那普利 药动学 生物利用度 碳14 放射酶分析
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多糖和益生菌对暗纹东方免疫功能的调节 被引量：26
6
作者 华雪铭 周洪琪 +3 位作者 张冬青 李宁丽 余奇文 沈佰华 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期230-235,共6页
为了研究多糖、益生菌等免疫增强剂对暗纹东方的免疫调节作用,本试验随机将暗纹东方[(167.8±24.4)g]分为6组。其中阳性对照组为免疫功能低下组,投喂基础饲料、注射8mg.kg-1体重的环磷酰胺;阴性对照组为免疫功能正常组,投喂基础饲... 为了研究多糖、益生菌等免疫增强剂对暗纹东方的免疫调节作用,本试验随机将暗纹东方[(167.8±24.4)g]分为6组。其中阳性对照组为免疫功能低下组,投喂基础饲料、注射8mg.kg-1体重的环磷酰胺;阴性对照组为免疫功能正常组,投喂基础饲料、注射生理盐水;其余试验组分别用含有0.2%壳聚糖、0.1%益生菌、甘露聚糖与益生菌混合物、壳聚糖与益生菌混合物的饲料连续投喂30d,同时注射8mg.kg-1体重的环磷酰胺。测定各组暗纹东方的外周血白细胞数量及吞噬活性、肝胰脏溶菌酶活性、头肾与脾脏淋巴细胞转化、头肾与脾脏IFN-α含量、头肾与脾脏IgM含量进行免疫功能的比较。结果表明,多糖和益生菌对免疫功能低下的暗纹东方具有免疫调节作用。所检测的各项免疫指标均有不同程度的恢复,或处于免疫功能正常与环磷酰胺所致免疫抑制水平之间,或恢复至正常水平或超过正常水平。不同免疫增强剂对同一种免疫器官、免疫细胞或免疫分子的调节作用或同一种免疫增强剂对不同的免疫器官或免疫细胞或免疫分子的调节作用均存在差异。从整体效果看,在所研究的4种免疫增强剂中,甘露聚糖与益生菌混合物的免疫调节作用最弱。 展开更多
关键词 暗纹东方纯 多糖 益生菌 免疫调节
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用荧光定量法检测Caspase-3的活性 被引量：14
7
作者 张勇 沈佰华 +3 位作者 余奇文 马安伦 李宁丽 张冬青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期188-190,共3页
目的通过检测Caspase3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行平行的方法学比较。结果Ju-rkat细胞经不同浓度50μmol/L和100μmo... 目的通过检测Caspase3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行平行的方法学比较。结果Ju-rkat细胞经不同浓度50μmol/L和100μmol/L的放线菌素D诱导后,Caspase3的活性显著增高,倍增值分别为10.091和10.818,相应的Caspase3活性单位为0.641和0.659;而未经诱导的Jurkat细胞仅为0.061。加入Cas-pase3抑制剂后,倍增值分别为0.101和0.119,Caspase3的活性单位为0.006和0.007。而用Hoechst法染色时,可见Jurkat细胞仅出现早期凋亡的形态学改变。结论荧光定量法是一种良好的定量检测Caspase3的方法,可用于检测早期的细胞凋亡。 展开更多
关键词 CASPASE-3 荧光定量法 细胞凋亡 检测 JURKAT细胞
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完全与不完全睡眠剥夺对小鼠免疫功能的影响 被引量：14
8
作者 杨天阳 黄燕华 +1 位作者 蔡昊旻 余奇文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期115-117,共3页
目的:研究经完全与不完全睡眠剥夺以后小鼠免疫功能的变化。方法:通过光照模拟全白天生活、黑箱模拟全黑夜生活,连续2周干扰小鼠睡眠;通过转轮24 h和72 h短期全剥夺小鼠睡眠;实验小鼠实施睡眠干扰前以BSA免疫一次。采用称重脾脏;流式细... 目的:研究经完全与不完全睡眠剥夺以后小鼠免疫功能的变化。方法:通过光照模拟全白天生活、黑箱模拟全黑夜生活,连续2周干扰小鼠睡眠;通过转轮24 h和72 h短期全剥夺小鼠睡眠;实验小鼠实施睡眠干扰前以BSA免疫一次。采用称重脾脏;流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量及其比例;以ELISA方法检测血清中IL-2、IL-10以及抗BSA特异性抗体含量。结果:与正常睡眠小鼠相比:全日组脾重没有显著变化,其余各组脾重明显减轻(P<0.05);24 h转轮组CD4+T细胞数明显降低(P<0.05),其他各组没有明显变化(P>0.05);所有实验组CD8+T细胞数均明显降低,CD4/CD8比例显著增大(P<0.01);所有实验组IL-2下降(P<0.01);除全日组IL-10含量升高以外(P>0.05),其他实验组IL-10含量均呈下降趋势(P<0.05);转轮组小鼠抗BSA抗体效价含量显著降低(P<0.01),全日光组与全夜组无统计学意义。结论:完全与不完全睡眠剥夺可不同程度地引起实验小鼠CD8+T细胞数减少、脾重减轻、特异性抗体分泌减少以及细胞因子分泌格局的变化,进而影响机体免疫功能。 展开更多
关键词 睡眠剥夺 T淋巴细胞亚群 特异性抗体 细胞因子IL-2与IL-10
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异育银鲫实验性免疫抑制模型的建立 被引量：10
9
作者 陈勇 周洪琪 +3 位作者 余奇文 张继英 沈佰华 柏峻 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期227-231,共5页
分别以每kg体重鱼注射0、1、10、20 mg环磷酰胺的剂量、每隔5 d给异育银鲫注射1次,共注射3次,第16天检测各组试验鱼外周血白细胞数量及吞噬活性、不同类型的白细胞数量变化、脾脏和头肾的溶菌酶活性、体外培养外周血B淋巴细胞分泌的IgM... 分别以每kg体重鱼注射0、1、10、20 mg环磷酰胺的剂量、每隔5 d给异育银鲫注射1次,共注射3次,第16天检测各组试验鱼外周血白细胞数量及吞噬活性、不同类型的白细胞数量变化、脾脏和头肾的溶菌酶活性、体外培养外周血B淋巴细胞分泌的IgM、IFN-α含量、外周血NK细胞杀伤功能及头肾、脾脏、外周血B淋巴细胞转化能力。结果表明,环磷酰胺剂量的增加可以使试验鱼外周血白细胞的数量包括各种类型的白细胞的数量、体外培养外周血B淋巴细胞分泌的IgM、IFN-α含量下降,脾脏和头肾的溶菌酶活性、外周血白细胞吞噬活性及头肾、脾脏、外周血B淋巴细胞转化能力降低。提出每kg鱼10mg的环磷酰胺是建立异育银鲫实验性免疫抑制模型的适宜剂量。 展开更多
关键词 异育银鲫 免疫抑制模型 环磷酰胺
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环磷酰胺和嗜水气单胞菌对暗纹东方免疫抑制的研究 被引量：11
10
作者 华雪铭 周洪琪 +3 位作者 余奇文 沈佰华 张继英 柏峻 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期494-498,共5页
对暗纹东方分别注射 8、 0 8、 0 0 8mg/kg·bw的环磷酰胺 ,5d一次 ,连续 3次 ,并与一次性注射嗜水气单胞菌 (1× 1 0 5CFU/kg·bw )相比较 ,研究其对暗纹东方免疫功能的影响。结果显示 ,注射适当浓度的环磷酰胺和... 对暗纹东方分别注射 8、 0 8、 0 0 8mg/kg·bw的环磷酰胺 ,5d一次 ,连续 3次 ,并与一次性注射嗜水气单胞菌 (1× 1 0 5CFU/kg·bw )相比较 ,研究其对暗纹东方免疫功能的影响。结果显示 ,注射适当浓度的环磷酰胺和嗜水气单胞菌可明显减弱暗纹东方肝胰脏溶菌酶活性、脾脏NK细胞杀伤率、脾脏B淋巴细胞转化能力 ,显著降低白细胞吞噬指数和血清干扰素 (IFN α )含量 (P <0 0 5 )。选择 8mg/kg·bw环磷酰胺和 1× 1 0 5CFU/kg·bw的嗜水气单胞菌作为注射浓度可以抑制暗纹东方的免疫功能。相比之下 ,在试验范围内 ,环磷酰胺对暗纹东方免疫能力的抑制程度更大 ,范围更广 ,稳定性更好。 展开更多
关键词 暗纹东方鲍 免疫抑制 环磷酰胺 嗜水气单胞菌
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IL-12以及IL-12P40对子宫内异症患者NK细胞功能的免疫调节 被引量：6
11
作者 马安伦 张冬青 +7 位作者 余奇文 聂红 张继英 柏峻 陈鸣 刘建华 徐红 林其德 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期494-496,502,共4页
目的 :通过观察正常人及子宫内膜异位症 (EM)患者外周血及腹腔液中IL 1 2、IL 1 2P40含量变化 ,分析其分子诱导NK细胞对子宫内膜细胞的细胞毒效应的影响 ,探讨IL 1 2、IL 1 2P40分子与EM患者NK细胞功能低下的相关性。方法 :ELISA酶联免... 目的 :通过观察正常人及子宫内膜异位症 (EM)患者外周血及腹腔液中IL 1 2、IL 1 2P40含量变化 ,分析其分子诱导NK细胞对子宫内膜细胞的细胞毒效应的影响 ,探讨IL 1 2、IL 1 2P40分子与EM患者NK细胞功能低下的相关性。方法 :ELISA酶联免疫检测IL 1 2、IL 1 2P40含量以及MTT释放法检测NK细胞毒活性。结果 :①EM患者腹腔上清液可使正常人外周血NK细胞杀伤活性 ( 1 6 80 %± 3 6 % )明显下降 ( 8 37%± 4 5% ) (P <0 0 5)。②EM患者IL 1 2含量血清为 6 6 38± 1 2 6pg ml,低于对照组 84 97± 1 3 7pg ml( P <0 0 5) ;腹腔液中为 77 76± 1 4 6pg ml ,低于对照组 1 0 6 92± 1 0 7pg ml( P <0 0 5)。③EM患者IL 1 2P40含量血清为 35 6 4± 1 0 6pg ml,与对照组无明显差异 ;腹腔液含量为 79 76± 1 2 6pg ml ,高于对照组 40 54±1 0 0pg ml(P <0 0 5) ,并与疾病的程度呈负相关。④IL 1 2能增强NK细胞对子宫内膜细胞的杀伤 ,并呈剂量依赖。在 1 0ng ml浓度诱导后杀伤率为 31 90 % ,高于对照组的 1 6 80 %。⑤IL 1 2P40能拮抗IL 1 2对NK细胞活性的诱导 ,当加入IL 1 2P40后 ,使IL 1 2诱导的活性 ( 2 9 3% )下降为 1 9 36 %。结论 :子宫内膜异位症患者腹腔液中IL 1 展开更多
关键词 IL-12 IL-12P40 NK细胞 子宫内膜异位症 免疫调节
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艾灸调节肿瘤免疫抑制效应的实验研究 被引量：17
12
作者 裴建 于颖梅 +5 位作者 魏海 方肇勤 管冬元 余奇文 张冬青 陈汉平 《上海中医药杂志》 北大核心 2007年第8期1-4,共4页
目的观察艾灸调节肿瘤免疫抑制效应与IL-2受体-Jak-Stat信号转导通路的关系,探讨艾灸调节免疫抑制效应的作用机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、正常艾灸组、荷瘤对照组、艾灸治疗组和艾灸非经穴组等5组,每组各10只。观察... 目的观察艾灸调节肿瘤免疫抑制效应与IL-2受体-Jak-Stat信号转导通路的关系,探讨艾灸调节免疫抑制效应的作用机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、正常艾灸组、荷瘤对照组、艾灸治疗组和艾灸非经穴组等5组,每组各10只。观察艾灸大椎(2mg/壮,2壮/次,共6次)对H22移植性实体瘤诱导免疫抑制效应的影响。采用125I-IL-2放射配基方法观察脾淋巴细胞高亲和IL-2受体数量及亲和力,RT-PCR方法观察脾细胞IL-2受体各亚基及信号分子Jak1、Jak3、Stat5a、Stat5b mRNA表达水平。结果荷瘤对照组脾淋巴细胞中亲和力IL-2R数量明显低于正常对照组;艾灸治疗组中亲和力IL-2R数量较荷瘤对照组明显增加,荷瘤对照组脾淋巴细胞IL-2Rα、IL-2Rβ、Jak1、Stat5a、Stat5b mRNA表达水平与正常对照组比较明显降低;艾灸治疗组IL-2Rα、IL-2Rβ、Jak1、Stat5a、Stat5b mRNA表达水平明显高于荷瘤对照组。各组IL-2Rγ mRNA、Jak3 mRNA表达水平未见显著差异。结论针灸正向调节肿瘤机体非特异性免疫功能低下或受抑状态,与上调淋巴细胞IL-2受体数目及其IL-2Rα、IL-2Rβ和相关信号分子Jak1、Stat5a、Stat5b表达水平有关;但研究结果并未显示出针灸调节肿瘤诱导的免疫抑制效应与Jak3和IL-2Rγ链相关。 展开更多
关键词 肿瘤 针灸效应 免疫调节 IL-2受体 Jak-Stat信号传导
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类风湿性关节炎患者关节滑膜液浸润的T细胞表达特性 被引量：6
13
作者 张冬青 李宁丽 +6 位作者 王利 余奇文 沈佰华 臧敬五 冯国璋 许荣 倪立清 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期275-277,共3页
目的 :为研究类风湿性关节炎 (RA)患者关节滑膜液浸润的淋巴细胞介导自身免疫病的特性 ,分析了 2 2例RA患者滑膜液中淋巴细胞的免疫表型、对II型胶原的反应频率及IL 10、IL 12的分泌格局。方法 :用流式细胞术分别测定滑膜液和外周血淋... 目的 :为研究类风湿性关节炎 (RA)患者关节滑膜液浸润的淋巴细胞介导自身免疫病的特性 ,分析了 2 2例RA患者滑膜液中淋巴细胞的免疫表型、对II型胶原的反应频率及IL 10、IL 12的分泌格局。方法 :用流式细胞术分别测定滑膜液和外周血淋巴细胞表型 ,并采用国际标准半有限稀释法分析了关节滑膜液中浸润的淋巴细胞对II型胶原 (CII)的反应频率 ,同时用ELISA方法检测了滑膜液与外周血中IL 10与IL 12含量。结果 :滑膜液中的T淋巴细胞的表型分别为CD4 (39 6 %±10 5 % )和CD8细胞 (36 4 %± 16 4 % ) ,CD4 CD8细胞比值显著低于外周血 ,且同时表达CD16和CD5 6的活化NK细胞占15 5 %± 11 1%。T细胞受体谱取用表明仍以αβTCR为主 (6 9 6 %± 15 7% )。有意义的是 :滑膜液中的T细胞对CII的反应频率为 15 2× 10 - 6 ,远远高于外周血 (4 0× 10 - 6 )。IL 12含量为 (4 19 9± 89 2 )pg ml,IL 10含量为 (187 7± 34 5 )pg ml,与外周血中这 2种细胞因子的含量〔分别为IL 12 :(6 5 32± 34 2 )pg ml和IL 10 :(85± 12 7)pg ml〕比较 ,具有显著的统计学差异。结论 :上述实验结果表明这种具有表达特性的浸润T细胞介导了RA患者关节滑膜组织的免疫损伤。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 关节滑膜液 浸润 T细胞
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重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨 被引量：8
14
作者 李宁丽 路丽明 +4 位作者 沈佰华 刘莉莉 王利 余奇文 张冬青 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第1期10-14,共5页
目的探讨重组人可溶性TRAIL蛋白(rhsTRAIL)诱导细胞凋亡的机理。 方法应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡;流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局,荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。 结果100ng/m... 目的探讨重组人可溶性TRAIL蛋白(rhsTRAIL)诱导细胞凋亡的机理。 方法应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡;流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局,荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。 结果100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性,但可诱导肿瘤细胞凋亡,不同的肿瘤细胞凋亡率有差异,凋亡范围在26％-57％。不同细胞表面TRAIL受体表达量不同,外周血淋巴细胞的死亡受体DR4、DR5受体表达5％,而诱骗受体DcRl表达55％,相反肿瘤细胞上的DR4、DR5表达高(40％-88％),而DcRI表达很低(8％-17％)。rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡,其细胞内Caspase-3活性增高。ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性。 结论重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关。 展开更多
关键词 人可溶性TRAIL蛋白 细胞凋亡 CASPASE-3 诱骗受体 死亡受体
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γδ T细胞诱导与分化的初步研究-Ⅰ 被引量：4
15
作者 胡朝英 钱柳 +6 位作者 程伟志 黄秋愉 汪萍 余奇文 张继英 陈雪华 张冬青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期368-371,共4页
目的:探讨在异戊烯焦磷酸(IPP)作用下,健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞的增殖和亚型变化,以期获得足够的具有不同特征的γδT细胞用于后续的实验研究。方法:流式细胞术分析经IPP诱导的单个核细胞表面分子的表达状态,评估其γδT... 目的:探讨在异戊烯焦磷酸(IPP)作用下,健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞的增殖和亚型变化,以期获得足够的具有不同特征的γδT细胞用于后续的实验研究。方法:流式细胞术分析经IPP诱导的单个核细胞表面分子的表达状态,评估其γδT细胞的比例、亚型和表型格局。结果:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞数量虽占较低比例,但两者的γδT细胞存在显著异质性。健康人外周血γδT细胞主要以Vγ9Vδ2 TCR亚群为主;初始分选的外周血单个核细胞中Vγ9Vδ2T细胞主要为中央记忆型(CD27+CD45RA-)和效应记忆型(CD27-CD45RA-);IPP诱导后,γδT细胞显著扩增,Vγ9Vδ2 T细胞亚群转变为以效应记忆型为主,并高表达HLA-DR和B7分子。而新生儿脐带血来源的γδT细胞却呈现出较为复杂的亚群异质性,其Vγ9Vδ2 T细胞主要为CD27+CD45RA+的幼稚型细胞;经IPP诱导14天后,γδT细胞获得扩增(比例增高)且Vγ9Vδ2 T细胞趋向中央记忆型和效应记忆型分化,但仍以幼稚型为主。结论:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞在数量、亚群诸方面存在差异;IPP具有诱导和扩增外周血γδT细胞的生物学作用,而脐带血来源的γδT细胞还需相关细胞因子的协同作用,才能呈现出其分化成熟为可用于理论研究和临床实验的效应记忆型γδT细胞的潜能。关于其具有的免疫调节和效应功能将另文报道。 展开更多
关键词 γδ T细胞 新生儿脐带血 细胞表型 异戊烯焦磷酸
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抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体对IL-6信号分子调控浅析 被引量：4
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作者 周晓薇 苗平 +9 位作者 陈呢喃 赵蓉 钱柳 余奇文 张继英 许荣 何东仪 肖连波 陆梅生 张冬青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期639-643,共5页
目的:分析鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体[anti-IL-6Rβ(gp130)mAb]的生物学特性及对IL-6信号分子的调节作用。方法:利用Western blot、竞争性ELISA实验、功能表位结合实验,检测anti-IL-6Rβ(gp130)mAb的亲和力、效价及与gp130抗原表... 目的:分析鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体[anti-IL-6Rβ(gp130)mAb]的生物学特性及对IL-6信号分子的调节作用。方法:利用Western blot、竞争性ELISA实验、功能表位结合实验,检测anti-IL-6Rβ(gp130)mAb的亲和力、效价及与gp130抗原表位结合特异性。进而探讨anti-IL-6Rβ(gp130)mAb对U266细胞、RA患者外周血单个核细胞(PBMC)及滑膜液单个核细胞(SFMC)增殖和分化中的IL-6信号分子的调控机制。结果:Anti-IL-6Rβ(gp130)mAb对gp130具有高亲和性(如10A1细胞株的亲和力常数可达为2.62E-10),所获得的多株单抗还具有针对不同抗原结合表位的特性,可用于分析和研究IL-6信号通路及下游STAT3的磷酸化。结论:获得针对不同抗原结合表位的anti-IL-6Rβ(gp130)mAb,初步的实验结果表明此类单抗不仅具有调控IL-6信号分子和下游STAT3磷酸化的生物学功能,并为解析临床RA的发病与IL-6信号分子的关联性提供了初步的实验结果。 展开更多
关键词 IL-6 GP130 抗gp130单克隆抗体 STAT3 RA
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酵母菌表达倍菲隆发酵工艺研究 被引量：4
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作者 李宁丽 马安伦 +8 位作者 余奇文 沈佰华 张继英 聂红 柏峻 沈天伟 席波 李广善 张冬青 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第1期57-61,共5页
目的 :为了探索用酵母菌表达乙型干扰素 (倍菲隆 )的大批生产的发酵工艺流程及优化的重要参数。选用 1 5L不锈钢发酵罐作为乙型干扰素发酵工艺研究系统。方法 :探索了种细胞密度对初始发酵期 (甘油利用期 )的影响 ,启动甘油补充期的溶... 目的 :为了探索用酵母菌表达乙型干扰素 (倍菲隆 )的大批生产的发酵工艺流程及优化的重要参数。选用 1 5L不锈钢发酵罐作为乙型干扰素发酵工艺研究系统。方法 :探索了种细胞密度对初始发酵期 (甘油利用期 )的影响 ,启动甘油补充期的溶解氧浓度 ,诱导目的蛋白表达时添加甲醇的速率条件控制 ,pH对酵母菌生长与蛋白表达的影响以及发酵时间对乙型干扰素表达量影响等重要发酵工艺参数。结果 :接种高密度的种菌 (OD60 0为 9)时酵母菌增殖快 ,湿细胞重量于1 8h即达到 1 5 7g L。当DO恢复至 67%时即开始补充甘油可使酵母菌在 5h内增殖达到 2 1 9g L。添加甲醇速率从 2 %(甲醇终浓度为 0 0 3%)开始 ,逐步增加 ,在 2 4h内达到 33%的添加速率 (甲醇终浓度为 0 5 %)。甲醇诱导前pH为 6时最有利于酵母菌生长 ,在蛋白表达时期 ,控制发酵罐内pH值在 3 0 ,可得最高蛋白表达量。发酵 70h乙型干扰素表达量达到高峰。结论 :接种高密度种菌可促进工程菌生长 ,当DO恢复至 67%时开始补充甘油可加快酵母菌生长 ,在诱导期中缓慢添加甲醇并维持发酵罐pH为 3 0 ,发酵 70h可获得最佳蛋白生产量。 展开更多
关键词 乙型干扰素 倍菲隆 发酵工艺 酵母菌 表达
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抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析 被引量：2
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作者 苗平 钱柳 +5 位作者 赵蓉 余奇文 张继英 陈雪华 陆梅生 张冬青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1119-1122,1128,共5页
目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp... 目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。 展开更多
关键词 IL-6 GP130 单克隆抗体 特异性 亲和力
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子宫内膜异位症患者γδ^+T细胞及NK细胞的功能分析 被引量：2
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作者 马安伦 葛海良 +4 位作者 王树军 张冬青 余奇文 徐红 林其德 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期540-541,共2页
目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响。方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液... 目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响。方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ+T细胞及NK细胞的表型与功能。结果子宫内膜异位症(疾病组)患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞的百分率高于其外周血和正常对照组。疾病组腹腔液中的γδ+T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ+T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用。结论子宫内膜异位症患者的γδ+T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能存在γδ+T细胞及NK细胞的功能抑制因子。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 γδ+T细胞 自然杀伤细胞 免疫功能
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可溶性TRAIL重组蛋白治疗CIA实验研究 被引量：2
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作者 刘莉莉 李宁丽 +6 位作者 张继英 余奇文 王利 沈佰华 聂红 柏俊 张冬青 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期129-132,共4页
用sTRAIL重组蛋白治疗CIA模型 ,探讨sTRAIL用于自身免疫病治疗的可能性。将鸡肋骨II型胶原蛋白注射大鼠 ,建立了RA的动物模型———胶原诱导性关节炎 ,自制的可溶性TRAIL蛋白治疗CIA ,观察治疗后关节炎指数与血清中炎性细胞因子的变化... 用sTRAIL重组蛋白治疗CIA模型 ,探讨sTRAIL用于自身免疫病治疗的可能性。将鸡肋骨II型胶原蛋白注射大鼠 ,建立了RA的动物模型———胶原诱导性关节炎 ,自制的可溶性TRAIL蛋白治疗CIA ,观察治疗后关节炎指数与血清中炎性细胞因子的变化。结果是sTRAIL 30 0ng/只 (0 1ml/次 )局部应用于关节炎部位 ,皮下注射 1周以后 ,sTRAIL应用的大鼠症状较对照组指数评分稍有下降 ;患病大鼠较正常大鼠IFN γ和TNF α表达量增加 ,而经过sTRAIL治疗后两者表达量都有显著下降 (P <0 0 5 )。提示sTRAIL局部应用后可缓解关节炎的局部炎症 ,可能是通过抑制激活的淋巴细胞 。 展开更多
关键词 STRAIL 炎症 细胞因子 胶原诱导性关节炎 动物模型 自身免疫病
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