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非洲猪瘟病毒p30蛋白氨基酸序列分段表达及反应原性分析
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作者 周俊明 倪艳秀 +5 位作者 范宝超 祝昊丹 朱雪蛟 王丹丹 胡屹屹 李彬 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第10期1875-1881,共7页
为比较非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白氨基酸序列中不同片段的反应原性,探究p30蛋白氨基酸序列中可能的抗原优势片段。本研究通过PCR、克隆技术将p30蛋白氨基酸序列中不同片段的编码基因分别插入表达质粒pET32a,... 为比较非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白氨基酸序列中不同片段的反应原性,探究p30蛋白氨基酸序列中可能的抗原优势片段。本研究通过PCR、克隆技术将p30蛋白氨基酸序列中不同片段的编码基因分别插入表达质粒pET32a,经IPTG诱导、Ni柱纯化、透析后,获得p30蛋白氨基酸序列中8~101 aa片段(P-1#)、58~101 aa片段(P-2#)、101~158 aa片段(P-3#)、8~194 aa片段(P-4#),用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析p30蛋白氨基酸序列中不同片段与p30蛋白免疫兔血清和ASFV阳性猪血清的反应原性。结果显示,上述片段均获得诱导表达及纯化,表达形式有可溶性表达(P-1#、P-3#)和包涵体表达(P-2#、P-4#)。各片段以1.0 mg/L包被时,p30免疫兔血清与p30蛋白氨基酸序列中4种片段均能发生免疫反应,ASFV阳性猪血清与P-4#、P-1#反应较佳,与P-3#反应中等,与P-2#反应最弱。综上,p30蛋白氨基酸序列中不同片段反应原性的差异为认识p30抗原优势区域提供了数据,这将有助于非洲猪瘟血清学诊断抗原的科学筛选。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 氨基酸序列片段 反应原性
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藏猪猪链球菌的分离鉴定及其致病性和药物敏感性分析
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作者 赵霞玲 肖琦 +9 位作者 钱雯娴 倪艳秀 祝昊丹 周俊明 汪伟 温立斌 温东旭 严明帅 牛家强 何孔旺 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期122-133,共12页
为了解西藏林芝市藏猪猪链球菌感染情况、分离株生物学特性及其耐药情况。本研究针对来自西藏林芝市312份健康藏猪的样品进行了猪链球菌的分离鉴定、血清型分型、毒力因子检测、生化鉴定、致病性试验、药敏试验。结果显示,在312份样品... 为了解西藏林芝市藏猪猪链球菌感染情况、分离株生物学特性及其耐药情况。本研究针对来自西藏林芝市312份健康藏猪的样品进行了猪链球菌的分离鉴定、血清型分型、毒力因子检测、生化鉴定、致病性试验、药敏试验。结果显示,在312份样品中检出71份猪链球菌阳性(22.76%),检测出22种血清型。细菌分离培养得到4株革兰氏阳性菌,分离菌的菌落形态、菌体形态与链球菌相符;根据生化试验及PCR鉴定结果判定4株分离菌均为猪链球菌;PCR血清型分型结果显示,其中1株为16型(Ss16 LZ1)、1株为30型(Ss30 LZ1)、2株为31型(Ss31 LZ1、Ss31 LZ2);毒力基因检测结果,Ss16 LZ1、Ss30 LZ1表现为sly^(–)epf^(–)mrp^(–)orf2^(–)fbps^(+),Ss31 LZ1、Ss31 LZ2表现为sly^(–)epf^(+)mrp^(–)orf2^(–)fbps^(+);致病力试验显示,Ss16 LZ1、Ss31 LZ1对小鼠致病,LD_(50)分别为2.0×10^(10)CFU/mL、1.4×10^(8)CFU/mL;Ss30 LZ1、Ss31 LZ2攻毒小鼠后未出现死亡;病理切片表明4株分离菌均能引起小鼠内脏组织发生病变;药敏试验结果显示,4株菌均对糖肽类、酰胺醇类、喹诺酮类药物中介或敏感。以上结果为西藏林芝市藏猪猪链球菌病防控提供了科学根据。 展开更多
关键词 藏猪 分离鉴定 血清型 致病性 药敏试验
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猪链球菌2型的PCR快速检测 被引量:46
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作者 倪艳秀 何孔旺 +5 位作者 王继春 何家惠 还红华 吕立新 陆承平 姚火春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期474-476,共3页
根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C... 根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等检测结果均呈阴性 ,表明了本方法的特异性。用此法对 88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测 ,36份呈阳性 ,同时用玻片凝集试验进行对照检测 ,也全部呈阳性。而此法不需进行细菌的纯分离培养 ,即可用于猪链球菌 2型的快速诊断以及流行病学调查。 展开更多
关键词 链球菌 PCR 快速检测 玻片凝集试验
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检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立 被引量:23
4
作者 倪艳秀 何孔旺 +4 位作者 王继春 何家惠 还红华 陆承平 姚火春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期20-22,共3页
根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试... 根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株从病猪体内分离的猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,8株呈阳性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是 1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高 ,可作为MRP快速诊断和流行病学调查的手段。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶菌酶释放蛋白 PCR 检测方法
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逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测轮状病毒 被引量:14
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作者 倪艳秀 林继煌 +2 位作者 陆承平 江杰元 何孔旺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期437-440,共4页
为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段,选取A组轮状病毒VP7基因上的2段高度保守序列作为引物,在优化逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)条件的基础上,建立了检测轮状病毒的RT-PCR方法。通... 为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段,选取A组轮状病毒VP7基因上的2段高度保守序列作为引物,在优化逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)条件的基础上,建立了检测轮状病毒的RT-PCR方法。通过对比试验,确定了PCR的最优模式:94℃变性1min→55℃退火1min→72℃延伸2min,30个循环后再在72℃下延伸10min。用此模式进行了RT-PCR的特异性和敏感性试验。检测的6株轮状病毒分离株(牛HN-7、BRV007、BRV014、BRV6555、猪Li99、Nan86)及2株参考株(牛NCDV、猴SA11),都能扩增出唯一的342bp的目的条带;对猪流行性腹泻病毒(PEDV)及传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪的粪样、正常MA104细胞检测结果均呈阴性;检测的敏感度可达1pg水平。对40份猪、牛、兔的腹泻粪样检测,30份呈阳性,而用作平行对照的夹心ELISA法检测,有25份呈阳性,两者符合率为87.5%。两法检测不符的5份粪样的PCR扩增产物,用地高辛标记探针进行了斑点杂交,结果均呈阳性,表明RT-PCR法比ELISA法敏感性高。 展开更多
关键词 轮状病毒 夹心ELISA PT-PCR 检测
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猪流行性腹泻研究概况 被引量:55
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作者 倪艳秀 林继煌 +1 位作者 何孔旺 还红华 《畜牧与兽医》 北大核心 2001年第1期38-40,共3页
概述了猪流行性腹泻病毒的病毒特性、基因组结构及主要病毒蛋白、诊断方法、预防和治疗等方面国内外研究情况。
关键词 流行性腹泻 病毒病 病毒特性 基因组结构 病毒蛋白 诊断 防治
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A组轮状病毒研究动态 被引量:15
7
作者 倪艳秀 林继煌 +1 位作者 何孔旺 江杰元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 1998年第1期60-64,共5页
概述了有关A组轮状病毒的病原特性、基因组结构、病毒蛋白、诊断、血清分型、基因工程等方面国内外研究情况。A组轮状病毒属呼肠孤病毒科,是引起婴幼儿和多种幼龄动物严重胃肠炎的重要病原之一。基因组由11个片段的双股RNA组成... 概述了有关A组轮状病毒的病原特性、基因组结构、病毒蛋白、诊断、血清分型、基因工程等方面国内外研究情况。A组轮状病毒属呼肠孤病毒科,是引起婴幼儿和多种幼龄动物严重胃肠炎的重要病原之一。基因组由11个片段的双股RNA组成,分别编码11种病毒蛋白(6种结构蛋白和5种非结构蛋白)。轮状病毒的诊断方法有多种,其中电镜法、酶联免疫吸附试验、核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳等3种方法最为常用。轮状病毒有两套血清学分类系统,目前已知至少有14个G型、18个P型。当前人们已将VP4、VP7在大肠杆菌、痘病毒、腺病毒、杆状病毒中表达成功。 展开更多
关键词 轮状病毒 动物 病原特性 基因组结构 病毒蛋白
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猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析 被引量:10
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作者 倪艳秀 何孔旺 +2 位作者 何家惠 王继春 吕立新 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第11期11-14,共4页
根据猪链球菌 2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为 14 96bp目的片段的引物 ,建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌 2型参考株SS2 N株的检测结果为阳性 ,对马链球菌兽疫亚种 (C群 )参考株ATCC3 5 2 46、分离株SESZ Y、S... 根据猪链球菌 2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为 14 96bp目的片段的引物 ,建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌 2型参考株SS2 N株的检测结果为阳性 ,对马链球菌兽疫亚种 (C群 )参考株ATCC3 5 2 46、分离株SESZ Y、SESZ T、SESZ C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏菌的检测结果均为阴性 ;用EcoRⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期结果一致的 863bp和 63 3bp的 2个片段。经对SS2 1株的PCR产物进行测序及序列分析 ,表明其与 193 3株、P1/ 7株的核苷酸同源性分别为 99.7%和 10 0 %。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素基因 检测 序列分析 人畜共患病 PCR方法
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猪链球菌2型溶血素成熟蛋白的原核表达及其生物学特性与免疫保护性 被引量:4
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作者 倪艳秀 何孔旺 +11 位作者 周俊明 汪伟 吕立新 俞正玉 茅爱华 温立斌 张雪寒 李彬 胡屹屹 郭容利 王小敏 陆承平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期335-340,共6页
根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物... 根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物(分子量约为7.2×104)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白质的20%,表达产物在上清和包涵体中各占一半。将上清经镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白质经Western blotting鉴定呈阳性,对绵羊红细胞、鸡红细胞的溶血效价分别为1.707×105HU/mg、4.267×104HU/mg,并可引起HEp-2和Vero细胞的颗粒增多、圆缩和脱落。纯化蛋白质对BALB/c小鼠的免疫保护率为83.3%(5/6)。这为进一步研究SLY致病机理和研制猪链球菌新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素成熟蛋白 原核表达 生物学特性 免疫保护性
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检测猪链球菌2型胞外因子(EF)的PCR方法的建立 被引量:10
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作者 倪艳秀 何孔旺 +4 位作者 王继春 何家惠 还红华 陆承平 姚火春 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期57-59,共3页
根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏... 根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马腺疫链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎霉形体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,7株呈EF阳性 ,1株呈EF 阳性 ,1株呈EF阴性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果 1份为阳性。实验结果表明此法特异性和敏感性均很高 。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 胞外因子 PCR
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正常屠宰猪致病性猪链球菌9型的鉴定和特性研究 被引量:3
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作者 倪艳秀 茅爱华 +6 位作者 俞正玉 吕立新 温立斌 张雪寒 郭容利 周俊明 何孔旺 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期5-8,共4页
从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌HA070725,呈链球菌的特征形态,β溶血,药敏试验表明该菌对多种抗生素产生耐药性。经PCR及序列分析,为猪链球菌9型。其毒力因子基因型为mrp-/epf-/sly-/orf2+/gdh+/ fbps+/impdh+。动物致病性试... 从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌HA070725,呈链球菌的特征形态,β溶血,药敏试验表明该菌对多种抗生素产生耐药性。经PCR及序列分析,为猪链球菌9型。其毒力因子基因型为mrp-/epf-/sly-/orf2+/gdh+/ fbps+/impdh+。动物致病性试验表明,该菌对ICR小鼠和断奶仔猪有较强的致病性,对ICR小鼠的半数致死量为2.67×10~6cfu。结果表明:在正常猪扁桃体中可携带高致病性的猪链球菌9型。 展开更多
关键词 正常屠宰猪 猪链球菌9型 鉴定 特性
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检测猪流行性腹泻病毒的R-PCR方法的建立 被引量:3
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作者 倪艳秀 何孔旺 +3 位作者 俞正玉 郭蓉利 吕立新 陈兆霞 《畜牧与兽医》 北大核心 2004年第1期10-12,共3页
根据猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的N基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 641bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测的猪流行性腹泻病毒的RT PCR方法。对猪轮状病毒 (PRV)、猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)的RT PCR检测结果均呈阴性。对PEDV JS... 根据猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的N基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 641bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测的猪流行性腹泻病毒的RT PCR方法。对猪轮状病毒 (PRV)、猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)的RT PCR检测结果均呈阴性。对PEDV JS株的RT PCR产物的序列分析表明 ,与CV777株的同源性为 97 3 %。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 RT-PCR 检测方法 鉴别诊断
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检测猪链球菌2型的胞外因子(EF)的PCR方法的建立 被引量:2
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作者 倪艳秀 何孔旺 +4 位作者 王继春 何家惠 还红华 陆承平 姚火春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期72-74,共3页
根据猪链球菌2型的ef基因和ef基因合成了一对可扩增长度为626bp目的片段的引物,成功地建立了检测胞外因子(EF)的 PCR方法。用 Hae Ⅱ内切酶进行酶切,获得了与预期一致的 354bp和 272bp的两个片段。并... 根据猪链球菌2型的ef基因和ef基因合成了一对可扩增长度为626bp目的片段的引物,成功地建立了检测胞外因子(EF)的 PCR方法。用 Hae Ⅱ内切酶进行酶切,获得了与预期一致的 354bp和 272bp的两个片段。并进行了 PCR的特异性试验和敏感性试验。对马腺疫链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性;检测的敏感度可达100个细菌。另外,对9株猪链球菌2型菌株进行了检测,7株呈EF阳性,1株呈EF阳性,1株呈EF阴性;对15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高,可作为EF快速诊断和流行病学调查的手段。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 胞外因子(EF) PCR
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4株猪链球菌2型分离株主要毒力因子(MRP、EF)的全基因序列分析 被引量:2
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作者 倪艳秀 段志涛 +1 位作者 何孔旺 陆承平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第3期204-207,共4页
猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌,溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)是其重要的2种毒力因子。参照GenBank上已发表的MRP和EF基因序列,设计引物,对4株国内SS2分离株进行MRP和EF全基因序列测定并进行分析。结果... 猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌,溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)是其重要的2种毒力因子。参照GenBank上已发表的MRP和EF基因序列,设计引物,对4株国内SS2分离株进行MRP和EF全基因序列测定并进行分析。结果表明:4株SS2国内分离株MRP基因的完整开放阅读框(ORF)都为3771bp、编码1256个氨基酸,EF基因的完整ORF都为2532bp,编码843个氨基酸;与国外参考株D282之间的MRP核苷酸和蛋白质的同源性都为99.9%。EF核苷酸的同源性为99.9%、蛋白质的同源性为99.5%~100.0%。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 MRP基因 EF基因 序列分析
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猪链球菌2型SS_2-1和SS_2-H株的培养稳定性检测 被引量:1
15
作者 倪艳秀 何孔旺 +4 位作者 何家惠 王继春 俞正玉 侯继波 吕立新 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第4期29-30,共2页
将猪链球菌 2型制苗候选菌株SS2 1和SS2 H在血平板上连续传代至第 41代 ,并分别检测第 1代、第 11代、第2 1代、第 3 1代和第 41代菌株的菌落及细菌形态、生化特性、溶菌酶释放蛋白 (MRP)和胞外因子 (EF)等指标。结果 ,从第1代至第 41... 将猪链球菌 2型制苗候选菌株SS2 1和SS2 H在血平板上连续传代至第 41代 ,并分别检测第 1代、第 11代、第2 1代、第 3 1代和第 41代菌株的菌落及细菌形态、生化特性、溶菌酶释放蛋白 (MRP)和胞外因子 (EF)等指标。结果 ,从第1代至第 41代 ,2株细菌的菌落及细菌形态、生化特性、MRP和EF均没有发生变异。这表明SS2 1和SS2 H菌株培养稳定性较好 ,使用限定代次至少可达 41代 。 展开更多
关键词 SS2-1株 SS2-H株 检测 链球菌2型 传代 培养稳定性
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国内病猪中猪链球菌2型分离株溶血素基因的PCR检测及序列分析
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作者 倪艳秀 何孔旺 +7 位作者 俞正玉 温立斌 吕立新 张雪寒 郭容利 周俊明 茅爱华 陆承平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期1053-1057,共5页
以探明猪链球菌2型(SS2)国内病猪分离株的溶血素基因(sly)的分布情况及其序列为目的。通过聚合酶链反应(PCR)方法检测29株不同年代、不同地区SS2国内分离株的sly,并将其中的5株(SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507和ZY05719)sly进... 以探明猪链球菌2型(SS2)国内病猪分离株的溶血素基因(sly)的分布情况及其序列为目的。通过聚合酶链反应(PCR)方法检测29株不同年代、不同地区SS2国内分离株的sly,并将其中的5株(SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507和ZY05719)sly进行克隆及序列分析。结果显示:29株菌都有sly,其中5株菌的sly的ORF的碱基数目都为1494bp、编码497个氨基酸,核苷酸序列的同源性为99.7%~100.0%,所推导的蛋白质序列的同源性为99.8%~100.0%,其中SS2—1、HA9801、HA0507、JR0507与国外参考株P1/7的序列完全一致。表明中国猪链球菌2型病猪分离株普遍具有sly,且基因序列极为保守。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素基因 检测 序列分析
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次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布
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作者 倪艳秀 周俊明 +7 位作者 张雪寒 温立斌 吕立新 郭容利 俞正玉 茅爱华 何孔旺 陆承平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期848-852,共5页
参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶(IMPDH)基因序列,设计引物,对34个猪链球菌不同血清型(缺12型)国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明:除17型、24型、32型、33型和34型外,其他29个血清型都为阳性... 参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶(IMPDH)基因序列,设计引物,对34个猪链球菌不同血清型(缺12型)国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明:除17型、24型、32型、33型和34型外,其他29个血清型都为阳性,其核苷酸序列的同源性为88.3%~100.0%,所推导的蛋白质序列的同源性为94.7%~100.0%。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 次黄嘌呤核苷酸脱氢酶基因 分布
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Genetic Variation Analysis of 3D Gene and Molecular Detection of Porcine Kobuvirus in 2013-2014
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作者 倪艳秀 何孔旺 +10 位作者 茅爱华 俞正玉 李彬 郭容利 吕立新 祝昊丹 周俊明 温立斌 张雪寒 王小敏 汪伟 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2015年第3期442-446,共5页
[Objective] This study aimed to investigate the prevalence and variation of porcine kobuvirus (PKV) in suckling piglets in China. [Method] In 2013-2014, 224 feces samples from suckling piglets with diarrhea in 27 pi... [Objective] This study aimed to investigate the prevalence and variation of porcine kobuvirus (PKV) in suckling piglets in China. [Method] In 2013-2014, 224 feces samples from suckling piglets with diarrhea in 27 pig farms of five provinces in China were collected to detect 3D genes of PKV with RT-PCR method; the sequences and genetic variation of 29 PKV 3D genes were analyzed. [Result] Total positive rate of PKV in feces samples from suckling piglets with diarrhea was 65.18% (146/224); total positive rate of PKV in pig farms was 85,2% (23/27); nucleotide sequences and the deduced amino acid sequences of 29 PKV 3D genes shared 87.0%-100% and 92.7%-100% homologies with six PKV-related 3D sequences, respectively. [Conclusion] PKV infection is prevalent in suckling piglets in China; PKV 3D genes exhibit high diversity. 展开更多
关键词 Porcine kobuvirus Molecular detection 3D gene Genetic variation analysis
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PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子 被引量:30
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作者 何孔旺 陆承平 +2 位作者 倪艳秀 王继春 姚火春 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 2002年第3期1-4,共4页
根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C... 根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等 PCR均未扩增出任何条带。用 Xba 和 H ae 分别酶切 PCR扩增产物 ,均获得与预计一致的酶切图谱 ,PCR扩增产物测序结果显示 :其基因序列分别与 Gen Bank上公布的mrp全基因第 5 0 0~ 1 3 1 5位碱基及 epf全基因第 2 441~ 3 0 2 8碱基对一致。PCR检测的敏感度可达 1 0 0个细菌。用建立的 PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测 ,检测的 1 5株 2型分离株中有 1 3株 mrp与 epf均为阳性 ,为典型的高毒力表现型菌株 (mrp+ epf+ ) ,1株为 mrp+ epf- ,1株为 mrp- epf- 。 展开更多
关键词 PCR方法 链球菌 毒力因子 聚合酶链反应
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RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒 被引量:19
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作者 李军 林继煌 +4 位作者 陆承平 何孔旺 倪艳秀 还红华 钱永清 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期246-248,共3页
根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹... 根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹心 ELISA法作对照。结果显示 ,RT-PCR法检测的 2 0份阳性粪样 ,用夹心 ELISA法检测有 1 4份呈阳性 ,两者的符合率为 89%。 RT-PCR法比夹心 ELISA法敏感性更高 ,可用于 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 RT-PCR 诊断方法
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