基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析

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作者 张世伟 吴会玲 +6 位作者 周迎春 王炳志 杨星星 杜业刚 汤璐 冯荣虎 郭继平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期271-276,共6页

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗... 建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12Å和13Å,理想距离分别为16Å和17Å。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL(以AOZ质量浓度计),相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%~85%,平均相对标准偏差为9.0%。 展开更多

关键词 3-氨基-2-恶唑烷酮 夹心酶联免疫分析 表位间隔距离 辣根过氧化物酶标记亲和素

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建筑废弃物对水体有机物和总磷的去除效果及作用方式

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作者 李文凯 朱畅 +6 位作者 门颖欣 冯兴圣 冯荣虎 刘辉 成文虎 雷宏伟 郑天龙 《环境保护科学》 CAS 2024年第2期117-123,共7页

文章通过研究加气块、混凝土、砂浆和红砖4种建筑废弃物对水体有机物和总磷(TP)的去除效果和作用方式发现:4种建筑废弃物均可实现水体中有机物和TP的去除,其中加气块(平均去除率>50%,去除量达0.33 mg/g)和红砖(平均去除率>35%,去... 文章通过研究加气块、混凝土、砂浆和红砖4种建筑废弃物对水体有机物和总磷(TP)的去除效果和作用方式发现:4种建筑废弃物均可实现水体中有机物和TP的去除,其中加气块(平均去除率>50%,去除量达0.33 mg/g)和红砖(平均去除率>35%,去除量达0.22 mg/g)具有较高的有机物去除效果,砂浆(平均去除率>70%,去除量达0.018 mg/g)和加气块(平均去除率超过45%,去除量达0.013 mg/g)具有较高的TP去除效果;4种建筑废弃物均可能通过水合有机物物理吸附的方式去除有机物,加气块、混凝土、砂浆可能通过磷酸钙类沉淀生成型化学吸附方式去除TP,红砖可能通过磷酸铝类表面络合型化学吸附方式去除TP。该研究有助于深化建筑废弃物用于水污染控制的机理认知并帮助改进其技术参数。 展开更多

关键词 建筑废弃物 有机物 磷 效果 机理

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基于免疫分析的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法研究 被引量：6

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作者 张世伟 赖心田 +5 位作者 王士峰 黄静敏 冯荣虎 谭贵良 刘垚 杨国武 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第4期145-149,共5页

为建立基于竞争酶联免疫分析（ELISA）的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法,使用2-D电泳结合MALDI-TOF/MS鉴定了杏仁的高丰度蛋白,分离纯化了杏仁40 ku prunin蛋白α链,并以此作为抗原制备了抗杏仁蛋白单克隆抗体,使用该抗体建立了检测... 为建立基于竞争酶联免疫分析（ELISA）的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法,使用2-D电泳结合MALDI-TOF/MS鉴定了杏仁的高丰度蛋白,分离纯化了杏仁40 ku prunin蛋白α链,并以此作为抗原制备了抗杏仁蛋白单克隆抗体,使用该抗体建立了检测杏仁蛋白质的竞争酶联免疫分析方法。该方法以杏仁可溶全蛋白作为标准品,IC50为19.6μg/m L,线性范围为5.0-100μg/m L（R^2=0.990）。该方法特异性良好,和其他可食种子蛋白质无交叉反应。检测植物蛋白饮料样品的检出限为0.6 mg/m L,相对标准偏差〈10%。使用巴氏杀菌、超高温瞬时灭菌和高压灭菌的蛋白质平均回收率分别为96%、92%和81%。 展开更多

关键词 杏仁 蛋白饮料 ELISA 定量

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胶体金免疫层析法快速检测配方羊奶粉中的牛β-乳球蛋白 被引量：5

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作者 王士峰 姚添淇 +3 位作者 冯荣虎 胡桂平 劳翠瑜 张世伟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期60-64,共5页

建立了一种可快速检测配方羊奶粉中牛β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析检测方法。通过杂交瘤技术制备β-lg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC_(50))为5.87μg/mL。... 建立了一种可快速检测配方羊奶粉中牛β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析检测方法。通过杂交瘤技术制备β-lg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC_(50))为5.87μg/mL。将胶体金标记的β-lg mAb包被于金标垫,β-lg和山羊抗小鼠IgG标记于硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane,NC膜)分别作为检测线(T线)和质控线(C线),开发了可检测β-lg的免疫层析试纸条。该试纸条对β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为50μg/mL,与其他基质成分均未产生有效交叉反应,对全脂山羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉(nonfat skim milk,NFSM)、脱盐乳清粉(desalted whey powder,DWP)和乳清蛋白粉(whey protein powder,WPP)的LOD值分别为5%、5%和0.1%。运用该方法对9个市售配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒一致。该方法前处理快速简单,5 min即可裸眼判定结果,可用于配方羊奶粉商品的现场快速检测。 展开更多

关键词 牛β-乳球蛋白 免疫层析 配方羊奶粉 掺杂

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高灵敏间接竞争ELISA检测羊乳样本中的牛乳成分 被引量：2

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作者 王士峰 张世伟 +3 位作者 赖心田 冯荣虎 伍聪 杨国武 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期41-43,46,共4页

建立可检测羊乳中掺伪牛乳的间接竞争ELISA方法。通过用牛β-酪蛋白免疫小鼠,制备可特异识别牛乳酪蛋白的单克隆抗体3B9。基于此抗体建立的ELISA的IC50值为92.8 ng/m L牛奶蛋白,理论最低检测限0.35 ng/m L,相对标准偏差小于12%。该方法... 建立可检测羊乳中掺伪牛乳的间接竞争ELISA方法。通过用牛β-酪蛋白免疫小鼠,制备可特异识别牛乳酪蛋白的单克隆抗体3B9。基于此抗体建立的ELISA的IC50值为92.8 ng/m L牛奶蛋白,理论最低检测限0.35 ng/m L,相对标准偏差小于12%。该方法也适用于检测高温高压处理的乳制品,加之操作简单高效,适合大规模高通量样品筛查及羊乳样本中牛奶蛋白半定量分析。 展开更多

关键词 羊乳 掺假 牛奶 单克隆抗体 酶联免疫分析 ELISA

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基于单克隆抗体的食品中乳酸链球菌素酶联免疫方法 被引量：5

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作者 张世伟 冯荣虎 +2 位作者 王士峰 赖心田 杨国武 《中国食品添加剂》 北大核心 2017年第8期166-169,共4页

建立了乳酸链球菌素的酶联免疫检测方法。以乳酸链球菌素A偶联牛血清白蛋白作为抗原制备了单克隆抗体,该抗体能等同识别乳酸链球菌素A和Z,对其他多肽类抗生素无交叉反应。所建立的乳酸链球菌素检测方法 IC_(50)为0.49μg/mL,线性范围为0... 建立了乳酸链球菌素的酶联免疫检测方法。以乳酸链球菌素A偶联牛血清白蛋白作为抗原制备了单克隆抗体,该抗体能等同识别乳酸链球菌素A和Z,对其他多肽类抗生素无交叉反应。所建立的乳酸链球菌素检测方法 IC_(50)为0.49μg/mL,线性范围为0.05μg/mL^5.4μg/mL(y=-0.12ln(x)+0.385,R^2=0.98)。该方法适用于热加工样品的检测,前处理简单,整个检测过程仅需60min,为乳酸链球菌素速测提供了有力的技术手段。 展开更多

关键词 乳酸链球菌素 单克隆抗体 酶联免疫分析 定量

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基于酶联免疫分析的大豆蛋白复合纤维鉴定方法

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作者 张世伟 王云发 +3 位作者 王士峰 姚添淇 冯荣虎 杨国武 《毛纺科技》 CAS 北大核心 2019年第7期47-51,共5页

不同蛋白来源的改性纤维成本差异较大,为区分纤维的蛋白来源,建立了一种简单、准确的大豆蛋白复合纤维鉴定方法。根据大豆蛋白现有的氨基酸序列和蛋白交联的位点设计一段特征肽半抗原,将该特征肽段偶联载体蛋白,免疫实验动物,并制备得... 不同蛋白来源的改性纤维成本差异较大,为区分纤维的蛋白来源,建立了一种简单、准确的大豆蛋白复合纤维鉴定方法。根据大豆蛋白现有的氨基酸序列和蛋白交联的位点设计一段特征肽半抗原,将该特征肽段偶联载体蛋白,免疫实验动物,并制备得到特异性单克隆抗体。将优化浓度的抗原包被于酶标版,抗体偶联辣根过氧化物酶,建立针对大豆蛋白复合纤维的酶联免疫吸附实验(ELISA)。该方法采用7M尿素作为提取剂,检出限为1.8%氨基酸含量的大豆蛋白复合纤维,检测时间不超过70 min(含前处理)。该方法对常见的纤维无非特异性识别,纤维染色不会对检测结果造成干扰。 展开更多

关键词 大豆蛋白复合纤维 酶联免疫吸附实验 纤维鉴定 特征肽段

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牛奶蛋白改性纤维免疫层析快速鉴定方法

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作者 张世伟 王云发 +3 位作者 王士峰 姚添淇 冯荣虎 杨国武 《产业用纺织品》 北大核心 2019年第4期44-49,共6页

建立了一种快速、简单、准确的牛奶蛋白改性纤维鉴定方法。使用ESI(Electron Spray Ionization)/TOF(Time of Flight)质谱对牛奶蛋白改性纤维胰蛋白酶解肽进行分析,确定了牛奶蛋白改性纤维特征肽段,使用该特征肽段制备得到特异性单克隆... 建立了一种快速、简单、准确的牛奶蛋白改性纤维鉴定方法。使用ESI(Electron Spray Ionization)/TOF(Time of Flight)质谱对牛奶蛋白改性纤维胰蛋白酶解肽进行分析,确定了牛奶蛋白改性纤维特征肽段,使用该特征肽段制备得到特异性单克隆抗体;将酪蛋白包被于T线,建立了针对牛奶蛋白改性纤维的免疫层析快速鉴定方法。该方法以7M尿素为提取剂,检出限为氨基酸质量分数为1.00%的牛奶蛋白改性纤维(相当于混纺4.00%牛奶蛋白改性纤维的纱线),检测时间不超过20min(含前处理)。该方法无需使用分析仪器,对常见的纤维没有非特异性识别,纤维的染色不会对检测结果造成干扰。 展开更多

关键词 牛奶蛋白改性纤维 免疫层析法 纤维鉴定 特征肽段

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肉眼读取-荧光微球竞争免疫层析法半定量快速检测保健食品中的西布曲明 被引量：6

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作者 谭贵良 潘子强 +3 位作者 张世伟 胡敏 冯荣虎 杨懋勋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第8期313-318,共6页

建立一种新型的西布曲明半定量检测方法。通过在检测试纸条上设置4条包被有抗原的检测线,和被测抗原反应后的剩余标记抗体与包被抗原的反应浓度可梯度降低,实现在单一试纸条构建多级灵敏度的免疫反应,从而建立基于波长470 nm手电筒作为... 建立一种新型的西布曲明半定量检测方法。通过在检测试纸条上设置4条包被有抗原的检测线,和被测抗原反应后的剩余标记抗体与包被抗原的反应浓度可梯度降低,实现在单一试纸条构建多级灵敏度的免疫反应,从而建立基于波长470 nm手电筒作为激发光源、肉眼读取结果的西布曲明荧光微球竞争免疫层析半定量检测方法。对吐温-20表面活性剂含量、标记抗体量、包被抗原质量浓度、硝酸纤维膜类型和层析反应时间等参数进行优化,通过试纸条上显色条带的数量对西布曲明进行半定量。结果显示,在优化的实验条件下,该检测方法检出限为0.05μg/mL,检测范围为0~9.00μg/mL。该方法无需使用专门的检测仪器,可在15 min内完成检测,其结果与液相色谱-串联质谱法检测结果一致。该方法操作简便、灵敏度高、结果可靠,可用于保健食品中西布曲明非法添加物的定性和半定量筛查分析。 展开更多

关键词 西布曲明 半定量 荧光微球 免疫层析 保健食品

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燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的建立

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作者 何金麟 王仍瑞 +4 位作者 张世伟 冯荣虎 范群艳 柳训才 徐敦明 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第23期7630-7636,共7页

目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结... 目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果最佳包被抗原为1:2000,抗体稀释倍数为1:5000;封闭液浓度为1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),封闭时间为150 min;竞争时间30 min;酶标二抗浓度稀释倍数为1:1000,孵育时间30 min;显色时间为10 min。建立的IC-ELISA检测方法半抑制浓度(50%inhibition concentration,IC_(50))为8.61μg/mL,线性范围为2.23~33.25μg/mL,回收率为82.7%~92.0%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSDs)为1.7%~8.9%。结论该方法灵敏度较高、特异性强,可以有效地鉴别假冒伪劣燕窝产品,具有较好的实际应用价值。 展开更多

关键词 燕窝 唾液酸糖蛋白 间接竞争酶联免疫分析法

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2019年深圳市面制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇风险监测 被引量：4

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作者 冯荣虎 劳翠瑜 +3 位作者 王珍妮 唐栋 张恒 张世伟 《食品工业》 CAS 2021年第4期501-504,共4页

评估深圳市面制品(发酵面制品、挂面、饼干、生湿面制品、调味面制品、方便面、糕点等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)污染风险。依据GB 5009.111—2016《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》,对2019年深圳... 评估深圳市面制品(发酵面制品、挂面、饼干、生湿面制品、调味面制品、方便面、糕点等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)污染风险。依据GB 5009.111—2016《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》,对2019年深圳市抽检的7类共1 513批次面制品进行检测,根据加工工艺、气候等因素对样品中DON的污染情况进行调查分析。结果表明,发酵面制品、生湿面制品及糕点中DON检出率分别为4.0%, 3.9%和5.9%,挂面、饼干、调味面制品、方便面中DON的检出率分别为51.6%, 40.5%, 33.3%和35.0%。挂面、饼干、调味面制品、方便面具有较大风险,有关部门应尽快完善覆盖相关面制品的DON限量标准,同时加大监督抽查力度。 展开更多

关键词 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 面制品 风险监测

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烯酰吗啉人工抗原的合成及其ic-ELISA方法的建立 被引量：1

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作者 冯荣虎 吴会玲 +2 位作者 王珍妮 张恒 张世伟 《食品科技》 CAS 北大核心 2022年第9期264-270,共7页

目的:旨在建立一种可定量检测果蔬中烯酰吗啉残留的间接竞争酶联免疫吸附检测(Indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。方法:首先合成烯酰吗啉半抗原,通过活泼酯法与钥孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemoc... 目的:旨在建立一种可定量检测果蔬中烯酰吗啉残留的间接竞争酶联免疫吸附检测(Indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。方法:首先合成烯酰吗啉半抗原,通过活泼酯法与钥孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)及牛血清白蛋白(Bovine albumin,BSA)偶联获得免疫抗原DMM-KLH和包被抗原DMM-BSA;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌烯酰吗啉的单克隆抗体细胞株DMM-2C4,并通过腹水制备大量抗体。建立烯酰吗啉的ic-ELISA检测方法。结果:烯酰吗啉IC_(50)为2.05 ng/mL,检测限为0.35 ng/mL,与其他真菌杀菌剂无交叉反应。在果蔬中的添加回收率为68.3%~115.5%。结论:该方法能有效应用于果蔬中烯酰吗啉的快速检测。 展开更多

关键词 烯酰吗啉 间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA) 人工抗原

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牛肉真伪鉴别荧光RPA现场快检方法建立 被引量：6

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作者 林霖 冯荣虎 +4 位作者 王坤 余灏 张世伟 赖心田 杨国武 《食品科技》 CAS 北大核心 2018年第6期322-326,共5页

目的:为实现现场快速检测牛肉及其制品中牛DNA成分,建立基于荧光RPA技术的快速检测方法。方法:在细胞色素C氧化酶亚型Ⅰ中的黄牛、水牛、牦牛特异性DNA序列上设计RPA引物以及exo探针,对引物对进行组合筛选,结合核酸快速提取方法,建立荧... 目的:为实现现场快速检测牛肉及其制品中牛DNA成分,建立基于荧光RPA技术的快速检测方法。方法:在细胞色素C氧化酶亚型Ⅰ中的黄牛、水牛、牦牛特异性DNA序列上设计RPA引物以及exo探针,对引物对进行组合筛选,结合核酸快速提取方法,建立荧光RPA快速检测方法,并对其特异性、灵敏度测试,通过方法比对实验验证其检测准确性。结果:所建立的检测方法具有很好的特异性,检测灵敏度低至1%(w/w),并且与标准方法检测结果一致。结论:研究成功建立了牛肉真伪鉴别荧光RPA现场快速检测方法。 展开更多

关键词 牛肉 真伪鉴别 RPA 现场快检

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河鲀毒素胶体金免疫层析快速定量方法 被引量：4

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作者 张世伟 王士峰 +3 位作者 姚添淇 冯荣虎 杨国武 赖心田 《食品科技》 CAS 北大核心 2017年第7期313-317,共5页

建立了河鲀毒素的胶体金免疫层析检测方法。所建立的河鲀毒素检测方法IC_(50)为48 ng/m L,线性范围为(10~160)ng/m L(y=-0.20lnx+1.23,R^2=0.98)。建立了基于磷酸盐缓冲液一步提取的河鲀毒素快速前处理方法,检测河鲀样本的最低检出限为2... 建立了河鲀毒素的胶体金免疫层析检测方法。所建立的河鲀毒素检测方法IC_(50)为48 ng/m L,线性范围为(10~160)ng/m L(y=-0.20lnx+1.23,R^2=0.98)。建立了基于磷酸盐缓冲液一步提取的河鲀毒素快速前处理方法,检测河鲀样本的最低检出限为20μg/kg,平均相对标准偏差<20%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需10 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前快检提供了有力的技术手段。 展开更多

关键词 河鲀毒素 胶体金 免疫层析

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天然兔源噬菌体单链抗体库的构建与鉴定 被引量：2

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作者 黄爱玲 冯荣虎 +1 位作者 吕暾 李森 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期31-34,共4页

目的:构建天然兔源噬菌体单链抗体库。方法:采用RT-PCR法从未免疫的兔子脾脏中克隆得到抗体重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,重叠PCR将VH和VL拼接成scFv片段,将scFv连接到噬菌粒pComb3XSS上,电转入XL1-Blue菌中,得到单链抗体库,并... 目的:构建天然兔源噬菌体单链抗体库。方法:采用RT-PCR法从未免疫的兔子脾脏中克隆得到抗体重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,重叠PCR将VH和VL拼接成scFv片段,将scFv连接到噬菌粒pComb3XSS上,电转入XL1-Blue菌中,得到单链抗体库,并用此抗体库筛选抗肌酸激酶抗体。结果:构建了容量为4×108,基因重组率95%的单链抗体库,DNA指纹图谱显示抗体库多样性良好。以肌酸激酶为抗原,从该库中筛到3株抗肌酸激酶的抗体。结论:分析表明构建的天然兔源单链抗体库质量良好,可用于快速筛选、制备多种单链抗体。 展开更多

关键词 噬菌体展示 单链抗体 兔源抗体库

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间接竞争ELISA检测核桃制品中核桃蛋白含量 被引量：1

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作者 赖心田 冯荣虎 +2 位作者 张世伟 王士峰 杨国武 《食品工业》 CAS 北大核心 2016年第4期291-294,共4页

通过核桃蛋白组分分析,确定核桃丰度蛋白。以其作为抗原免疫小鼠,制备可特异性识别核桃蛋白的单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法。筛选出一株能稳定分泌抗核桃蛋白的杂交瘤细胞株HT-1,对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建... 通过核桃蛋白组分分析,确定核桃丰度蛋白。以其作为抗原免疫小鼠,制备可特异性识别核桃蛋白的单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法。筛选出一株能稳定分泌抗核桃蛋白的杂交瘤细胞株HT-1,对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测核桃蛋白的间接竞争ELISA方法,核桃蛋白的检测线性范围在4.664.2μg/mL,IC50为17.2μg/mL,最低检测限为0.67μg/mL。抗体特异性较好,与其他的植物蛋白没有交叉反应。该方法适用于检测核桃制品中的核桃蛋白含量。 展开更多

关键词 核桃 核桃蛋白 间接竞争法ELISA

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