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EBV LMP2A对胃癌细胞生物学特性的影响 被引量：3
1
作者 蒋叶 冯国开 +3 位作者 陈健宁 张娜娜 曾木圣 邵春奎 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期28-35,共8页
【目的】探讨EBV LMP2A基因对人胃癌细胞生物学特性的影响。【方法】用包含LMP2A基因的逆转录病毒载体转染人胃癌细胞株(SGC7901),QRT-PCR检测LMP2A基因的表达,CCK8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕试验和transwell检测细... 【目的】探讨EBV LMP2A基因对人胃癌细胞生物学特性的影响。【方法】用包含LMP2A基因的逆转录病毒载体转染人胃癌细胞株(SGC7901),QRT-PCR检测LMP2A基因的表达,CCK8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕试验和transwell检测细胞迁移能力;克隆形成试验检测细胞成瘤能力。【结果】LMP2A基因转染的胃癌细胞生长速度增快、凋亡减少、迁移能力增强,在平板和软琼脂中集落形成能力增强。【结论】LMP2A基因能明显增强胃癌细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 EBV LMP2A 转染 胃癌 SGC7901 凋亡 生物学特性
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基于GEPIA2和Oncomine数据库分析ITGA6基因在卵巢癌中的表达及意义 被引量：2
2
作者 欧阳振波 冯国开 +6 位作者 尹倩 李群 张敏 李凤 吴嘉雯 万子贤 张秋实 《妇产与遗传（电子版）》 2021年第1期17-22,共6页
目的基于GEPIA2数据库和Oncomine数据库分析ITGA6基因在卵巢癌中的表达及意义。方法检索GEPIA2和Oncomine数据库中关于卵巢癌的数据集,并结合文献资料进行二次综合分析。对比卵巢癌与正常对照组织间ITGA6表达的差异,并利用GEPIA2数据库... 目的基于GEPIA2数据库和Oncomine数据库分析ITGA6基因在卵巢癌中的表达及意义。方法检索GEPIA2和Oncomine数据库中关于卵巢癌的数据集,并结合文献资料进行二次综合分析。对比卵巢癌与正常对照组织间ITGA6表达的差异,并利用GEPIA2数据库进行在线生存分析。结果Oncomine数据库中共收集了359项ITGA6在不同癌症与正常组织中表达对比的研究结果,表达差异有统计学意义的有81项,其中50项呈高表达,31项呈低表达。共有7项研究涉及ITGA6在卵巢癌与正常组织中的表达对比,共包括1043个肿瘤样本。与正常对照组相比,卵巢癌中的ITGA6呈显著的高表达(P<0.001)。利用GEPIA2数据库分析发现,ITGA6与卵巢癌的预后生存(总生存和无病生存)无相关性(P>0.05)。结论尽管ITGA6的表达与卵巢癌的预后无显著相关性,但是其在卵巢癌中的显著高表达,使其可作为卵巢癌分子成像及基因药物研制的靶标。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 整合素 ITGA6基因 MRNA 生存预后 数据库
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内毒素休克小鼠肝血管靶向性结合肽的初步研究
3
作者 冯国开 邓鹏 +3 位作者 姚琦 刘锐 邓间开 姜勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期696-698,共3页
目的研究肽CLTTWAPAC与内毒素休克BALB/c小鼠肝血管的靶向性结合作用。方法构建pET14b-SBP和pET14b-SBP-CLTTWAPAC原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达纯化蛋白SBP和SBP-CLTTWAPAC。建立内毒素休克小鼠模型,将9只内毒素休克B... 目的研究肽CLTTWAPAC与内毒素休克BALB/c小鼠肝血管的靶向性结合作用。方法构建pET14b-SBP和pET14b-SBP-CLTTWAPAC原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达纯化蛋白SBP和SBP-CLTTWAPAC。建立内毒素休克小鼠模型,将9只内毒素休克BALB/c小鼠随机均分为3组:①PBS对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、PBS和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);②SBP对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);③SBP-CLT-TWAPAC组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP-CLTTWAPAC和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min)。小鼠左心室灌流后取肝匀浆称重,行噬菌体计数,计算各组肝噬菌体单位重量滴度。结果 PBS对照组与SBP对照组肝噬菌体单位重量滴度差异无统计学意义(435185±57824pfu/gvs468290±74106pfu/g,P>0.05),而SBP-CLTTWAPAC组肝噬菌体单位重量滴度(176059±98506pfu/g)显著降低,与两对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CLTTWAPAC可竞争性抑制噬菌体CLTTWAPAC与内毒素休克小鼠肝血管的结合,进一步证明CLTTWAPAC靶向性结合于内毒素休克小鼠肝血管。 展开更多
关键词 休克 脓毒性 噬菌体展示 肝脏
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α_1-抗胰蛋白酶真核表达载体的构建及其细胞内定位
4
作者 刘承武 胡水旺 +3 位作者 陈登宇 冯国开 邓鹏 姜勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期408-411,共4页
目的构建鼠α1-抗胰蛋白酶(AAT)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到AAT编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH... 目的构建鼠α1-抗胰蛋白酶(AAT)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到AAT编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建带HA标签的AAT真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为下一步深入研究AAT在细胞内的相关生物学功能提供了一个重要工具。 展开更多
关键词 Α1-抗胰蛋白酶 血凝素 细胞内定位 载体构建
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大规模噬菌体DNA测序样品制备方法的改进与应用
5
作者 刘承武 姚琦 +5 位作者 袁利华 牛茂昌 刘靖华 杨敏 冯国开 姜勇 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第46期16-18,共3页
目的优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法,提高筛选效率。方法通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定,并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较。结果PCR... 目的优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法,提高筛选效率。方法通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定,并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较。结果PCR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别为92.73%、93.75%,差异无统计学意义(P>0.05);两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测序结果一致;第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PCR扩增和电泳鉴定,发现无插入目的片段的噬菌体克隆检出率逐轮增加分别为1.04%、4.17%和22.69%(P<0.01)。结论PCR扩增含插入目的片段噬菌体DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用,值得推广。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 DNA噬菌体 聚合酶链反应 淘选
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小鼠ATP酶β亚单位真核表达载体的构建和细胞内定位研究
6
作者 史晓兰 冯国开 +1 位作者 刘爱华 姜勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期249-253,共5页
目的构建小鼠ATP酶β亚单位(ATPaseβ)真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况。方法取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列,将其连接到pMD18-T载体上,然后以pMD18-ATPase... 目的构建小鼠ATP酶β亚单位(ATPaseβ)真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况。方法取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列,将其连接到pMD18-T载体上,然后以pMD18-ATPaseβ为模板扩增得到ATPaseβ编码序列,再将其克隆到真核表达载体pcDNA3/HA上。采用脂质体转染法转染NIH 3T3细胞及293细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果 PCR、双酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3/HA-ATPaseβ构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位于细胞质,细胞膜上也有表达,而在293细胞中只表达于细胞质。结论成功构建了带有HA标签的小鼠ATPaseβ真核表达载体,该载体能够在哺乳动物NIH 3T3及293细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究ATPaseβ的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。 展开更多
关键词 腺苷三磷酸酶 Β亚基 遗传载体 蛋白定位
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纤维连接蛋白亚型胞外结构域特异性探针^(18)F-AlF-NOTA-PEG_(4)-ZD2的制备及microPET显像 被引量：1
7
作者 陈礼平 杨小春 +6 位作者 缪银杏 黄洪波 林建国 张雨 冯国开 张伟光 郁春景 《中华核医学与分子影像杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期676-680,共5页
目的制备针对纤维连接蛋白亚型胞外结构域B(EDB-FN)的特异性分子探针18F-AlF-1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸-(聚乙二醇)4-ZD2(18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2),并进行体内外理化性质评价。方法通过Al18F一步螯合标记的方法制备18F-AlF-NOTA-P... 目的制备针对纤维连接蛋白亚型胞外结构域B(EDB-FN)的特异性分子探针18F-AlF-1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸-(聚乙二醇)4-ZD2(18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2),并进行体内外理化性质评价。方法通过Al18F一步螯合标记的方法制备18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2,通过高效液相色谱(HPLC)测定其放化纯和体外稳定性,测定脂水分配系数(logP),并行细胞摄取实验[将三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞(1×106/管)分为3组(各3管),分别为阳性组、抑制组和控制对照组]。取MDA-MB-231荷瘤裸鼠(n=3;实验组)行18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2 microPET显像(30、60、90和120 min),并与阻断组(n=3;注射NOTA-PEG4-ZD2后0.5 h再注射18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2)进行对照。采用两独立样本t检验分析数据。结果成功制备18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2,优化后的放化产率为(33.8±2.1)%(未行衰变校正,n=8),放化纯>96%;37 ℃放置120 min,18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2在人血清和PBS中的放化纯均>93%,体外稳定性好;产物比活度为(11.1±3.2) GBq/μmol;logP为-1.43±0.05。注射18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2后120 min,阳性组肿瘤细胞摄取为(1.77±0.28)百分加样活度(%AR)/106个细胞,抑制组细胞摄取为(0.76±0.07)%AR/106个细胞(t=4.30,P=0.032)。荷瘤裸鼠microPET显像示,18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2主要经肝肾代谢,注射后60 min实验组肿瘤摄取为(1.94±0.21)每克组织百分注射剂量率(%ID/g),注射后90 min肿瘤/肌肉比值为3.80±0.25;阻断组注射后60 min肿瘤摄取为(0.43±0.09) %ID/g(t=3.18,P=0.006)。结论 18F-AlF-NOTA-PEG4-ZD2制备简单、标记率高、体外稳定性好,microPET显像肿瘤摄取和靶本比高,特异性良好,有较长的肿瘤滞留时间,在EDB-FN高表达的三阴性乳腺癌中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 纤连蛋白类 同位素标记 氟放射性同位素 正电子发射断层显像术 体层摄影术 X线计算机 乳腺肿瘤 肿瘤细胞 培养的 小鼠 裸
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