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鹦鹉热衣原体感染的诊断与防控
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作者 凌洪权 陈忠琼 +3 位作者 谢建华 李泰 黎朝燕 骆璐 《四川畜牧兽医》 2024年第1期48-48,共1页
鹦鹉热是鹦鹉热衣原体(CP)引起的一种人兽共患病。患病禽(鸟)精神萎靡、厌食、羽毛松乱、眼鼻流分泌物、腹泻和严重脱水,临床表现为呼吸困难、发热,有结膜炎、关节炎,死亡等特征。人亦可感染而出现肺炎、败血症和流产等。
关键词 鹦鹉热衣原体 人兽共患病 呼吸困难 鼻流 结膜炎 关节炎 败血症 诊断与防控
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四种口蹄疫分型试剂盒的检测效果比对
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作者 凌洪权 骆璐 +3 位作者 黎朝燕 陈忠琼 蒋佳利 谢建华 《四川畜牧兽医》 2024年第6期27-28,共2页
目前市场上销售的口蹄疫O型和A型双重荧光RT-PCR分型试剂盒比较多,为了找到一种效果理想的分型试剂盒,使用4个厂家(分别用A、B、C、D代替)的试剂盒对6份国家口蹄疫比对盲样(编号分别为S1、S2、S3、S4、S5、S6)进行检测效果比对。结果发... 目前市场上销售的口蹄疫O型和A型双重荧光RT-PCR分型试剂盒比较多,为了找到一种效果理想的分型试剂盒,使用4个厂家(分别用A、B、C、D代替)的试剂盒对6份国家口蹄疫比对盲样(编号分别为S1、S2、S3、S4、S5、S6)进行检测效果比对。结果发现,不同厂家试剂盒的检测效果各不相同,且差别较大,D厂家试剂盒的检测结果与比对盲样的标准值完全吻合,A、B、C 3个厂家试剂盒的检测结果与比对盲样的标准值有不同程度的差异。 展开更多
关键词 口蹄疫 分型试剂盒 盲样 比对
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核酸提取试剂盒对饲料中牛羊源性成分检测的影响
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作者 李泰 朱英才 +5 位作者 骆璐 彭强 凌洪权 廖星杰 王钦 张承双 《粮食与饲料工业》 CAS 2024年第1期70-71,共2页
实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实... 实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实验比对,对此进行了阐释。 展开更多
关键词 荧光PCR法 牛羊源性成分 检测分析 核酸提取试剂盒
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样本的病毒核酸浓度与其荧光PCR反应检测Ct值关系分析
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作者 李泰 凌洪权 +5 位作者 谢建华 骆璐 张超 蒋佳利 陈忠琼 蔺露 《山东畜牧兽医》 2024年第10期16-17,共2页
为基层兽医实验室制备盲样时,发现特定浓度的核酸通过倍比稀释,其荧光PCR反应的Ct值显示一定的规律性,即存在两个核酸浓度区间,分别是初始浓度与某个浓度之间(区间1)、该浓度与终末稀释浓度(区间2),且区间2内一部分核酸的Ct值比区间1的C... 为基层兽医实验室制备盲样时,发现特定浓度的核酸通过倍比稀释,其荧光PCR反应的Ct值显示一定的规律性,即存在两个核酸浓度区间,分别是初始浓度与某个浓度之间(区间1)、该浓度与终末稀释浓度(区间2),且区间2内一部分核酸的Ct值比区间1的Ct值低;两个区间内,随着核酸浓度的降低,检测到的Ct值增大。这表明荧光PCR反应检测的Ct值与核酸浓度密切相关,同时也提示在制备病毒滴度低的样本时,需谨慎处理。本研究为增强核酸检测灵敏度提供参考。 展开更多
关键词 病毒核酸 浓度 荧光PCR CT值
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Sharpie marker在试管上标记对荧光PCR检测Ct值的影响
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作者 李泰 王钦 +4 位作者 凌洪权 陈忠琼 蔺露 廖星杰 张承双 《山东畜牧兽医》 2024年第7期20-20,24,共2页
为了探明Sharpie marker在试管上标记对荧光PCR检测Ct值的影响,本试验模拟现实工作中可能遇到的各类情形,从Sharpie marker标记试管的各种方式,以对照组、全黑管、管壁全黑管、管壁和盖半黑管、管壁半黑管、盖半黑管和盖全黑管等为对象... 为了探明Sharpie marker在试管上标记对荧光PCR检测Ct值的影响,本试验模拟现实工作中可能遇到的各类情形,从Sharpie marker标记试管的各种方式,以对照组、全黑管、管壁全黑管、管壁和盖半黑管、管壁半黑管、盖半黑管和盖全黑管等为对象,通过荧光PCR检测,比较分析Ct值。结果显示,全黑管和盖全黑管对Ct值的影响最大,管壁和盖半黑管与盖半黑管对Ct值的影响较大,而管壁全黑管和管壁半黑管对反应Ct值没有影响。本研究为正确使用Sharpie marker,确保荧光PCR检测结果的准确提供了参考。 展开更多
关键词 Sharpie marker 荧光PCR CT值
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布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 廖倩 向梦玲 +4 位作者 凌洪权 董春霞 骆璐 吴胜昔 曾政 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 北大核心 2024年第8期291-297,共7页
制备布鲁氏菌LPS特异性单克隆抗体,为建立布鲁氏菌病血清学及新型免疫传感器检测方法提供有效试剂。将天然提取的布鲁氏菌LPS抗原使用长程免疫法腹腔注射BALB/c小鼠,经过5次常规免疫及1次加强免疫后,取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2... 制备布鲁氏菌LPS特异性单克隆抗体,为建立布鲁氏菌病血清学及新型免疫传感器检测方法提供有效试剂。将天然提取的布鲁氏菌LPS抗原使用长程免疫法腹腔注射BALB/c小鼠,经过5次常规免疫及1次加强免疫后,取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,使用间接酶联免疫吸附试验(iELISA)对杂交瘤细胞进行筛选,并对纯化后的单克隆抗体进行生物特性鉴定。结果表明:筛选出3株稳定分泌单抗的阳性细胞株,分别命名为2-4A、3-4E、5-10B;经过亚型鉴定,3-8E、2-4A为IgG1亚型,5-10B为IgG2b亚型。将5-10B细胞株使用腹腔注射法制备腹水,并通过Protein A柱纯化腹水。纯化后单抗达到了电泳纯,BCA法测定其浓度最高可达1.431 8 mg·mL^(-1), ELISA效价达到1∶512 000,间接ELISA结果显示制备的抗体具有良好的特异性。研究制备的高特异性、高活性的单克隆抗体可为后续布鲁氏菌病特异性诊断技术研究提供参考。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 LPS 细胞融合 单克隆抗体 生物特性鉴定
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赤大袋鼠等孢球虫病的诊疗与防控
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作者 喻元 骆璐 +3 位作者 周俊 王晓佳 凌洪权 谢建华 《野生动物学报》 北大核心 2023年第2期434-437,共4页
重庆动物园从某地引进6只赤大袋鼠(Macropus rufus),入园发生等孢球虫(Isospora)感染,发病率100%(6/6),死亡率16.7%(1/6),经正确诊断及对症用药后取得了良好的治疗效果。之后通过环境消毒和口服用药等防控措施,经近1年的观察,未复发,对... 重庆动物园从某地引进6只赤大袋鼠(Macropus rufus),入园发生等孢球虫(Isospora)感染,发病率100%(6/6),死亡率16.7%(1/6),经正确诊断及对症用药后取得了良好的治疗效果。之后通过环境消毒和口服用药等防控措施,经近1年的观察,未复发,对该诊疗和防控过程进行总结,以供同行参考。 展开更多
关键词 赤大袋鼠 等孢球虫病 诊疗 防控
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弓形虫表面主要抗原1(SAG1)蛋白的原核表达与鉴定
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作者 代琴 骆璐 +5 位作者 董春霞 凌洪权 吴胜昔 曾政 秦萍 韦广苗 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期69-73,128,共6页
为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表... 为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表达质粒pET32a(+)-SAG1,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)对重组菌进行诱导,表达重组蛋白,通过优化诱导条件实现对重组蛋白的大量表达,使用NGC^(TM)层析纯化系统纯化重组蛋白,并分别以抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清作为一抗、羊抗鼠IgG-HRP和HRP-兔抗犬作为二抗对重组蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明:重组表达质粒pET32a(+)-SAG1经双酶切分别在5 900 bp和1 020 bp处出现1条载体条带和1条目的基因条带,与预期结果相符;重组蛋白大小为55 ku且以包涵体的形式成功表达,当诱导条件为25℃、0.4 mmol/L IPTG诱导8 h时重组蛋白的表达量最高;纯化后的重组蛋白条带单一,纯度较高,3个样品质量浓度分别为0.409 5,0.368 5,0.451 9 mg/mL;表达的重组蛋白与抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清均能特异性结合。说明在大肠杆菌中成功表达了弓形虫SAG1重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度和质量浓度较高,且具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 弓形虫 SAG1 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
原文传递
狂犬病病毒核衣壳蛋白的原核表达与鉴定
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作者 谷志鹏 向梦玲 +5 位作者 凌洪权 骆璐 吴胜昔 董春霞 冉皑 郭宇 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 北大核心 2023年第2期344-349,共6页
为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的RV N基因序列(登录号为1489853),在不改变RV N蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质... 为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的RV N基因序列(登录号为1489853),在不改变RV N蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a(+)/RV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,利用His-tag镍柱进行重组RV N蛋白的纯化,对纯化后的RV N蛋白进行SDS-PAGE鉴定及Western blot分析。结果表明:重组质粒双酶切后在1359 bp处有目的条带,经测序后与其所对应的已知基因序列完全相符,当重组菌在IPTG浓度0.1mmol/L、30℃诱导6 h,RV N蛋白表达量最高;经过镍柱纯化获得了RV N重组蛋白;BCA法测得重组RV N蛋白浓度达1.783 mg/mL;在51KD处可见明显的蛋白印迹,与预期目的条带相符;使用该方法成功在大肠杆菌系统高效表达了RV N蛋白,为后续狂犬病的检测与新型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 N蛋白 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
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浅谈重庆市省级兽医实验室的规范化管理与体会 被引量:6
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作者 凌洪权 黎朝燕 +2 位作者 曾政 杨泽林 熊仲良 《中国动物检疫》 CAS 2013年第2期26-29,共4页
兽医实验室是指一切从事兽医病原微生物、寄生虫研究与使用,以及兽医临床诊疗和疫病检疫监测的实验室。兽医系统实验室是指隶属于各级兽医主管部门,承担动物疫病检测、诊断和监测等任务的兽医实验室,包括国家级、区域级、省级、地(... 兽医实验室是指一切从事兽医病原微生物、寄生虫研究与使用,以及兽医临床诊疗和疫病检疫监测的实验室。兽医系统实验室是指隶属于各级兽医主管部门,承担动物疫病检测、诊断和监测等任务的兽医实验室,包括国家级、区域级、省级、地(市)级和县级兽医实验室。 展开更多
关键词 兽医实验室 规范化管理 省级 重庆市 检疫监测 疫病检测 病原微生物 兽医临床
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荧光PCR诊断猪流行性腹泻病毒与猪轮状病毒混合感染病例 被引量:3
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作者 凌洪权 黎朝燕 +10 位作者 曾政 杨泽林 梁望旺 孙燕 骆璐 谢建华 蔺露 董春霞 黄恒 钟小艳 周琼 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第8期83-84,共2页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRV)足3种引起猪病毒性腹泻的重要病原。该3种病毒既可单独感染,也可混合感染,
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪轮状病毒 感染病例 混合感染 PCR诊断 猪传染性胃肠炎病毒 荧光 病毒性腹泻
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重庆市2016年小反刍兽疫流行病学调查 被引量:3
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作者 凌洪权 黎朝燕 +5 位作者 陈忠琼 李泰 孙燕 黄恒 董春霞 史小文 《山东畜牧兽医》 2017年第5期41-42,共2页
2016年5~6月和11~12月,重庆市对辖区内10个区县进行了小反刍兽疫流行病学调查,血清抗体监测采用阻断ELISA的方法,拭子病毒监测采用荧光RT-PCR的方法。上半年,监测血清样品1001份,结果抗体阳性813份,抗体阳性率为81.22%;监测拭子样品1001... 2016年5~6月和11~12月,重庆市对辖区内10个区县进行了小反刍兽疫流行病学调查,血清抗体监测采用阻断ELISA的方法,拭子病毒监测采用荧光RT-PCR的方法。上半年,监测血清样品1001份,结果抗体阳性813份,抗体阳性率为81.22%;监测拭子样品1001份,结果阳性0份,全为阴性。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 血清样品 流行病学调查 拭子 抗体阳性率 抗体检测 血清抗体 核酸提取试剂盒 高度易感 阳性数
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小反刍兽疫荧光PCR诊断 被引量:2
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作者 凌洪权 黎朝燕 +4 位作者 黄恒 李泰 陈忠琼 董春霞 姚璐 《四川畜牧兽医》 2017年第2期48-48,共1页
小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的发生于小反刍动物的一种急性、烈性、高度接触性传染病,主要在绵羊和山羊中流行,其对幼龄动物的致死率可达50%~80%。一步法荧光定量RT—PCR方法已用于对本病的检测。
关键词 小反刍兽疫 荧光定量 PCR诊断 接触性传染病 小反刍动物 PCR方法 幼龄动物 致死率
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一起禽霍乱的诊断与防治
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作者 凌洪权 谢建华 +7 位作者 黎朝燕 王棋 陈忠琼 蒋佳利 欧阳吴莉 刁浩洋 骆璐 曾政 《畜牧业环境》 2022年第7期89-90,共2页
某养鸡场山坡上圈养肉鸡3000只,养殖场主2021年10月13日送5只死鸡到我单位诊断。经解剖后取病料进行细菌分离培养和镜检,禽霍乱PCR诊断,鸡新城疫病毒和禽流感病毒二重荧光RT-PCR诊断,结果为革兰氏阴性两极着色的红色小杆菌,多杀性巴氏... 某养鸡场山坡上圈养肉鸡3000只,养殖场主2021年10月13日送5只死鸡到我单位诊断。经解剖后取病料进行细菌分离培养和镜检,禽霍乱PCR诊断,鸡新城疫病毒和禽流感病毒二重荧光RT-PCR诊断,结果为革兰氏阴性两极着色的红色小杆菌,多杀性巴氏杆菌核酸呈阳性,鸡新城疫病毒和禽流感病毒核酸呈阴性。建议场主采取隔离、场地消毒和抗生素治疗等措施,病情逐渐得到控制。 展开更多
关键词 禽霍乱 诊断 防治
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猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟混合感染的病例诊断
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作者 凌洪权 黎朝燕 +5 位作者 董春霞 陈忠琼 李泰 谢建华 骆璐 蒋佳利 《畜牧业环境》 2020年第13期91-92,共2页
为了弄清重庆市某猪场在购买仔猪途中出现全身潮红、发热、呼吸困难、死亡等病症的原因,我们对发病猪场进行了现场调查、病例剖检,并采集了4头仔猪的病料组织进行实验室诊断。结果表明,系在运输途中由于应急原因造成的仔猪抵抗力下降引... 为了弄清重庆市某猪场在购买仔猪途中出现全身潮红、发热、呼吸困难、死亡等病症的原因,我们对发病猪场进行了现场调查、病例剖检,并采集了4头仔猪的病料组织进行实验室诊断。结果表明,系在运输途中由于应急原因造成的仔猪抵抗力下降引发的猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染所致,对仔猪使用了抗生素辅助治疗和疫苗紧急接种,最终疫情得以控制。 展开更多
关键词 实验室诊断 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒
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口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒的筛选
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作者 凌洪权 黎朝燕 +5 位作者 杨泽林 谢建华 董春霞 黄恒 钟小艳 吴昌义 《畜牧兽医科学(电子版)》 2018年第4期10-11,共2页
为了及时、准确地诊断口蹄疫疫情,避免误诊而造成重大的经济损失,我们对5个不同生物技术有限公司(分别以A、B、C、D、E代替)生产的口蹄疫病毒通用型、O型、A型、Asia1型荧光RT-PCR检测试剂盒进行了试验对比,最终从通用型和3个分型试剂... 为了及时、准确地诊断口蹄疫疫情,避免误诊而造成重大的经济损失,我们对5个不同生物技术有限公司(分别以A、B、C、D、E代替)生产的口蹄疫病毒通用型、O型、A型、Asia1型荧光RT-PCR检测试剂盒进行了试验对比,最终从通用型和3个分型试剂盒的灵敏性、交叉反应、反应体系、反应条件、反应速度、操作简便性等方面筛选出了B公司的试剂盒相对优于其他4个公司的试剂盒。 展开更多
关键词 口蹄疫 试剂盒 筛选
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一起蛋鸡禽白血病的荧光RT-PCR诊断
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作者 凌洪权 黎朝燕 +3 位作者 陈忠琼 史小文 欧阳吴莉 董春霞 《山东畜牧兽医》 2017年第6期12-12,共1页
2017年1月,重庆市动物防控中心实验室收到某蛋鸡场送来的10份蛋鸡肝脏、脾脏等病料,根据蛋鸡的临床症状和病理剖解变化,采用荧光RT-PCR方法进行了禽白血病的检测。结果表明,10份样品全为禽白血病病毒阳性。
关键词 蛋鸡 禽白血病 荧光RT-PCR 诊断
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我国部分地区牛支原体肺炎和关节炎的病原体诊断 被引量:71
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作者 冉智光 谢建华 +6 位作者 骆璐 杨泽林 凌洪权 苏承忠 熊仲良 范伟兴 米自由 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期40-43,共4页
重庆等4省市从外省引进的肉牛群发生以严重肺炎和关节炎为主要表现的疾病。该病的病变主要集中于肺脏,其组织学变化主要是间质增生,纤维素渗出,干酪样坏死,淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞浸润。PCR检测病牛肺脏显示牛支原体阳性,而... 重庆等4省市从外省引进的肉牛群发生以严重肺炎和关节炎为主要表现的疾病。该病的病变主要集中于肺脏,其组织学变化主要是间质增生,纤维素渗出,干酪样坏死,淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞浸润。PCR检测病牛肺脏显示牛支原体阳性,而丝状支原体丝状亚种、牛分支杆菌和多杀性巴氏杆菌为阴性。从肺等组织中分离到牛支原体以及大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌和烟曲霉,没有分离到巴氏杆菌。结果显示本病是以牛支原体感染为主引起的牛支原体肺炎和关节炎,长途运输等应激因素是该病突发的重要诱因,其他细菌和/或真菌继发感染加重了病情。 展开更多
关键词 牛支原体 肺炎 关节炎 PCR 细菌分离
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斑点肉鸭小肠液中消化酶活性变化探讨 被引量:7
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作者 黄庆洲 陈平 +3 位作者 蒋晓斌 王才福 凌洪权 朱三林 《畜牧与兽医》 北大核心 2002年第10期12-14,共3页
以 0~45日龄斑点肉鸭为研究对象 ,测试 5 ,1 5 ,2 5 ,35 ,45日龄肉鸭小肠液中淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性随年龄的变化趋势。结果表明 :淀粉酶、蛋白酶活性随日龄增大而升高 ,且 5~ 1 5日龄段显著升高 (P <0 0 5) ;脂肪酶活性在 5... 以 0~45日龄斑点肉鸭为研究对象 ,测试 5 ,1 5 ,2 5 ,35 ,45日龄肉鸭小肠液中淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性随年龄的变化趋势。结果表明 :淀粉酶、蛋白酶活性随日龄增大而升高 ,且 5~ 1 5日龄段显著升高 (P <0 0 5) ;脂肪酶活性在 5~ 1 5日龄段显著降低 ,1 5~ 45日龄段一直维持在较低水平。 展开更多
关键词 斑点肉鸭 小肠液 消化酶 活性变化 淀粉酶 脂肪酶 蛋白酶
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重庆地区猪圆环病毒2型的分离鉴定与序列分析 被引量:5
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作者 梁望旺 曾政 +5 位作者 吴胜昔 凌洪权 蔺露 孙燕 候权书 向帆 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期55-59,共5页
为了解2007年以来重庆地区猪圆环病毒2型(PCV-2)的流行情况,对2007年—2013年重庆地区送检样品进行了PCV-2荧光定量PCR检测,并对阳性样品进行了病毒的分离鉴定,成功分离到12株PCV-2,对分离的12株PCV-2进行了全基因组克隆与序列分析。... 为了解2007年以来重庆地区猪圆环病毒2型(PCV-2)的流行情况,对2007年—2013年重庆地区送检样品进行了PCV-2荧光定量PCR检测,并对阳性样品进行了病毒的分离鉴定,成功分离到12株PCV-2,对分离的12株PCV-2进行了全基因组克隆与序列分析。结果显示,所分离的PCV-2均处于PCV-2b分支,基因组全长均为1 767bp,与PCV-2b参考毒株(AF055394)的核苷酸同源性为96.2%-99.7%,与疫苗SH株的核苷酸同源性为96.0%-98.4%,而与疫苗LG株同源性仅为95.5%-95.8%。研究结果为PCV-2的研究及其感染的防控奠定了基础,也为重庆地区PCV-2疫苗毒株的选择提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 分离 鉴定 序列分析
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