抗 A、B 和 C 群脑膜炎球菌多糖单克隆抗体的制备及鉴定

1

作者 余模松 陈克金 +1 位作者 童飞虹 范富林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1990年第4期164-168,共5页

10株抗 A、B 和 C 群脑膜炎球菌多糖 McAb,经 PHA、PHAI、ELISA 和试管凝集试验测出较高的群特异性抗体滴度。经中国药品生物制品检定所选用12个群脑膜炎球菌国家标准菌株和地方菌株以及其它奈瑟氏菌株进行玻片凝集和试管凝集检定。结... 10株抗 A、B 和 C 群脑膜炎球菌多糖 McAb,经 PHA、PHAI、ELISA 和试管凝集试验测出较高的群特异性抗体滴度。经中国药品生物制品检定所选用12个群脑膜炎球菌国家标准菌株和地方菌株以及其它奈瑟氏菌株进行玻片凝集和试管凝集检定。结果显示 McAb 滴度高、特异性强,用于分群诊断取得满意的结果。10株 McAb 均属小鼠 IgM 类。 展开更多

关键词 单克隆抗体 脑膜炎球菌多糖抗原 杂交瘤

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人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的表达和鉴定 被引量：4

2

作者 闭兰 张爱华 +4 位作者 孙可芳 胡巧玲 祝玉桃 王志友 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期445-447,共3页

目的对人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体A12进行可溶性表达及特异性和中和活性检测。方法表达人源单链抗体A12的菌株,经诱导后进行SDS-PAGE及Western blot检测,用流式细胞仪(FACS)检测表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染Vero细胞的能力,... 目的对人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体A12进行可溶性表达及特异性和中和活性检测。方法表达人源单链抗体A12的菌株,经诱导后进行SDS-PAGE及Western blot检测,用流式细胞仪(FACS)检测表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染Vero细胞的能力,用快速荧光灶抑制实验(RFFIT)检测表达产物的中和活性。结果Western blot显示表达产物与抗C-myc抗体在相对分子质量约30 000处出现强阳性表达带。FACS表明A12与表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染的Vero细胞出现特异性反应。RFFIT表明,A12 ScFv在1∶27倍稀释时能完全中和病毒。结论已获得了A12可溶性表达,表达产物能与狂犬病毒G蛋白特异性结合,并对狂犬病毒具有一定的中和活性。 展开更多

关键词 人源抗狂犬病毒G蛋白 单链抗体 基因表达 鉴定方法 可溶性表达

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从半合成噬菌体抗体库筛选抗狂犬病毒人单链抗体 被引量：4

3

作者 闭兰 张爱华 +3 位作者 彭祥兵 王志友 张智 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期65-67,共3页

目的　应用纯化的狂犬病毒抗原从半合成噬菌体抗体库中筛选针对狂犬病毒的人单链抗体(ScFv)。方法　用固相化的狂犬病毒抗原对半合成抗体库进行 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,从第 3轮洗脱下来的克隆中获得一株有可溶性表达且特异性... 目的　应用纯化的狂犬病毒抗原从半合成噬菌体抗体库中筛选针对狂犬病毒的人单链抗体(ScFv)。方法　用固相化的狂犬病毒抗原对半合成抗体库进行 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,从第 3轮洗脱下来的克隆中获得一株有可溶性表达且特异性结合狂犬病毒抗原的ScFv ,并进行基因序列测定。结果　所获氨基酸序列经blast数据库搜索 ,与一种抗狂犬病毒免疫球蛋白的氨基酸序列同源性最高 ( 82 % )。经检索kabat数据库 ,发现其轻、重链可变区分别属于VkⅠ型、VHⅢ型。结论　从噬菌体抗体库可以方便快捷地分离到针对狂犬病毒的单链抗体 。 展开更多

关键词 狂犬病毒 人单链抗体 噬菌体抗体库 预防 免疫球蛋白

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金黄色葡萄球菌肠毒素A基因克隆、表达、纯化与鉴定 被引量：5

4

作者 王丽婵 张庶民 +1 位作者 余模松 杨晓明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期120-123,共4页

目的构建含SEA基因的原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统中表达。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,插入到表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达及鉴定。结果PCR扩增约770bp的基因片段,克隆至载体后... 目的构建含SEA基因的原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统中表达。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,插入到表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达及鉴定。结果PCR扩增约770bp的基因片段,克隆至载体后,经测序与文献报道结果一致,表达蛋白相对分子质量约31000,纯化后鉴定为SEA蛋白。结论已成功获得SEA蛋白,为其进一步研究和应用奠定基础。 展开更多

关键词 超抗原 金黄葡萄球菌肠毒素 基因克隆 原核表达 金黄色葡萄球菌肠毒素A

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HIV-1型衣壳蛋白P24在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定 被引量：4

5

作者 陈伟 张为 +3 位作者 李茜 朱华松 闭兰 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期8-11,共4页

用聚合酶链式反应 (PCR)从 HIV - 1gag基因序列中扩增出衣壳蛋白 (P2 4)基因 ,插入表达载体p GEX- 4T3中 ,构成重组质粒 p GEX- p2 4,在大肠杆菌 BL 2 1中高效表达出重组 P2 4。经 Glutathione- Sepharose4B亲和层析纯化后 ,重组 P2 4... 用聚合酶链式反应 (PCR)从 HIV - 1gag基因序列中扩增出衣壳蛋白 (P2 4)基因 ,插入表达载体p GEX- 4T3中 ,构成重组质粒 p GEX- p2 4,在大肠杆菌 BL 2 1中高效表达出重组 P2 4。经 Glutathione- Sepharose4B亲和层析纯化后 ,重组 P2 4在间接 EL ISA和免疫印迹中表现出很高的抗原特异性和免疫反应性。 展开更多

关键词 HIV-1 P24 大肠杆菌 表达

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人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的生物学鉴定及其小鼠体内中和活性测定 被引量：3

6

作者 闭兰 朱蓉 +4 位作者 张爱华 孙可芳 赵亚杰 王志友 余模松 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期397-399,共3页

目的对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行生物学活性鉴定及小鼠体内中和活性检测。方法用免疫荧光法检测其结合感染狂犬病毒CVS的鼠脑组织的能力,用小鼠中和实验测定A12表达产物的体内中和活性。结果免疫荧光试验显... 目的对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行生物学活性鉴定及小鼠体内中和活性检测。方法用免疫荧光法检测其结合感染狂犬病毒CVS的鼠脑组织的能力,用小鼠中和实验测定A12表达产物的体内中和活性。结果免疫荧光试验显示A12表达产物与感染CVS的鼠脑细胞有强的荧光反应。小鼠中和试验结果表明,A12ScFv样品组小鼠有9只存活,而对照组小鼠全部死亡。A12在729倍稀释时能100%保护小鼠抵抗致死量狂犬病毒的脑内攻击。结论A12对狂犬病毒具有一定的中和活性,有可能被用于暴露后狂犬病的预防。 展开更多

关键词 单链抗体 狂犬病毒G蛋白 免疫荧光反应 小鼠体内中和实验

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采用基因拼接方法构建人源特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab噬菌体抗体库 被引量：2

7

作者 张爱华 闭兰 +6 位作者 端义坤 张智 赵亚杰 孙可芳 闫莹 王志友 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期257-260,共4页

目的　构建人源特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab噬菌体抗体库。方法　从抗乙型肝炎病毒表面抗体高滴度 (1:10 2 4 )的人全血中分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,经RT PCR分别扩增出轻链可变区和重链可变区 ,再以噬菌体质粒为模板分别扩增... 目的　构建人源特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab噬菌体抗体库。方法　从抗乙型肝炎病毒表面抗体高滴度 (1:10 2 4 )的人全血中分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,经RT PCR分别扩增出轻链可变区和重链可变区 ,再以噬菌体质粒为模板分别扩增出轻链恒定区 (Cκ)和重链恒定区 (CH1) ,将轻链可变区和轻链恒定区 (Cκ)及重链可变区和重链恒定区 (CH1)进行第 1次基因拼接 ,分别形成κ轻链和Fd重链 ,再以κ轻链和Fd重链作为模板进行第 2次基因拼接 ,形成完整的Fab基因 ,与pComb3H SS噬菌体质粒连接后 ,电穿孔转化大肠杆菌XL1 Blue。结果　通过多次电穿孔转化 ,获得总容量为 4× 10 5库容的噬菌体抗体库。 展开更多

关键词 基因拼接 乙型肝炎病毒 表面抗原 噬菌体抗体库

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人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定 被引量：1

8

作者 黄仕和 周志军 +5 位作者 彭祥兵 詹骞 张爱华 闭兰 余模松 梁米芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期873-876,共4页

目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板... 目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒表面抗原 IgG 基因工程抗体 杆状病毒 表达 纯化

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CD25抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析 被引量：1

9

作者 左建民 王志友 +5 位作者 张囡 张爱华 闭兰 陈明洁 陈敬 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2001年第3期129-131,共3页

目的 获得抗人ＣＤ２５分子单抗的轻链及重链可变区基因，并进行序列分析。方法 采用ＲＴ－ ＰＣＲ，从ＷｕＴａｃ细胞总ＲＮＡ中扩增出轻链、重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析。结果　构建的ＰＭＤ１８ －Ｔ－ＶＬ和ＰＭＤ... 目的 获得抗人ＣＤ２５分子单抗的轻链及重链可变区基因，并进行序列分析。方法 采用ＲＴ－ ＰＣＲ，从ＷｕＴａｃ细胞总ＲＮＡ中扩增出轻链、重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析。结果　构建的ＰＭＤ１８ －Ｔ－ＶＬ和ＰＭＤ１８－Ｔ－ＶＨ重组克隆载体，酶切与预期结果相符。ＶＨ和ＶＬ基因序列与鼠抗体的同源性大于 ８０％。克隆的重链可变区基因长度为３５１ｂｐ，属于鼠重链Ⅲ（Ｃ）亚类。轻链可变区基因长度为３２４ｂｐ，属于鼠轻链 Ⅳ 亚类。结论 本研究采用ＲＴ－ＰＣＴ法扩增出轻链及重链可变区基因，并进行了序列测定和分析，为进一步构建嵌 合抗体以及单链抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 CD25 鼠抗体可变区基因 克隆 序列分析 聚合酶链反应

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HIV跨膜蛋白gp36和gp41的截短及融合表达 被引量：1

10

作者 肖健 朱华松 +4 位作者 尹娟 孙可芳 汪超英 端义坤 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期124-126,138,共4页

目的将HIV-1的跨膜蛋白gp41和HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中进行融合表达。方法用PCR将gp41和gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用BamHⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ切下目的基因,并构建到表达载... 目的将HIV-1的跨膜蛋白gp41和HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中进行融合表达。方法用PCR将gp41和gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用BamHⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T-3,导入宿主细胞BL21,用IPTG诱导表达。结果酶切鉴定显示,截短的HIV-1gp41和HIV-2gp36跨膜蛋白基因大小与预期的一致,表达产物经SDS-PAGE分析显示在相对分子质量66000处出现融合表达条带,Westernblot分析显示,与相应抗体出现特异性反应。结论已成功对gp41和gp36跨膜蛋白进行截短,并构建表达载体进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用研究奠定基础。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒 跨膜蛋白 截短 融合表达

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抗乙型肝炎病毒表面抗原的IgG全抗体表达载体的构建 被引量：1

11

作者 黄仕和 彭祥兵 +5 位作者 张爱华 闭兰 余键 周志军 余模松 梁米芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期170-173,共4页

目的构建抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体杆状病毒表达载体。方法用PCR方法扩增抗HBsAg抗体Fab片段的轻链(L)及重链Fd段(VH+CH1)基因片段,将杆状病毒载体pAC-k-Fc与L基因连接,重组为过渡表达载体pAC-k-L-Fc,再与Fd基因连接,... 目的构建抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体杆状病毒表达载体。方法用PCR方法扩增抗HBsAg抗体Fab片段的轻链(L)及重链Fd段(VH+CH1)基因片段,将杆状病毒载体pAC-k-Fc与L基因连接,重组为过渡表达载体pAC-k-L-Fc,再与Fd基因连接,构建重组表达载体pAC-HBs-Fc,并进行酶切鉴定及DNA测序分析。确定正确后,转染昆虫细胞sf9,用免疫荧光检测IgG的表达。结果PCR扩增的片段约650bp,与预期值一致。载体pAC-k-L-Fc和pAC-HBs-Fc的酶切片段和DNA序列与预期结果一致。转染sf9细胞呈阳性荧光反应,未转染细胞呈阴性荧光反应。结论已成功构建表达载体pAC-HBs-Fc,为表达抗人HBsAg的IgG全抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒表面抗原 基因工程抗体 杆状病毒

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HIV-2跨膜蛋白gp36的截短及表达 被引量：1

12

作者 张涛 彭祥兵 +1 位作者 端义坤 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期140-142,共3页

目的 将HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中表达。方法 用PCR将gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用 BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE3),用... 目的 将HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中表达。方法 用PCR将gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用 BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达。结果 成功地对gp36进行了截短,并且构建到表达载体上进行表达。结论 截短的HIV-Ⅱ跨膜蛋白gp36能直接在大肠杆菌内进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用打下基础。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒2型 跨膜蛋白 截短 基因表达

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淋病奈瑟菌外膜蛋白Ⅰ的分离提纯及鉴定 被引量：2

13

作者 陈伟 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1994年第3期109-112,共4页

在CaCl2存在下，以CTB提取淋球菌的OMP，再以Z3，14萃取PI，然后经DEAESepharoseCl－6B层析柱提纯，获得纯PI10．97毫克。SDS－PAGE显示纯PI为单一蛋白区带，分子量为35KD，经可见光扫描，其纯度达96.21％。用ELISA间接法检测证明，纯P... 在CaCl2存在下，以CTB提取淋球菌的OMP，再以Z3，14萃取PI，然后经DEAESepharoseCl－6B层析柱提纯，获得纯PI10．97毫克。SDS－PAGE显示纯PI为单一蛋白区带，分子量为35KD，经可见光扫描，其纯度达96.21％。用ELISA间接法检测证明，纯PI保持完好的抗原活性。亚类特异性鉴定证实为WI群PIA。 展开更多

关键词 淋病奈瑟氏菌 蛋白Ⅰ 提纯 鉴定

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鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析 被引量：1

14

作者 王志友 沈弢 +5 位作者 张爱华 闭兰 金玉铃 孙可芳 余模松 史良如 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期409-411,共3页

目的 获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法 用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因．分别克隆人pMD18－T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获... 目的 获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法 用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因．分别克隆人pMD18－T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获得长约350bp的片段,用轻链引物扩增获得长约330bp的片段,序列测定获得它们的DNA序列。结论克隆的重链可变区基因长度为348bp,属于小鼠H链可变区IA亚组;克隆的轻链可变区基因长度为336bp,属于小鼠K轻链可变区Ⅱ亚组。 展开更多

关键词 CD71 抗体 可变区基因 单克隆抗体 序列分析 动物实验

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抗牛血清IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定 被引量：2

15

作者 王平 周志军 +2 位作者 施金荣 朱华松 余模松 《微生物学免疫学进展》 2011年第3期18-23,共6页

用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用含山羊血清的培养基培养细胞,上清用间接ELISA法筛选。获得4株能稳定分泌抗牛血清IgG的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为1G5、2A8、3F5、4C5。其中2A8为IgG2a,... 用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用含山羊血清的培养基培养细胞,上清用间接ELISA法筛选。获得4株能稳定分泌抗牛血清IgG的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为1G5、2A8、3F5、4C5。其中2A8为IgG2a,其余3株为IgG1;腹水单抗的ELISA滴度均超过10-5;除3F5株单抗与山羊血清有交叉反应外,1G5、2A8、4C5株与人、马、猪、羊、兔、豚鼠等血清均不发生交叉反应;4株单抗与制备病毒性疫苗的基质液呈阴性反应;4株单抗识别分子量为160kD的牛血清IgG的两个不同抗原表位;4株单抗相对亲和力大小依次为4C5>2A8>1G5>3F5,相对敏感度依次为2A8>4C5>3F5>1G5;4株杂交瘤细胞株的染色体计数均大于90条,连续培养三个月以及冷冻保存半年后复苏,细胞生长良好。使用这些单抗建立的双抗体夹心法检测生物制品中的残留牛血清IgG。 展开更多

关键词 牛血清IgG 筛选 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验

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测定杆状病毒滴度方法的研究进展 被引量：11

16

作者 黄仕和 余模松 《微生物学免疫学进展》 2007年第2期79-83,共5页

杆状病毒表达载体系统为一种真核表达系统,在生物制药方面具有多种优势。测定杆状病毒滴度对病毒的扩增和重组蛋白的表达是非常必要的。本文系统地综述了蚀斑检测、测定β-半乳糖苷酶活性、终点稀释法、定量定时PCR、免疫染色检测法、... 杆状病毒表达载体系统为一种真核表达系统,在生物制药方面具有多种优势。测定杆状病毒滴度对病毒的扩增和重组蛋白的表达是非常必要的。本文系统地综述了蚀斑检测、测定β-半乳糖苷酶活性、终点稀释法、定量定时PCR、免疫染色检测法、使用微流控生物分析仪、测活细胞大小及用比色指示剂等8种方法测定杆状病毒滴度,各有其优缺点。 展开更多

关键词 杆状病毒 滴度

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HIV-1 P24截短体与gp41截短体的融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定 被引量：1

17

作者 陈伟 闭兰 +2 位作者 朱华松 李茜 余模松 《微生物学免疫学进展》 2001年第4期1-5,共5页

用基因重组技术将截短的HIV 1p2 4基因和gp41基因连接成嵌合基因 ,插入质粒 pGEX 4T3,构建成重组表达质粒pGEX F。将 pGEX F转化大肠杆菌BL2 1。经IPTG诱导表达 ,pGEX F在大肠杆菌BL2 1中获得了高效表达。融合蛋白P2 4 gp41经Glutathion... 用基因重组技术将截短的HIV 1p2 4基因和gp41基因连接成嵌合基因 ,插入质粒 pGEX 4T3,构建成重组表达质粒pGEX F。将 pGEX F转化大肠杆菌BL2 1。经IPTG诱导表达 ,pGEX F在大肠杆菌BL2 1中获得了高效表达。融合蛋白P2 4 gp41经Glutathione Sepharose4B亲和层析纯化后 ,用间接ELISA和免疫印迹检测HIV抗体阳性血清和正常人血清 ,P2 4 gp41只与HIV抗体阳性血清反应 ,证明获得的融合蛋白P2 4 gp41有很强的抗原特异性和免疫反应性 。 展开更多

关键词 HIV-1 P24 GP41 融合蛋白 大肠杆菌 表达 纯化 截短体 免疫诊断试剂

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HIV-1跨膜蛋白gp41的截短及表达 被引量：2

18

作者 端义坤 张涛 余模松 《微生物学免疫学进展》 2003年第4期33-36,共4页

将HIV 1跨膜蛋白gp4 1进行截短 ,在大肠杆菌中进行表达并纯化。PCR扩增 gp4 1的部分编码基因 ,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体 pGEM T上 ,然后用EcoRⅠ和Sa1Ⅰ切下目的基因 ,并构建到表达载体pGEX 4T3上 ,导入宿主细胞BL2 1(DE3) ,... 将HIV 1跨膜蛋白gp4 1进行截短 ,在大肠杆菌中进行表达并纯化。PCR扩增 gp4 1的部分编码基因 ,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体 pGEM T上 ,然后用EcoRⅠ和Sa1Ⅰ切下目的基因 ,并构建到表达载体pGEX 4T3上 ,导入宿主细胞BL2 1(DE3) ,用IPTG诱导表达 ,表达产物用亲和层析进行纯化并作相应鉴定。截短的HIV 1跨膜蛋白 gp4 1能直接在大肠杆菌内进行表达 ,利用亲和层析能方便地将目的蛋白进行纯化 。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒1型 HIV-1跨膜蛋白 截短 基因表达

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抗体工程研究进展 被引量：3

19

作者 闭兰 余模松 《微生物学免疫学进展》 2006年第1期46-49,共4页

噬菌体抗体库技术的出现为抗体工程的研究带来了革命性的变化,本文总结了当前国内外抗体工程,特别是单链抗体方面的研究进展。

关键词 噬菌体抗体库 抗体工程 单链抗体

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噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析

20

作者 张爱华 端义坤 +5 位作者 闭兰 赵亚杰 张智 阎莹 王志友 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期1-4,共4页

目的　从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子 ,并进行基因序列分析。方法　采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原 ,对自建的 4× 10 5Fab噬菌体抗体库进行富集筛选 ,从阳性强的次级库中... 目的　从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子 ,并进行基因序列分析。方法　采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原 ,对自建的 4× 10 5Fab噬菌体抗体库进行富集筛选 ,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌 ,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后 ,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析。结果　共挑选了 6 0个单克隆菌株 ,其中噬菌体ELISA阳性有 2 7个 ,阳性率为 4 5 % ;PCR鉴定均为相应大小片段 ;限制性内切酶鉴定表明 2 7个阳性克隆菌中有 13个具有约 15 0 0bp的片段 ,其余均为约 75 0bp大小 ;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同 ;选取 5个含约 15 0 0bp片段和 2个含约75 0bp片段的克隆菌株 ,经测序均为人免疫球蛋白基因 ,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族 ,轻链分别属于L5、L6、L8和 0 12 /0 2家族。结论　从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子。表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性。 展开更多

关键词 FAB抗体 抗乙型肝炎病毒 表面抗原 阳性克隆 噬菌体展示 克隆 ELISA 限制性内切酶 包被 片段

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