龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因缺失株构建及部分生物学特性分析

1

作者 茶金龙 曹国春 +7 位作者 彭洁 杨维林 保志鹏 胡媛媛 吕念词 富国文 张自芳 叶妍琳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期66-72,共7页

为了探讨龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因对E.coli部分生物学特性的影响,试验以腹泻龙陵黄山羊肛门拭子为病料进行细菌分离鉴定;从分离菌中挑选对卡那霉素和大观霉素均敏感的原菌株E.coli D1,运用CRISPR/Cas9技术构建缺失株E.coliΔClpV... 为了探讨龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因对E.coli部分生物学特性的影响,试验以腹泻龙陵黄山羊肛门拭子为病料进行细菌分离鉴定;从分离菌中挑选对卡那霉素和大观霉素均敏感的原菌株E.coli D1,运用CRISPR/Cas9技术构建缺失株E.coliΔClpV1-D1;连续传15代后运用PCR方法检测缺失株E.coliΔClpV1-D1遗传稳定性;挑取原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1单克隆接种于LB液体培养基中培养,在24 h内每隔1 h测定其生长速度;30℃培养72 h后采用结晶紫染色法测定原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1生物被膜形成能力;采用MTT法测定原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1在第3,6,9,12小时时的细胞存活率;分别取1.0×10^(5)cfu/mL、1.0×10^(8)cfu/mL浓度的原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1对昆明小鼠进行腹腔注射,24 h后记录各组小鼠死亡数量,进行致病性分析。结果表明:从16份肛门拭子病料中分离得到12株E.coli;运用CRISPR/Cas9技术成功构建出缺失株E.coliΔClpV1-D1;缺失株E.coliΔClpV1-D1连续传15代后仍能稳定遗传;原菌株E.coli D1和缺失株E.coliΔClpV1-D1在24 h内生长速度无显著差异(P>0.05);缺失株E.coliΔClpV1-D1的生物被膜形成能力显著低于原菌株E.coli D1(P<0.05);在测定的4个时间段缺失株E.coliΔClpV1-D1对IPEC-J2细胞毒性减弱,两种浓度的缺失株对小鼠的致死率均显著低于原菌株(P<0.05)。说明缺失ClpV1基因对E.coli生长速度无明显影响,但会降低其生物被膜形成的能力和致病性。 展开更多

关键词 龙陵黄山羊 大肠杆菌 CRISPR/Cas9 ClpV1 致病性

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巨菌草加工处理及其在畜禽养殖中的应用研究进展

2

作者 刘兴能 马燕茹 +4 位作者 保志鹏 李石友 席冬梅 邓卫东 曹国春 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第10期22-26,共5页

近年来,畜禽养殖业的快速发展使得“人畜争粮”矛盾加剧,因此,从事畜禽养殖的人员必须树立“大食物观”,全方位、多途径发掘饲草资源。巨菌草因产量高、生长快、营养丰富、适口性好已经成为畜禽饲草资源研究的热点。文章综述了巨菌草的... 近年来,畜禽养殖业的快速发展使得“人畜争粮”矛盾加剧,因此,从事畜禽养殖的人员必须树立“大食物观”,全方位、多途径发掘饲草资源。巨菌草因产量高、生长快、营养丰富、适口性好已经成为畜禽饲草资源研究的热点。文章综述了巨菌草的生物学特性、不同加工处理方式对巨菌草营养价值的影响及巨菌草在畜禽养殖中的应用,旨在为巨菌草在畜禽养殖业中的推广应用提供理论基础。 展开更多

关键词 巨菌草 青贮 生物发酵 畜禽养殖 饲草资源 粗蛋白

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猫疱疹病毒1型的检测及一株分离毒株的致病性

3

作者 邓梏男 张家祺 +8 位作者 保志鹏 陈涛云 喻琦胜 丁露 朱晨曦 王怡 任玉鹏 贺超 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2253-2258,共6页

旨在调查成都地区的猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1, FHV-1)的流行及遗传变异情况。试验选取2020—2023年从成都地区采集的178份具有呼吸道症状猫的眼、鼻及口咽拭子进行FHV-1核酸检测、gE基因遗传进化分析、FHV-1的分离鉴定和致... 旨在调查成都地区的猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1, FHV-1)的流行及遗传变异情况。试验选取2020—2023年从成都地区采集的178份具有呼吸道症状猫的眼、鼻及口咽拭子进行FHV-1核酸检测、gE基因遗传进化分析、FHV-1的分离鉴定和致病性研究。结果发现,成都地区FHV-1阳性率为11.8%(21/178);其中宠物医院FHV-1阳性率为6.4%(7/110),猫舍FHV-1阳性率为20.6%(14/68),表明在猫舍中FHV-1感染率更高。FHV-1 gE基因的遗传进化分析结果表明,本研究扩增出的5株gE基因和疫苗株的核苷酸同源性在99.1%~100%,并发现PX-9株存在3个独特的氨基酸突变位点(L259Q、C294I、W295F)。通过CRFK细胞对5份阳性样本进行病毒的分离培养,结果PX-9毒株被成功分离鉴定。对PX-9毒株进行动物回归试验,结果表明攻毒组猫只表现出眼鼻分泌物增多,打喷嚏等临床症状,在接毒后第4天病毒拷贝数最高,为9.05×10^(7) copies·μL^(-1),且排毒期较长;攻毒猫只FHV-1病毒载量检测结果显示,气管及肺组织病毒拷贝数分别为1.7×10^(7)和3.5×10^(4) copies·μg^(-1),其它组织核酸阴性。综上表明,在成都地区仍然存在FHV-1流行,并且流行毒株有较强的致病性。 展开更多

关键词 FHV-1 流行情况 遗传变异 动物回归试验

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藤茶黄酮及吐温80饲用于肉羊生产的研究进展

4

作者 刘兴能 吕念词 +8 位作者 程月 保志鹏 曹国春 和晓明 岳丹 陆颖 席冬梅 刘万红 邓卫东 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第9期89-93,共5页

自2020年7月1日中国饲料禁抗令全面实施以来,探寻抗生素类饲料添加剂的替代品成为畜牧业研究的热点。据此,该文全面收集了国内外关于莫能菌素、藤茶黄酮和吐温80在肉羊或家畜生产中的相关报道,初步整理分析其对家畜生产性能、血液生化... 自2020年7月1日中国饲料禁抗令全面实施以来,探寻抗生素类饲料添加剂的替代品成为畜牧业研究的热点。据此,该文全面收集了国内外关于莫能菌素、藤茶黄酮和吐温80在肉羊或家畜生产中的相关报道,初步整理分析其对家畜生产性能、血液生化指标、屠宰性能、相关代谢指标的影响,旨在为探索莫能菌素等抗生素类的替代品在肉羊生产中的应用提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 藤茶黄酮 莫能菌素 吐温80 肉羊

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牛科物种FEZF2基因分子特征、功能预测及进化分析

5

作者 保志鹏 涂兴调 +4 位作者 张自芳 谷丽娇 范新阳 钱林东 苗永旺 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期574-586,共13页

【目的】揭示牛科物种FEZF2基因的功能及其差异。【方法】从NCBI和Ensembl数据库下载牛科主要家畜FEZF2基因序列及用于比较的非牛科物种的同源序列,采用生物信息学和比较基因组学方法对牛科家畜FEZF2基因的结构、编码蛋白的理化特征、... 【目的】揭示牛科物种FEZF2基因的功能及其差异。【方法】从NCBI和Ensembl数据库下载牛科主要家畜FEZF2基因序列及用于比较的非牛科物种的同源序列,采用生物信息学和比较基因组学方法对牛科家畜FEZF2基因的结构、编码蛋白的理化特征、氨基酸组成、基序和保守结构域、高级结构、参与的生物学路径、分子功能及进化关系进行比较分析。【结果】牛科动物间FEZF2基因转录区的结构存在差异,表现为非翻译区和内含子的序列长度不一致,但它们的编码序列(coding sequence,CDS)结构模式一致,与非牛科动物的CDS结构具有共线性关系。牛科动物FEZF2蛋白都是在核内发挥生物学功能的亲水性蛋白,无信号肽序列及跨膜结构域,都含有1个COG5048保守的锌指结构域。预测显示:FEZF2蛋白参与的生物学过程主要与神经元发育调节有关,分子功能主要是与染色质结合、转录激活或抑制有关。牛科与非牛科哺乳动物的FEZF2序列都存在1个连续的甘氨酸序列重复区,水牛、牦牛、绵羊和山羊均为13G型,但普通牛和瘤牛存在12G和13G两个等位基因。各牛科物种FEZF2蛋白在氨基酸组成、序列一致性、理化特征、基序、结构域和高级结构上存在相似性,但在牛科的不同属间存在一定差异。系统发育分析显示:牛科同属动物的FEZF2蛋白遗传关系较近。【结论】本研究揭示牛科家畜间FEZF2基因CDS的结构模式高度一致;FEZF2作为核内功能蛋白可能参与了牛科物种的神经元发育和机体免疫等过程的基因表达调控。 展开更多

关键词 牛科物种 FEZF2基因 分子特征 基因功能 生物信息学与比较基因组学分析

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正交实验法优选秦皮提取液中除鞣质的工艺研究

6

作者 保志鹏 荀来武 +4 位作者 吉丽 钱林东 彭洁 王世雄 王金凤 《中国奶牛》 2018年第7期49-51,共3页

采用正交试验方法优选秦皮提取液中除去鞣质的工艺,碱性醇沉法、热处理冷藏法后采用明胶沉淀法优选纯化工艺。结果表明,明胶沉淀法的最终确定精制工艺为A2B1C3,即将醇沉后比例为1:1.5的药液,调p H值为8.0,搅拌速度为50r/min,加入5%明胶... 采用正交试验方法优选秦皮提取液中除去鞣质的工艺,碱性醇沉法、热处理冷藏法后采用明胶沉淀法优选纯化工艺。结果表明,明胶沉淀法的最终确定精制工艺为A2B1C3,即将醇沉后比例为1:1.5的药液,调p H值为8.0,搅拌速度为50r/min,加入5%明胶溶液至不再生成沉淀时为止,继续搅拌反应10min,放置4℃,冷藏24h,以除去鞣质。 展开更多

关键词 正交试验 秦皮乙素 除鞣质

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正交设计优选助溶剂等对复方秦皮提取液的稳定性研究

7

作者 保志鹏 吉丽 +2 位作者 王金凤 王世雄 鲜涛 《中兽医医药杂志》 2018年第4期39-42,共4页

在处方设计中,综合考虑各种增溶剂和助溶剂等添加剂对复方秦皮提取液的稳定性影响和标准,采用正交试验对其优化。取复方秦皮提取物10 g,加入0.6%吐温-80适当混匀,再加丙二醇10%,混合均匀,加入烟酰胺2 g,混合均匀的工艺最佳。

关键词 正交试验 复方秦皮提取液 质量评价

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2013年云南省禽流感病毒H9N2亚型监测及其血凝素基因序列分析 被引量：4

8

作者 胡媛媛 张文东 +10 位作者 宋建领 刘庆亮 曾伟 王锐 郑锦玲 彭洁 保志鹏 张应国 范泉水 赵焕云 张富强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期10-14,共5页

为了解H9N2亚型禽流感病毒（AⅣ）的变异情况,本研究对2013年云南省16个地区的3 622份家禽临床样品进行AⅣ的鸡胚分离和RT-PCR检测,其中分离鉴定到97份H9N2亚型AⅣ分离株,并选取21个分离株进行HA基因测序及系统进化分析,结果表明：21份H... 为了解H9N2亚型禽流感病毒（AⅣ）的变异情况,本研究对2013年云南省16个地区的3 622份家禽临床样品进行AⅣ的鸡胚分离和RT-PCR检测,其中分离鉴定到97份H9N2亚型AⅣ分离株,并选取21个分离株进行HA基因测序及系统进化分析,结果表明：21份H9N2亚型AⅣ分离株的HA基因核苷酸序列同源性为86.0 ％～99.4％,均属于欧亚分支的类A/Chicken/BeiJing/1/1994亚分支,而且又进一步划分为Ⅲ-1、Ⅲ-2两个小分支.其中Ⅲ-2分支为云南地区新出现的进化分支.氨基酸比对分析显示,测序的21个HA基因编码蛋白的裂解位点基序均具有低致病性病毒分子特征;与现用疫苗株相比,HA推导氨基酸序列中存在多个氨基酸位点差异;其中,Ⅲ-1与Ⅲ-2分支的AⅣ的HA氨基酸序列多个位点存在各自特有的点突变（氨基酸替换）,这种变异具有一定的进化（亚）分支特异性.此外,HA基因多个受体结合位点氨基酸存在变异,其中234位氨基酸全部变为L,呈现了人流感受体结合特性;部分糖基化位点、抗原表位关键性氨基酸也存在变异. 展开更多

关键词 禽流感监测 H9N2亚型 血凝素 序列分析

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大麦-小麦无抗型日粮添加壳聚糖和非淀粉多糖酶对肉鸡生长性能和盲肠微生物组成的影响 被引量：3

9

作者 王世雄 刘丽仙 +2 位作者 霍海龙 保志鹏 赵筱 《中国饲料》 北大核心 2018年第2期19-24,共6页

试验旨在研究大麦—小麦无抗型日粮中添加壳聚糖(CTS)和非淀粉多糖(NSP)酶对1~42 d肉鸡生长性能、空肠组织结构和盲肠微生物组成的影响。选择720羽1 d ROSS 308商品代肉仔鸡,随机分为4组,每组6个重复(30羽/重复),对照组饲喂以大麦—小... 试验旨在研究大麦—小麦无抗型日粮中添加壳聚糖(CTS)和非淀粉多糖(NSP)酶对1~42 d肉鸡生长性能、空肠组织结构和盲肠微生物组成的影响。选择720羽1 d ROSS 308商品代肉仔鸡,随机分为4组,每组6个重复(30羽/重复),对照组饲喂以大麦—小麦为主的基础日粮,CTS组、NSP酶组和CTS+NSP酶组饲喂含300 mg/kg CTS、200 mg/kg NSP酶和150 mg/kg CTS+100 mg/kg NSP酶的日粮,试验期42 d。结果显示:CTS组、NSP酶组和CTS+NSP酶组较对照组显著提高了21 d、42 d肉鸡末重和1~21 d、1~42 d肉鸡平均日增重(P<0.05)。CTS+NSP酶组较对照组、CTS组和NSP酶组显著降低22~42 d及1~42 d料重比。CTS组和CTS+NSP酶组1~42 d肉鸡胸腺指数显著高于对照组和NSP酶组(P<0.05)。日粮添加CTS+NSP酶较其他各组显著降低了空肠隐窝深度(P<0.05),显著提高了空肠绒毛高度与隐窝深度比值(P<0.05)。NSP酶组或CTS+NSP酶较对照组和CTS组显著提高了盲肠乳酸杆菌含量(P<0.05),与对照组相比,CTS组、NSP酶组或CTS+NSP酶组均显著降低了盲肠大肠杆菌数量(P<0.05)。综合考虑,本试验中150 mg/kg CTS+100 mg/kg NSP酶应用效果最佳。 展开更多

关键词 壳聚糖 非淀粉多糖酶 肉鸡 生长性能 盲肠微生物组成

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正交试验法优选复方秦皮水提工艺条件的研究 被引量：1

10

作者 周登高 冉婧 +1 位作者 田淑琴 保志鹏 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第4期797-800,共4页

目的:优选复方秦皮的水提工艺条件.方法:以秦皮乙素含量作为考察指标,以紫外分光光度法测定秦皮乙素含量,以加水量、煎煮时间、煎煮次数为影响因素,选用L9(34)表进行正交实验.结果:优选工艺为加水量为7倍,煎煮3次,每次煎煮1.5h.结论:优... 目的:优选复方秦皮的水提工艺条件.方法:以秦皮乙素含量作为考察指标,以紫外分光光度法测定秦皮乙素含量,以加水量、煎煮时间、煎煮次数为影响因素,选用L9(34)表进行正交实验.结果:优选工艺为加水量为7倍,煎煮3次,每次煎煮1.5h.结论:优选工艺提取的浸膏中秦皮乙素含量较高. 展开更多

关键词 正交实验 秦皮乙素含量 紫外分光光度法

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引入新型教学理念对实践教学改革的促进作用 被引量：3

11

作者 杨燕 张梅 保志鹏 《教育教学论坛》 2018年第26期137-138,共2页

随着现代社会的不断发展,实践技能型人才的需求量日益加大,这对高职院校的教学提出更高的要求。在培养学生较强动手能力的教学过程中,实践教学改革尤为重要,但新型的一些教育模式在高职院校中却很少实施。本文以药剂学教学为例,综述了... 随着现代社会的不断发展,实践技能型人才的需求量日益加大,这对高职院校的教学提出更高的要求。在培养学生较强动手能力的教学过程中,实践教学改革尤为重要,但新型的一些教育模式在高职院校中却很少实施。本文以药剂学教学为例,综述了近年来实施效果较好的新型实践教学模式,以期为综合性应用学科实践教学模式的改革提供参考。 展开更多

关键词 新型教学理念 实践教学模式 实践教学改革 综述

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复方秦皮提取液精制方法的研究

12

作者 保志鹏 田淑琴 +2 位作者 陈洁 鲜涛 赵阳 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第2期283-285,共3页

目的:优选复方秦皮制剂的最佳醇沉工艺.方法:采用正交试验法,以紫外分光光度法测定含量,以药液浓度,醇沉浓度,放置时间为影响因素,选用L9(34)表进行正交实验.结果:优选工艺为加药液浓度(1.1～1.2.),醇沉浓度(60%),放置时间(24h).结论:... 目的:优选复方秦皮制剂的最佳醇沉工艺.方法:采用正交试验法,以紫外分光光度法测定含量,以药液浓度,醇沉浓度,放置时间为影响因素,选用L9(34)表进行正交实验.结果:优选工艺为加药液浓度(1.1～1.2.),醇沉浓度(60%),放置时间(24h).结论:优选精制工艺提取的浸膏中秦皮乙素含量较高.该工艺稳定可行. 展开更多

关键词 正交试验 醇沉工艺 紫外分光光度法

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复方秦皮提取液精制方法的研究

13

作者 保志鹏 田淑琴 +3 位作者 韦燕 陈洁 鲜涛 赵阳 《四川畜牧兽医》 2008年第12期31-32,共2页

为了优选复方秦皮制剂的最佳醇沉工艺,我们采用正交试验设计,用紫外分光光度法测定含量,以药液浓度、醇沉浓度、放置时间为影响因素,选用L9(34)表进行正交试验。结果:优选工艺为药液浓度(1.1～1.2g/mL),醇沉浓度(60%),放置时间(24h)。结... 为了优选复方秦皮制剂的最佳醇沉工艺,我们采用正交试验设计,用紫外分光光度法测定含量,以药液浓度、醇沉浓度、放置时间为影响因素,选用L9(34)表进行正交试验。结果:优选工艺为药液浓度(1.1～1.2g/mL),醇沉浓度(60%),放置时间(24h)。结论:优选精制工艺提取的浸膏中秦皮乙素含量较高,说明该工艺稳定可行。 展开更多

关键词 正交试验 醇沉工艺 紫外分光光度法

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槟榔江水牛BMP4基因分离鉴定、组织表达及生物信息学分析 被引量：1

14

作者 郭文博 哈福 +4 位作者 江明星 张自芳 钱林东 保志鹏 苗永旺 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期223-230,共8页

BMP4基因在小鼠、人类及普通牛的胚胎发育、卵泡发生发育和精子形成过程中发挥重要作用,但在水牛上的研究尚未见报道。旨在探究水牛BMP4基因序列及组织表达特征,以揭示其功能。根据NCBI数据库普通牛BMP4序列设计引物,分离鉴定了槟榔江水... BMP4基因在小鼠、人类及普通牛的胚胎发育、卵泡发生发育和精子形成过程中发挥重要作用,但在水牛上的研究尚未见报道。旨在探究水牛BMP4基因序列及组织表达特征,以揭示其功能。根据NCBI数据库普通牛BMP4序列设计引物,分离鉴定了槟榔江水牛BMP4编码区全长序列(KF312880)。随后采用生物学软件和半定量RT-PCR技术对水牛BMP4进行了分子特征和组织表达差异分析。水牛BMP4编码区长度与其他牛科物种的相同,全长1230bp,编码409个氨基酸。水牛BMP4蛋白为亲水性蛋白,含有1个信号肽序列(AA1-24)和6种功能活性位点,无跨膜结构域,属胞外分泌蛋白,具有TGF-beta前导肽(AA39-276)和TGF-beta超家族(AA309-409)结构域。在BMP4氨基酸序列上,水牛与普通牛、野牦牛、人、马等10个物种的一致性≥97%。在所检测的11个组织中,BMP4仅在水牛子宫、卵巢和睾丸中表达,且在睾丸组织中表达水平最高。揭示水牛与普通牛的BMP4结构相似,功能相近,推测BMP4基因在水牛胚胎发育和生殖细胞成熟过程中发挥作用。 展开更多

关键词 槟榔江水牛 BMP4基因 基因分离鉴定 组织表达谱 生物信息学分析

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槟榔江水牛FEZL基因分离鉴定、分子特征及泌乳期多组织差异表达分析 被引量：1

15

作者 张广乐 吉丽 +3 位作者 王昌全 李成伟 保志鹏 苗永旺 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第12期13-19,共7页

前脑锌指蛋白(FEZL)参与神经元发育的转录调控,已证实FEZL基因是奶牛乳房炎抗性相关基因之一。该研究采用RT-PCR直接测序技术对FEZL编码区进行了分离鉴定,进一步采用生物信息学和半定量RT-PCR技术对FEZL基因进行了功能和泌乳期多组织差... 前脑锌指蛋白(FEZL)参与神经元发育的转录调控,已证实FEZL基因是奶牛乳房炎抗性相关基因之一。该研究采用RT-PCR直接测序技术对FEZL编码区进行了分离鉴定,进一步采用生物信息学和半定量RT-PCR技术对FEZL基因进行了功能和泌乳期多组织差异表达分析。水牛FEZL基因编码区序列长1380 bp,编码459个氨基酸,分子量和等电点分别为16.34 kDa和6.80。水牛的FEZL是在核内发挥生物学功能的亲水性蛋白,含有一个COG5048保守的锌指结构域,无信号肽序列及跨膜结构域。水牛中FEZL蛋白的氨基乙酸重复区均为13G/13G型。多组织差异表达分析表明,FEZL基因在水牛大脑中表达水平最高,在心、脾、肺、肾、小脑、垂体组织中表达水平次之,在乳腺、小肠、肌肉、十二指肠组织中少量表达,在瘤胃组织中微量表达。在基于FEZL氨基酸序列构建的系统树上,槟榔江水牛与13G型普通牛聚在一起,支持率为99%。结果揭示水牛FEZL可能在细胞核内作为转录因子参与了基因的表达和机体免疫调控过程。 展开更多

关键词 槟榔江水牛 FEZL基因 生物信息学分析 基因功能 组织差异表达

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包虫病的脂质体药物制备研究进展 被引量：2

16

作者 鲜涛 田淑琴 保志鹏 《现代农业科学》 2008年第12期1-2,共2页

包虫病是人畜共患病,分布地域广泛,主要流行于畜牧业发达的地区,严重危害人类健康和畜牧业生产。现以治疗包虫病的脂质体药物的制备进展作一综述。

关键词 包虫病 脂质体 制备方法

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槟榔江水牛胃型LYZ C基因分离鉴定及功能生物信息学分析

17

作者 黄静 保志鹏 +4 位作者 范新阳 张永云 杜平 康定富 苗永旺 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第4期640-646,共7页

【目的】溶菌酶是一种由动物产生的抗微生物酶,构成动物体先天免疫系统的一部分,在反刍动物的皱胃中还具有消化功能。迄今,普通牛溶菌酶C基因家族的分子遗传特征已被深入解析,但有关水牛溶菌酶C的研究报道较少。【方法】采用PCR产物直... 【目的】溶菌酶是一种由动物产生的抗微生物酶,构成动物体先天免疫系统的一部分,在反刍动物的皱胃中还具有消化功能。迄今,普通牛溶菌酶C基因家族的分子遗传特征已被深入解析,但有关水牛溶菌酶C的研究报道较少。【方法】采用PCR产物直接测序技术,对槟榔江水牛胃型溶菌酶C基因编码区进行了分段扩增测序、序列组装和开放阅读框的确定,并结合已发表的其他牛科物种同源序列进行了生物信息学分析。【结果】序列分析表明:水牛胃型溶菌酶C基因编码区长444 bp,编码1个由147个氨基酸残基组成的多肽,包含1个N端信号肽和1段由129个氨基酸组成的成熟肽。水牛胃型溶菌酶C成熟肽分子量为14.41 ku,等电点为6.32,含有1个alpha-lactalbumin/lysozyme C保守结构域(19~145AA),不含有跨膜结构域,为亲水蛋白,在胞外发挥生物功能;在三维结构上与普通牛的溶菌酶模板(2z2f.1.A)有99.22%的一致性;在基于氨基酸序列构建的系统树上,水牛与普通牛、瘤牛、野牦牛和野牛聚在一起,且有较高的支持率(88%)。【结论】槟榔江水牛与其他牛科物种的胃型溶菌酶具有相似的功能。 展开更多

关键词 槟榔江水牛 溶菌酶C基因 皱胃 生物信息学分析 基因功能

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牛科物种FSHβ基因密码子偏好性分析

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作者 周芳廷 保志鹏 +6 位作者 赵学成 李卫真 杜平 康定富 董书承 余选富 苗永旺 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第1期47-55,共9页

【目的】为了确定牛科物种FSHβ基因密码子使用上的偏好性及差异。【方法】采用PCR产物直接测序法对36头槟榔江水牛、32头滇东南水牛、26头大额牛和29头中甸牦牛的FSHβ基因编码区序列进行了群体变异检测,并结合已发表的普通牛、野牛、... 【目的】为了确定牛科物种FSHβ基因密码子使用上的偏好性及差异。【方法】采用PCR产物直接测序法对36头槟榔江水牛、32头滇东南水牛、26头大额牛和29头中甸牦牛的FSHβ基因编码区序列进行了群体变异检测,并结合已发表的普通牛、野牛、山羊和绵羊的同源序列,对牛科物种FSHβ基因同义密码子使用的偏好性及其差异进行了深入分析。【结果】各牛科物种共同偏好使用UUC、CUG、AUC、GUG、UCC、AGC、CCC、CCA、ACC、ACG、GCA、UAC、CAG、ACC、GAC、GAG、UGC、AGA、AGG、GGC等20种密码子。除CCA、GCA和AGA之外,其余密码子均以G/C结尾。编码His的两个同义密码子CAU、CAC在沼泽型水牛中无偏好性,在河流型水牛中则偏好使用CAU。编码Lys的两个密码子AAA、AAG在河流型和沼泽型水牛中无偏好性,在野牛和山羊中偏好使用AAG,而牦牛、普通牛、大额牛和绵羊则偏好使用AAA。基于密码子的RSCU值构建的聚类树显示:河流型与沼泽型水牛聚为一类,牦牛、普通牛、大额牛和绵羊聚为一类,野牛与山羊聚为一类。【结论】各牛科物种FSHβ基因在密码子使用上均存在一定的偏好性,但差异较小,且都偏好性使用以G/C结尾的密码子,其中河流型与沼泽型水牛的偏好性最相似。 展开更多

关键词 牛科物种 槟榔江水牛 FSHΒ基因 密码子偏好性 RSCU值 聚类分析

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正交试验法优选大黄水杨酸抗真菌配方

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作者 韦燕 田淑琴 +2 位作者 保志鹏 张德玉 鲜涛 《四川畜牧兽医》 2009年第9期30-31,共2页

以抑菌圈直径作为考察指标,采用纸片法药敏试验测定大黄水杨酸的抑菌效果。以大黄浓度、水杨酸浓度、两药间比例为影响因素,选用L9(34)表进行正交试验,结果得出:以大黄浓度为250mg/mL,水杨酸浓度为10%,两者间比例为1∶1,即A2B1C3组合时... 以抑菌圈直径作为考察指标,采用纸片法药敏试验测定大黄水杨酸的抑菌效果。以大黄浓度、水杨酸浓度、两药间比例为影响因素,选用L9(34)表进行正交试验,结果得出:以大黄浓度为250mg/mL,水杨酸浓度为10%,两者间比例为1∶1,即A2B1C3组合时,大黄水杨酸复合剂的抑菌效果最好。 展开更多

关键词 抑菌圈 纸片法 正交试验 抑菌效果

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重组腺病毒表达牛纽布病毒VP1蛋白及免疫效果评价

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作者 陈涛云 朱庆 +5 位作者 保志鹏 喻琦胜 张家祺 任玉鹏 张朝辉 张斌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期268-275,共8页

旨在构建一种表达牛纽布病毒(bovine nebovirus,BNeV)VP1蛋白的人5型复制缺陷型重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1,并评价其免疫效果。以优化合成的BNeV VP1基因序列构建重组穿梭质粒pDC316-VP1,利用AdMax腺病毒包装系统包装重组腺病毒rAd5-BNeV_... 旨在构建一种表达牛纽布病毒(bovine nebovirus,BNeV)VP1蛋白的人5型复制缺陷型重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1,并评价其免疫效果。以优化合成的BNeV VP1基因序列构建重组穿梭质粒pDC316-VP1,利用AdMax腺病毒包装系统包装重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1,并在小鼠中评价其免疫效果。结果显示,通过比对国内BNeV VP1氨基酸序列,根据HEK293细胞密码子偏嗜性优化合成国内流行毒株Bo/LN-13/18/CH株的BNeV VP1序列,序列大小为1650 bp。将pDC316-VP1与骨架载体pBHGIox_E1,3Cre共转染入HEK293细胞包装出重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1。RT-PCR扩增出1650 bp的BNeV VP1基因条带,Western blot及间接免疫荧光反应证实rAd5-BNeV_VP1能够成功表达VP1蛋白,蛋白大小约为57.5 kDa,表明成功包装出rAd5-BNeV_VP1且VP1基因能在重组腺病毒中稳定表达,其TCID_(50)为10-5.34/0.1 mL。通过肌肉注射和滴鼻2种途径免疫小鼠均能产生较高的特异性抗体水平,二免7 d后肌肉注射组抗体效价最高可达1∶105,滴鼻组抗体效价最高可达1∶104;滴鼻组可产生高于PBS组2倍的INF-γ和IL-2(P<0.05)。结果表明,本研究构建表达BNeV VP1蛋白的重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1具有良好的免疫原性,可刺激小鼠快速产生针对BNeV VP1的特异性抗体,为今后BNeV疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 重组腺病毒 牛纽布病毒 免疫原性 VP1蛋白

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