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骨架蛋白MYH9和Palladin在肺癌发生发展中的联合作用和临床价值
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作者 柳诗雅 陈梦 +3 位作者 申改改 曹渊婷 孙立新 冉宇靓 《癌变.畸变.突变》 CAS 2024年第5期333-341,共9页
目的:研究骨架蛋白MYH9和Palladin对肺癌患者预后和恶性表型的联合作用及临床价值。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载肺癌转录组数据以及相关临床信息。利用生物信息学方法,分析MYH9和Palladin对肺癌患者预后及其与临床病理特征... 目的:研究骨架蛋白MYH9和Palladin对肺癌患者预后和恶性表型的联合作用及临床价值。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载肺癌转录组数据以及相关临床信息。利用生物信息学方法,分析MYH9和Palladin对肺癌患者预后及其与临床病理特征的关系,进一步分析两者对肺癌预后的联合作用。同时构建双分子敲降和单分子敲降的NCI-H460细胞,分别采用CCK-8法检测双分子敲降对肺癌细胞增殖和耐药的影响,Transwell实验检测双分子联合敲降对肺癌细胞迁移和侵袭的影响,甲基纤维素成球实验检测双分子敲降对肺癌细胞自我更新的作用。最后通过组织芯片进一步验证MYH9和Palladin联合在肺癌中的表达及其对患者预后的影响。结果:生物信息学分析结果显示MYH9和Palladin在肺癌组织中均呈现高表达,相比于低表达组患者,MYH9和Palladin高表达组患者的预后以及临床分期更差,其中双分子均高表达组肺癌患者的预后最差(P<0.01)。细胞生物学实验结果表明双分子敲降组肺癌细胞增殖、耐药性、迁移、侵袭及自我更新能力均明显低于单分子敲降组和对照组细胞(P<0.01)。组织芯片结果进一步证实了相比于癌旁组织,MYH9和Palladin在肺癌组织中均呈现高表达,与低表达组相比,MYH9和Palladin高表达组的肺癌患者预后更差(P<0.01),且双分子均高表达组肺癌患者的临床预后最差。结论:MYH9和Palladin的联合作用对肺癌细胞干性相关特征的影响显著高于其单独作用,MYH9和Palladin双分子联合对肺癌的临床预后作用更显著,这表明MYH9和Palladin有可能成为靶向非小细胞肺癌的联合靶标分子。 展开更多
关键词 MYH9 PALLADIN 肺癌 干性特征 联合作用
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肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定 被引量:6
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作者 冉宇靓 胡海 +3 位作者 陈立钊 遇珑 孙立新 杨治华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第2期110-114,共5页
目的:鉴定抑制肺癌细胞生长的功能性单克隆抗体1E2及其抗原,为治疗肺癌提供有潜力的靶向抗体治疗剂和分子靶位。方法:采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、ELISA、动物体内治疗实验等方法检测鼠单克隆抗体1E2对人肺癌细胞增殖的抑制、单... 目的:鉴定抑制肺癌细胞生长的功能性单克隆抗体1E2及其抗原,为治疗肺癌提供有潜力的靶向抗体治疗剂和分子靶位。方法:采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、ELISA、动物体内治疗实验等方法检测鼠单克隆抗体1E2对人肺癌细胞增殖的抑制、单抗与癌细胞的结合部位、单抗的亚类和单抗对肺癌移植瘤的抑制,以Western blotting和MALDI TOF质谱方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果:单抗1E2能够与肺癌细胞GLC82和NCI-H520的细胞膜结合,在体外能够明显抑制肺癌细胞的增殖。动物实验表明单抗1E2能够抑制肺癌移植瘤的生长,抑制率达49%。Western blotting显示其抗原相对分子质量约110000,质谱鉴定该抗原为氨甲酰磷酸合成酶(carbamoyl-phosphate synthetase1,CPS1)。结论:单抗1E2能够在体内外抑制肺癌的生长,具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力。该抗体识别的抗原CPS1可表达于肺癌细胞的细胞膜,可能是一个肺癌靶向治疗的新靶位。 展开更多
关键词 肺癌 功能性单克隆抗体 抗原 靶位 靶向治疗
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抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达 被引量:5
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作者 冉宇靓 孔健 +4 位作者 赵泽国 孙立新 遇珑 刘军 杨治华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期407-410,共4页
目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴... 目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴定所表达的嵌合抗体的生物学特性。结果获得产量可达60 μg/ml的细胞株。Western blot、 ELISA、体内放射免疫实验证明所表达的嵌合抗体的确含人抗体的恒定区,并特异地与 CEA结合。结论成功地在真核细胞CHO-dh fr-中高效表达了抗CEA嵌合抗体,并具有良好的生物活性。 展开更多
关键词 结肠癌 CHO细胞 免疫治疗 抗CEA嵌合抗体
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抗CEA抗体可变区基因的克隆及其嵌合抗体的表达 被引量:3
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作者 冉宇靓 孔健 +4 位作者 杨治华 孙立新 刘军 陈凤 遇珑 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2001年第2期82-86,共5页
目的 在真核细胞中表达抗癌胚抗原 (carcinoembryonic antigen,CEA)人 -鼠嵌合抗体。方法 从分泌抗 CEA鼠单抗 C5 0的杂交瘤细胞中扩增、克隆可变区基因。测序鉴定后连入真核表达载体 ,导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢 (dihydro... 目的 在真核细胞中表达抗癌胚抗原 (carcinoembryonic antigen,CEA)人 -鼠嵌合抗体。方法 从分泌抗 CEA鼠单抗 C5 0的杂交瘤细胞中扩增、克隆可变区基因。测序鉴定后连入真核表达载体 ,导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢 (dihydrofolate reductase- deficient Chinese ham ster ovary,CHO- dhfr- )细胞进行表达。采用间接和竞争抑制 EL ISA检测表达产物的人源性和抗原结合特异性。结果 序列测定初步确定所克隆的是功能性抗体可变区基因。在转染细胞上清中测到抗 CEA嵌合抗体的表达。EL ISA试验证实该嵌合抗体具有人的恒定区 ,并与原鼠单抗 C5 0有相同的抗原结合特异性。结论 成功地在真核细胞中表达了抗 CEA人 -鼠嵌合抗体。 展开更多
关键词 真核细胞 嵌合体 抗体 癌胚抗原 基因表达 可变区基因 克隆 肿瘤 抗CEA抗体
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人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 被引量:2
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作者 冉宇靓 钟星 +3 位作者 胡海 遇珑 娄晋宁 杨治华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1323-1328,共6页
背景与目的:目前在肿瘤内皮细胞基因功能和靶向血管治疗肿瘤的研究中仍缺乏适宜的动物模型。本研究拟建立一种新的小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型。方法:将人肝窦微血管内皮细胞系(humanliversinusoidendothelialcells,HLSEC)分别与人肝... 背景与目的:目前在肿瘤内皮细胞基因功能和靶向血管治疗肿瘤的研究中仍缺乏适宜的动物模型。本研究拟建立一种新的小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型。方法:将人肝窦微血管内皮细胞系(humanliversinusoidendothelialcells,HLSEC)分别与人肝癌细胞系BEL7402、人结肠癌细胞系LS174T、人食管癌细胞系NEC按不同比例混合共接种NOD/SCID小鼠或BALB/c裸小鼠,以单独接种肿瘤细胞的小鼠作为对照组,观察小鼠人移植瘤生长的情况。采用绿色荧光蛋白基因(greenfluorescentprotein,GFP)转染HLSEC,结合荧光显微镜检方法观察HLSEC在共接种移植瘤中的存活及血管形成的情况。免疫组化法检测肿瘤内微血管密度(microvesseldensity,MVD)。用抗人肝癌内皮细胞单抗2B6处理人肝癌移植瘤共接种模型,观察2B6对肿瘤生长的影响。结果:HLSEC与BEL7402细胞共接种NOD/SCID小鼠时,共接种组肿瘤生长速度显著加快,平均瘤重可达肿瘤单独接种组的5.1倍。在GFP表达阳性的HLSEC与BEL7402共接种的移植瘤冰冻切片中可见HLSEC的存在,并已形成瘤内新生血管。免疫组化检测发现共接种组移植瘤中的总MVD较肿瘤细胞单独接种组增加85.7%,采用抗人vWF多抗检测结果显示共接种组人源微血管平均MVD可达10.28~29.28,约占总血管数量的41%~65%。进一步将HLSEC分别与NEC、BEL7402及LS174T细胞共接种于BALB/c裸小鼠时,共接种组的瘤重是单独接种组的3.3~6.0倍。2B6单抗能使共接种人肝癌移植瘤中人源肿瘤血管密度减少65.1%,抑制肿瘤瘤重达71.8%。结论:HLSEC与人肿瘤细胞共接种小鼠后,能在移植瘤中存活、增殖,形成大量人源化的肿瘤新生血管,并在促进肿瘤快速生长中起重要作用。该小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型可为肿瘤内皮细胞相关基因及靶向治疗剂的研究提供一个新的有价值的工具。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 人源化肿瘤血管 移植瘤模型 微血管密度 小鼠
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结肠癌肿瘤自身抗体谱筛选及其应用 被引量:2
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作者 冉宇靓 胡海 +2 位作者 赵泽国 孙立新 杨治华 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期328-331,346,共5页
目的本研究拟寻找鉴定结肠癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为结肠癌诊断候选血清标志物的可能性,同时鉴定这些自身抗体的抗原为研究结肠癌发生、发展相关的基因提供线索。方法用结肠癌组织建立了库容量达5×105pfu的cDNA表达文库,... 目的本研究拟寻找鉴定结肠癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为结肠癌诊断候选血清标志物的可能性,同时鉴定这些自身抗体的抗原为研究结肠癌发生、发展相关的基因提供线索。方法用结肠癌组织建立了库容量达5×105pfu的cDNA表达文库,用结肠癌患者血清进行了文库血清学分析(SEREX),筛选获得了阳性抗原克隆,进一步分析了其中4个克隆与30例结肠癌和30例正常人血清的反应情况。结果获得的33个阳性克隆中,31个剪切成功,2个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外29个克隆与已知基因高度同源。Uracil-DNA glycosylase等4个抗原克隆与结肠癌患者和正常人血清反应阳性率分别为76%(23%)、80%(6%)、77%(0)、73%(66%)。结论本研究发现的29个结肠癌抗原可能参与了结肠癌的发生发展,可能作为结肠癌的治疗潜在分子靶点和结肠癌诊断新的候选血清学标志物。Uracil-DNA glycosylase等3个克隆与结肠癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清,其相关自身抗体可作为结肠癌诊断的血清标志物。 展开更多
关键词 结肠癌 肿瘤抗原 自身抗体 CDNA表达文库 血清标志物
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抗人血管内皮生长因子嵌合抗体在真核细胞中的高效表达 被引量:1
7
作者 冉宇靓 杨治华 +3 位作者 孙立新 遇珑 刘军 董志伟 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期282-286,共5页
目的:在中国仓鼠卵巢( Chinese hamster ovary, CHO)细胞中高效表达有活性的抗人血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor, VEGF)嵌合抗体,并探索获得最佳表达的途径。方法:采用一种新型的基因工程抗体真核高效表... 目的:在中国仓鼠卵巢( Chinese hamster ovary, CHO)细胞中高效表达有活性的抗人血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor, VEGF)嵌合抗体,并探索获得最佳表达的途径。方法:采用一种新型的基因工程抗体真核高效表达载体系统,将抗 VEGF嵌合抗体轻、重链基因导入二氢叶酸还原酶缺陷型 CHO细胞,筛选表达抗 VEGF嵌合抗体的克隆,再进行递增浓度的氨甲喋呤 (methotrexate, MTX)加压扩增表达。采用 ELISA检测所表达的嵌合抗体的生物学特性和产量。结果:采用三种不同的筛选加压扩增表达方法获得的结果有差异,其中采用每轮加压扩增表达后进行亚克隆的方法获得了高表达产量的克隆,产量可达 28μ g/ml。 ELISA结果证实所表达的抗体为特异地与 VEGF结合的、含人抗体恒定区的抗 VEGF嵌合抗体。结论:成功地在真核细胞中高效表达了有活性的抗 VEGF嵌合抗体,为下一步该嵌合抗体的临床试用奠定了重要的基础,并探索出该表达系统最佳的筛选加压扩增表达方法。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 嵌合抗体 中国仓鼠 氨甲喋呤 真核细胞 肿瘤血管生成
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卵巢癌自身抗体谱研究及应用 被引量:1
8
作者 冉宇靓 胡海 +3 位作者 杨光 遇珑 孙立新 杨治华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期243-247,共5页
目的肿瘤自身抗原可以诱导机体免疫反应,产生与肿瘤相关的自身抗体。因此,在肿瘤患者血清中存在肿瘤自身抗体谱。本研究拟寻找鉴定卵巢癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为卵巢癌诊断候选血清标志物的可能性;同时鉴定这些自身抗体的抗原... 目的肿瘤自身抗原可以诱导机体免疫反应,产生与肿瘤相关的自身抗体。因此,在肿瘤患者血清中存在肿瘤自身抗体谱。本研究拟寻找鉴定卵巢癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为卵巢癌诊断候选血清标志物的可能性;同时鉴定这些自身抗体的抗原,为卵巢癌的免疫治疗提供候选靶抗原。方法用卵巢癌组织建立了库容量达1.82×106pfu的cDNA表达文库,用卵巢癌患者血清进行了文库血清学分析(SEREX),筛选获了阳性抗原克隆,进一步分析了其中5个克隆与48例卵巢癌48例正常人血清的反应情况。结果获得的67个阳性克隆中,5个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外49个克隆与已知基因高度同源。BHLHB2等5个抗原克隆与卵巢癌患者和正常人血清反应阳性率分别为41.6%(14.6%)、29.2%(6.25%)、29.2%(12.5%)、31%(18.7%)、31%(6.2%)。联合5个克隆诊断卵巢癌的敏感性为81%,特异性75%。结论本研究发现的45个卵巢癌抗原可能作为卵巢癌诊断新的候选血清学标志物和免疫治疗潜在分子靶点。BHLHB2等5个克隆与卵巢癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清,5个克隆联合诊断卵巢癌有较好的敏感性和特异性,其相关自身抗体可作为卵巢癌诊断的血清标志物。 展开更多
关键词 卵巢癌 肿瘤抗原 自身抗体 CDNA表达文库 血清标志物
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抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与序列分析 被引量:1
9
作者 冉宇靓 杨治华 +1 位作者 王贵齐 董志伟 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期423-427,共5页
目的  获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法  从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列... 目的  获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法  从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列分析。结果  抗体的轻链可变区基因 32 1 bp,属于小鼠第 亚群 ;重链可变区基因 35 4bp,属于小鼠第 ( B)亚群。结论  所克隆的基因经核苷酸序列分析分别为抗体的轻、重链可变区基因。 展开更多
关键词 VEGF165 抗体 RT-PR 克隆 可变区基因 序列分析
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双功能抗体研究进展
10
作者 冉宇靓 杨治华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第2期140-143,共4页
双功能抗体就是双特异性的抗体,是一种非天然抗体,其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。双功能抗体的构建通常采用生物学方法和化学交联法,随着抗体工程及分子生物学技术的发展,最近几年又发展了一类新的构建双功能抗体的方法——基因... 双功能抗体就是双特异性的抗体,是一种非天然抗体,其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。双功能抗体的构建通常采用生物学方法和化学交联法,随着抗体工程及分子生物学技术的发展,最近几年又发展了一类新的构建双功能抗体的方法——基因工程法。采用基因工程法不仅能构建多种功能、多种用途的双功能抗体,而且使人源化双功能抗体的构建成为现实。双功能抗体作为一种新的二次导向系统在临床治疗中具有潜在的应用价值。本文从生物学法、化学法以及基因工程法三个方面介绍了双功能抗体构建技术的发展、现状,并进行了展望。 展开更多
关键词 双功能抗体 研究进展 化学交联 基因工程 人源化抗体 二次导向系统
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抗VEGF嵌合抗体的生物学特性分析
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作者 冉宇靓 杨治华 +3 位作者 孙立新 遇珑 刘军 董志伟 《实用癌症杂志》 2001年第2期113-116,120,共5页
目的 分析抗人血管内皮生长因子 (VEGF)嵌合抗体VcD11的各种生物学特性 ,确定其人源性、特异性 ,中和VEGF的中和活性以及体内抑制肿瘤生长转移的抗肿瘤活性。方法 采用纯化的VcD 11进行ELISA和Westermblot实验 ,分析其人源性、特异性 ... 目的 分析抗人血管内皮生长因子 (VEGF)嵌合抗体VcD11的各种生物学特性 ,确定其人源性、特异性 ,中和VEGF的中和活性以及体内抑制肿瘤生长转移的抗肿瘤活性。方法 采用纯化的VcD 11进行ELISA和Westermblot实验 ,分析其人源性、特异性 ;采用抑制由VEGF刺激引起的内皮细胞增殖实验分析VcD11的中和活性 ;采用近交系小鼠T 739的小鼠肺腺癌LA795实验动物肿瘤模型分析VcD 11的抗肿瘤活性。结果 VcD 11在ELISA和Westernblot实验中均呈阳性结果 ,并可抑制由VcD 11的刺激引起的内皮细胞增殖 ,虽未能明显抑制小鼠肺腺癌LA795原发瘤的生长 ,但可显著抑制其肺转移灶的形成和生长。结论 抗VEGF嵌合抗体VcD11具有人抗体的恒定区 ,可与人VEGF特异地结合 ,并具有良好的中和活性和抗肿瘤转移的活性。它可能在临床治疗肿瘤中有着重要。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 嵌合抗体 中和活性 抗肿瘤转移 生物学特性
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人源化改形抗体研究进展 被引量:1
12
作者 冉宇靓 《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》 1996年第4期165-168,共4页
随着鼠源单克隆抗体在临床治疗中越来越广泛的应用,降低抗体免疫原性的要求也变得越来越迫切。目前已经发展了三种降低抗体免疫原性的技术,包括嵌合抗体、人源化改形抗体和人类噬菌体抗体库技术。构建人源化改形抗体需要先选定模板并确... 随着鼠源单克隆抗体在临床治疗中越来越广泛的应用,降低抗体免疫原性的要求也变得越来越迫切。目前已经发展了三种降低抗体免疫原性的技术,包括嵌合抗体、人源化改形抗体和人类噬菌体抗体库技术。构建人源化改形抗体需要先选定模板并确定需要保留的鼠源残基,可供选择的模板有两种形式,孰优孰劣尚无定论;但在确定保留残基方面已初现规律,现已可以脱离计算机分析而直接进行。随后的工作只是根据设计构建基因并进行表达。本综述在选定模板、确定保留残基和构建基因三个方面进行了简要的论述和回顾,重点论述了如何确定需要保留的残基,并对人源化改形抗体的前景进行了展望。 展开更多
关键词 单克隆抗体 免疫原性 人源化改形抗体
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人肝癌组织中肿瘤干细胞样细胞的分离培养及鉴定 被引量:15
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作者 赵璇 冉宇靓 +5 位作者 遇珑 孙力超 胡海 李春 孙立新 杨治华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期436-441,共6页
目的:从人肝癌组织中分离培养肝癌干细胞样细胞,为进一步研究肝癌干细胞靶向治疗奠定基础。方法:采用酶消化法和以原代培养结合短暂传代培养的方法从人肝癌组织中分离出含人肝癌干细胞样细胞(human liver cancer stem-like cells,hLCSL... 目的:从人肝癌组织中分离培养肝癌干细胞样细胞,为进一步研究肝癌干细胞靶向治疗奠定基础。方法:采用酶消化法和以原代培养结合短暂传代培养的方法从人肝癌组织中分离出含人肝癌干细胞样细胞(human liver cancer stem-like cells,hLCSLCs)的连续传代细胞,分别加入肝素、白蛋白、氢化可的松以筛选适用于hLCSLCs的无血清悬浮成球培养基。以流式细胞术检测hLCSLCs和由无血清悬浮成球培养所获得的成球细胞中旁群(side population,SP)细胞、CD133及CD90等的表达,裸鼠成瘤实验检测这两种细胞的致瘤能力。结果:成功地从人肝癌组织分离获得hLCSLCs,其SP、CD133+和CD90+细胞含量分别为0.9%、0.8%和12.7%,裸鼠皮下接种2000个SP细胞的成瘤率为100%。含有肝素的无血清培养基更适于hLCSLCs的成球培养,所获成球细胞中SP、CD133+和CD90+细胞含量分别为4.6%、9.7%和48%,接种10000个成球细胞即可全部成瘤。结论:成功建立了从人肝癌组织中分离肿瘤干细胞样细胞的方法,添加肝素的无血清悬浮成球培养法可有效富集肝癌干细胞样细胞。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肿瘤干细胞 SP细胞 肝素 CD133 CD90
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microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响 被引量:12
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作者 彭亮 潘健 +4 位作者 胡海 孙力超 周转 冉宇靓 杨治华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第5期417-421,共5页
目的:研究人微小RNA-10a(microRNA-10a,miR-10a)对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823... 目的:研究人微小RNA-10a(microRNA-10a,miR-10a)对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823-P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR-10a,以脂质体包裹合成的miR-10a(25、50、100、150nmol/L)转染BGC823细胞,并设空白转染、无关序列转染对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-10a的表达。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测miR-10a对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-10a对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果:化学合成的成熟型miR-10a转染后,BGC823细胞miR-10a表达的提高以100nmol/LmiR-10a转染组最佳,较无关序列转染组提高了2.06倍。miR-10a(100nmol/L)的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响,但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用,促进率分别为(88.34±0.61)%和(56.02±3.13)%。结论:转染成熟型人miR-10a能使胃癌细胞系BGC823中miR-10a的表达提高,并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 胃癌细胞 微小RNA-10a 迁移 侵袭
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抗肝癌干细胞功能性单克隆抗体的研制 被引量:10
15
作者 孙力超 赵璇 +6 位作者 遇珑 韩璐璐 刘彤 胡海 孙立新 杨治华 冉宇靓 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期121-127,共7页
目的:研制抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞的靶向治疗提供候选抗体药物。方法:从人肝癌组织中分离人肝癌干细胞样细胞(human liver cancerstem-like cells,hLCSLCs),免疫BALB/c裸鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单抗库。应... 目的:研制抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞的靶向治疗提供候选抗体药物。方法:从人肝癌组织中分离人肝癌干细胞样细胞(human liver cancerstem-like cells,hLCSLCs),免疫BALB/c裸鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单抗库。应用细胞免疫荧光、无血清成球培养、裸鼠皮下成瘤等方法筛选、鉴定特异识别肝癌干细胞的单克隆抗体。流式细胞仪分选hLCSLCs侧群细胞(hLCSLCs side population cells,hLCSLCs-SP),无血清悬浮培养法和CCK-8法检测杂交瘤单抗对hLCSLC-SP自我更新和增殖能力的影响。结果:细胞融合后获得2964株杂交瘤克隆,在能与hLCSLCs反应的237株克隆中,有116株单抗能与hLCSLCs的细胞膜结合,其中的33株杂交瘤单抗只与hLCSLC-SP反应(阳性率为2%~5%)、不与非hLCSLC-SP反应。该33株单抗中有6株能与CD133阳性细胞有不同比例的共染,并且与无血清悬浮培养的成球细胞呈阳性反应(阳性率为3%~26%),明显高于hLCSLCs-SP。裸鼠皮下接种1×104个15D2单抗阳性的hLCSLCs,成瘤率为100%。功能性筛选实验发现,6株单抗中的4株能显著抑制hLCSLC-SP的增殖和成球生长,其抑制率分别为24%~42%和13%~50%。结论:采用自建的大容量单克隆抗体库技术,筛选获得了4株特异性识别hLCSLC-SP的功能性单抗,为肝癌干细胞的抗体靶向治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肿瘤干细胞 单克隆抗体 靶向治疗
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肝癌干细胞抗体靶向治疗的实验 被引量:10
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作者 孙力超 赵璇 +3 位作者 孙立新 遇珑 杨治华 冉宇靓 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期609-614,共6页
目的研究抗人肝癌干细胞鼠单抗15B7的生物学特征、体内外功能,探讨靶向肝癌干细胞是否能够有效抑制肝癌移植瘤复发、自发性肺转移以及延长荷瘤小鼠的生存期。方法采用双色免疫荧光、双色流式细胞技术、皮下成瘤实验,检测、鉴定15B7单克... 目的研究抗人肝癌干细胞鼠单抗15B7的生物学特征、体内外功能,探讨靶向肝癌干细胞是否能够有效抑制肝癌移植瘤复发、自发性肺转移以及延长荷瘤小鼠的生存期。方法采用双色免疫荧光、双色流式细胞技术、皮下成瘤实验,检测、鉴定15B7单克隆抗体能够识别肝癌干细胞(hepatocellularcarcinomacancer stemcells,HCC-CSC)。从人肝癌细胞系BEL7402中以流式细胞仪分选具有CD133+或ESA+表型的细胞。在此基础上采用CCK-8细胞增殖实验、侵袭实验、迁移实验等检测分析15B7单抗对CD133+表型的细胞增殖、侵袭、迁移的作用以及对细胞周期的影响。裸鼠体内治疗实验研究15B7单抗对BEL7402移植瘤生长的抑制作用。以Western blot方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果双色免疫荧光和双色流式检测显示15B7单抗能与HCC-CSC的标志物ESA、CD133共染;流式分选15B7+或ESA+或CD133+的细胞在体外无血清培养条件下有良好的成球生长能力;流式分选的15B7+细胞裸鼠皮下接种1×104个/只,2月可形成肿瘤,以上实验证明15B7单抗是抗肝癌干细胞的单抗。体外功能实验结果显示15B7单抗能够抑制CD133+细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制率分别达13.8%、15.7%和30.9%,同时还能诱导CD133+细胞发生G1期阻滞。体内治疗实验研究结果表明15B7单抗能明显抑制裸鼠肝癌移植瘤生长,抑制率可达60.5%。Western blot显示15B7单抗识别HCC-CSC表达的抗原蛋白相对分子质量约50kD。结论 15B7单抗能明显抑制裸鼠体内人肝移植瘤的生长,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有重要应用价值的候选抗体药物。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肿瘤干细胞 功能性单克隆抗体 靶向治疗
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抗人VEGF单抗的研制及对肿瘤生长及转移的抑制作用 被引量:10
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作者 杨治华 石瑜琳 +3 位作者 冉宇靓 王贵齐 刘军 董志伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期414-417,共4页
目的:为了确定人血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF) 在肿瘤生长及转移中的作用。方法:利用DNA 重组技术表达人VEGF,以其为抗原免疫Balbc 小鼠,... 目的:为了确定人血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF) 在肿瘤生长及转移中的作用。方法:利用DNA 重组技术表达人VEGF,以其为抗原免疫Balbc 小鼠,应用杂交瘤技术获得14 株稳定分泌抗VEGF单抗的杂交瘤细胞株。结果:ELISA 测定所分泌的单抗只与VEGF特异结合,与EGF、FGF、PDGF、TGFα及TNF 等均无交叉反应。以豚鼠皮肤血管通透性实验(Miles) 、鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实验(CAM) 及人脐带静脉血管内皮细胞增殖实验(HuVEC) 鉴定单抗的中和活性,其中9 株具有中和活性。在小鼠自发乳癌肺转移模型中进行的抑瘤试验显示,单抗D11 对乳癌原发瘤的抑制率达83 .4 % ,对肺转移的抑制率为719 % 。结论:具有中和活性的VEGF单抗能抑制肿瘤的生长和转移。 展开更多
关键词 VEGF 单克隆抗体 抑瘤试验 肿瘤免疫学
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SEREX技术筛选及鉴定食管癌肿瘤抗原 被引量:8
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作者 遇珑 胡海 +3 位作者 冉宇靓 彭良平 李江伟 杨治华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期100-105,共6页
背景与目的:正常细胞向癌细胞转化过程中,突变的基因或各种异常表达的蛋白可以成为肿瘤抗原诱导机体的免疫反应,因此肿瘤患者的血清中存在着与肿瘤相关的自身抗体。重组cDNA表达文库血清学分析法(serologicalanalysisofrecombinantcDNAe... 背景与目的:正常细胞向癌细胞转化过程中,突变的基因或各种异常表达的蛋白可以成为肿瘤抗原诱导机体的免疫反应,因此肿瘤患者的血清中存在着与肿瘤相关的自身抗体。重组cDNA表达文库血清学分析法(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SEREX)是利用肿瘤患者血清中的自身抗体筛选、鉴定肿瘤抗原的技术。本研究拟采用SEREX的方法寻找食管癌自身抗体的相关肿瘤抗原,鉴定与食管癌发生、发展相关的基因和免疫治疗分子靶点,并为食管癌的诊断提供候选血清标志物。方法:用食管癌组织建立库容量达1.6×106pfu的cDNA表达文库,SEREX筛选获得21个不同cDNA序列的阳性克隆,进一步使用SADA法分析其中4个抗原在10例食管癌及10例正常人血清中的反应。结果:在Homosapiensdesmin(DES)等21个阳性克隆中,4个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外17个克隆与已知基因高度同源。RibosomalproteinS4等4个抗原与食管癌患者和正常人血清反应阳性率分别为40%和0%、60%和10%、70%和20%、30%和20%。结论:RibosomalproteinS4等4个抗原普遍参与了食管癌患者的体液免疫反应,与食管癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清。本研究发现的21个食管癌抗原可作为食管癌治疗的潜在分子靶点和食管癌诊断新的候选血清学标志物。 展开更多
关键词 食管肿瘤 肿瘤抗原 SEREX CDNA表达文库
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功能差异细胞模型筛选抗肺癌功能性单克隆抗体及其抗原 被引量:6
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作者 卢燕来 冉宇靓 +4 位作者 遇珑 赵西路 刘军 胡海 杨治华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第6期501-507,共7页
目的:筛选获取抗肺癌细胞膜的功能性单克隆抗体及其靶抗原,为肺癌靶向治疗提供候选治疗剂及靶标。方法:将新鲜人肺癌组织细胞免疫BALB/c小鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单克隆抗体库。建立肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等定向功能差异细胞... 目的:筛选获取抗肺癌细胞膜的功能性单克隆抗体及其靶抗原,为肺癌靶向治疗提供候选治疗剂及靶标。方法:将新鲜人肺癌组织细胞免疫BALB/c小鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单克隆抗体库。建立肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等定向功能差异细胞模型,采用活细胞免疫荧光与功能差异模型筛选其抗原在定向功能(细胞增殖、迁移、侵袭)差异模型细胞膜上差异表达的单抗,再经体外相应功能实验筛选具有抑制作用的功能性单抗,Western blotting鉴定这些单抗的抗原,裸鼠体内抑瘤实验鉴定部分单抗对肺癌的抑制作用。结果:细胞融合后共获得2 893株杂交瘤克隆,其中与肺癌细胞膜结合反应的309株。分别建立了3种体外肺癌细胞增殖、侵袭、迁移差异模型用于筛选,筛选获得20株单抗能显著抑制肺癌细胞增殖、10株单抗能显著抑制肺癌细胞侵袭、5株单抗能显著抑制肺癌细胞迁移(P<0.05或P<0.01)。Western blotting鉴定了其中6株的抗原。选取其中2株单抗均能在裸鼠体内显著抑制肺癌移植瘤的生长(P<0.05或P<0.01)。结论:采用大容量功能性单抗库技术结合功能差异细胞模型可批量筛选获得具有体内外抑制肺癌细胞恶性生物学行为的功能性单抗,为筛选肺癌靶向治疗剂及靶标提供了一种潜在的新方法。 展开更多
关键词 肺癌 功能性单克隆抗体 抗原 功能差异细胞模型 靶向治疗
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MAGE-1基因在人食管癌中的表达及基因克隆 被引量:6
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作者 彭良平 王贵齐 +4 位作者 冉宇靓 刘海燕 孙立新 遇珑 杨治华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期97-99,共3页
目的研究 MAGE- 1基因在人食管癌中的表达 ,分析 MAGE- 1抗原能否作为食管癌的治疗性候选疫苗。方法采用 RT- PCR方法检测了 MAGE- 1基因在 30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达 ;并从食管癌组织中扩增了 MAGE-1c DNA全长序列 ,... 目的研究 MAGE- 1基因在人食管癌中的表达 ,分析 MAGE- 1抗原能否作为食管癌的治疗性候选疫苗。方法采用 RT- PCR方法检测了 MAGE- 1基因在 30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达 ;并从食管癌组织中扩增了 MAGE-1c DNA全长序列 ,经酶切后与 p ET- 30 a(+ )质粒载体连接 ,经初步酶切鉴定后 ,进行 DNA序列分析 ,获得克隆基因的核苷酸序列。结果 MAGE- 1基因在食管癌组织中的表达率为 43% (13/30 ) ,在 30例相应癌旁正常组织中未见表达 ;成功地克隆了MAGE- 1c DNA全长序列。结论由于 MAGE- 1基因在食管癌中高频率表达以及 MAGE- 1抗原具有 HL A- I类分子限制性CTL 识别表位 ,因此 ,MAGE- 展开更多
关键词 食管肿瘤 MAGE-1 反转录聚合酶链反应 基因克隆 基因疫苗治疗
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