微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体检测ELISA方法的建立 被引量：1

1

作者 刁玉梅 宫鹏涛 +7 位作者 李巍 苏利波 黄祥盛 高华义 李赫 胡进平 李建华 张西臣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期537-540,共4页

为建立快捷的含病毒隐孢子虫的检测方法,本研究利用已构建的微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白重组表达质粒表达并纯化重组蛋白,建立以该重组衣壳蛋白为包被抗原检测抗体的间接ELISA检测方法。经优化后间接ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为0.25... 为建立快捷的含病毒隐孢子虫的检测方法,本研究利用已构建的微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白重组表达质粒表达并纯化重组蛋白,建立以该重组衣壳蛋白为包被抗原检测抗体的间接ELISA检测方法。经优化后间接ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为0.25μg/孔,被检血清稀释度为1∶200,酶标二抗稀释度为1∶2000,封闭液为含5%脱脂奶粉的PBST溶液。该方法检测安氏隐孢子虫阳性血清,柔嫩艾美尔球虫阳性血清,蓝氏贾第虫阳性血清,弓形虫阳性血清与微小隐孢子虫阳性结果均为阴性。该方法灵敏度为1∶1600,特异性较强且具可重复性,可用于含病毒隐孢子虫的抗体检测及流行病学调查。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 dsRNA病毒 衣壳蛋白 间接ELISA

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细胞与角膜移植免疫耐受 被引量：1

2

作者 刁玉梅 李兵 《国际眼科杂志》 CAS 2010年第9期1716-1718,共3页

角膜移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的主要原因。免疫耐受是指抗原特异性的免疫无应答。诱导受体产生针对移植物的免疫耐受是彻底克服移植排斥反应的根本方法。角膜移植排斥反应是一个复杂且有多因素参与的过程。多种免疫细胞在抑... 角膜移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的主要原因。免疫耐受是指抗原特异性的免疫无应答。诱导受体产生针对移植物的免疫耐受是彻底克服移植排斥反应的根本方法。角膜移植排斥反应是一个复杂且有多因素参与的过程。多种免疫细胞在抑制角膜移植术后排斥反应、诱导免疫耐受中,发挥着关键作用。因此,我们就近几年通过细胞诱导角膜移植免疫耐受的机制作一综述。 展开更多

关键词 角膜移植 免疫耐受 排斥反应 细胞

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微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定

3

作者 刁玉梅 宫鹏涛 +4 位作者 李巍 苏利波 黄祥盛 李建华 张西臣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期29-32,共4页

目的对微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白S-dsRNA基因进行克隆、表达和反应原性分析。方法以微小隐孢子虫总RNA逆转录的cDNA为模板,克隆S-dsRNA基因,并转化至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET-28a(+)-S,转入大肠埃希菌BL21(DE3... 目的对微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白S-dsRNA基因进行克隆、表达和反应原性分析。方法以微小隐孢子虫总RNA逆转录的cDNA为模板,克隆S-dsRNA基因,并转化至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET-28a(+)-S,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白与鼠抗微小隐孢子虫阳性血清的反应原性。结果 PCR和双酶切鉴定表明,重组质粒pET-28a(+)-S构建成功。SDS-PAGE结果显示,37℃下经1mmol/L IPTG诱导4h,重组蛋白表达量最大。重组蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为37000,与预期大小一致,重组蛋白约占蛋白总量的72.6%。Western blotting分析结果表明,重组蛋白能识别抗微小隐孢子虫阳性鼠血清。结论微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白S-dsRNA基因表达成功,重组蛋白具有反应原性。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 dsRNA病毒 S-dsRNA 原核表达

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弓形虫RH株表面抗原SAG3去信号肽基因的蛋白原核表达及鉴定 被引量：5

4

作者 马亮 刁玉梅 +3 位作者 任保彦 宫鹏涛 李建华 张西臣 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期104-108,共5页

根据GenBank中弓形虫表面抗原SAG3基因序列,以弓形虫总RNA反转录的cDNA为模板,扩增出SAG3去除信号肽基因并进行原核表达。将重组pET-28a(+)-SAG3阳性表达质粒转入大肠杆菌BL(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blottin... 根据GenBank中弓形虫表面抗原SAG3基因序列,以弓形虫总RNA反转录的cDNA为模板,扩增出SAG3去除信号肽基因并进行原核表达。将重组pET-28a(+)-SAG3阳性表达质粒转入大肠杆菌BL(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果表明:成功扩增了不含信号肽的SAG3基因,构建的原核表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,能够与鼠抗弓形虫阳性血清发生特异性反应,去信号肽的SAG蛋白具有反应原性。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 SAG3基因 原核表达

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IL-12及Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用 被引量：1

5

作者 李雪 刁玉梅 李兵 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第5期418-421,共4页

目的探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞(dendriticcell,DC)诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用。方法将雄性SD受体大鼠随机分为3组,每组14只,分别为对照组(术前3d尾静脉注射PBS0.1mL)、6... 目的探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞(dendriticcell,DC)诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用。方法将雄性SD受体大鼠随机分为3组,每组14只,分别为对照组(术前3d尾静脉注射PBS0.1mL)、6-DC组(术前3d尾静脉注射第6天的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)及IL-10-DC组(术前3d尾静脉注射IL-10修饰的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)。以雌性Wistar大鼠为供体建立穿透性角膜移植模型。术后对受体大鼠角膜植片进行临床观察,记录角膜植片存活时间;移植术后第14天检测术眼角膜中细胞因子IL-12、Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-10mRNA的表达。结果对照组、6-DC组及IL-10-DC组角膜植片的存活时间分别为(10.63±2.00)d、(18.88±1.36)d及(24.50±2.07)d。6-DC组、IL-10-DC组与对照组比较,角膜植片存活时间明显延长(均为P<0.01);IL-10-DC组角膜植片存活时间显著长于6-DC组(P<0.01)。术后第14天,对照组角膜组织IL-12(0.80±0.00)及Th1细胞因子IL-2(1.03±0.06)、IFN-γ(0.97±0.03)的mRNA表达水平最高,而Th2细胞因子IL-4(0.13±0.00)、IL-10(0.34±0.02)的mRNA表达最低;IL-10-DC组IL-12(0.39±0.01)及Th1细胞因子IL-2(0.61±0.01)、IFN-γ(0.43±0.02)的mRNA表达水平最低,Th2细胞因子IL-4(0.19±0.00)、IL-10(0.88±0.01)的mRNA表达最高,三组比较差异具有统计学意义。结论 IL-10修饰的树突状细胞能诱导大鼠角膜移植免疫耐受;IL-12、Th1/Th2细胞因子在角膜移植免疫中起重要作用,IL-12mRNA低表达及Th1/Th2细胞因子偏离是IL-10修饰的树突状细胞诱导角膜移植免疫耐受机制之一。 展开更多

关键词 白细胞介素-10 穿透性角膜移植术 树突状细胞 细胞因子 免疫耐受

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微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定

6

作者 任保彦 陈玉兰 +7 位作者 宫鹏涛 李巍 李建华 苏利波 李赫 杨举 刁玉梅 张西臣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1140-1144,共5页

本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,I... 本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。用原核表达蛋白免疫小鼠,制备抗重组蛋白多抗,对蛋白进行定位。结果表明成功扩增出CP21基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25 ku的融合蛋白,Western blotting证明表达的CP21融合蛋白能与抗C.parvum多克隆抗体产生特异性反应。免疫荧光结果表明:CP21基因在子孢子和卵囊期均表达,且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面。CP21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白。研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 CP21 黏附相关蛋白 原核表达 免疫荧光定位

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五株隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析

7

作者 于师宇 李巍 +5 位作者 宫鹏涛 张西臣 李建华 李春雨 苏利波 刁玉梅 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2010年第4期193-197,共5页

设计Nested PCR引物扩增牛源微小隐孢子虫Cryptospordium parvum、羊源微小隐孢子虫C. parvum、牛源安氏隐孢子虫C. andersoni、鸡源贝氏隐孢子虫C. baileyi及猪源隐孢子虫C. suis 18S rRNA基因突变区,PCR产物经克隆测序,其片段大小分别... 设计Nested PCR引物扩增牛源微小隐孢子虫Cryptospordium parvum、羊源微小隐孢子虫C. parvum、牛源安氏隐孢子虫C. andersoni、鸡源贝氏隐孢子虫C. baileyi及猪源隐孢子虫C. suis 18S rRNA基因突变区,PCR产物经克隆测序,其片段大小分别为212、213、213、213和210 bp.将测得的序列用DNAStar软件分析并与NCBI数据库中相同与相近种株序列进行相似性比较, 进行相似性分析并用TREECON软件绘制系统发育进化树.结果表明测得的5株隐孢子虫与各自相同种相似性为98.1%～100%,与其他种相似性为90.1%～98.6%.分析显示在此突变区设置特异酶切位点能区分开C. parvum, C. andersoni, C. baileyi与C. suis,位点分别是TaqI、BstUI、MseI.本研究为我国隐孢子虫分类、分子流行病学研究提供了新的方法. 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 18S RRNA 序列分析

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初中生数学图式对数学解题的影响

8

作者 刁玉梅 赵继源 王秀冬 《当代教育论坛（教学版）》 2011年第11期76-77,共2页

为探查数学图式对数学解题的影响,本研究自编材料,对南宁市某非示范中学初三年级,随机抽取一个班,进行调查分析,结果发现数学图式和数学解题呈显著相关;从优差生的比较来看,学困生的数学图式和数学解题有更为显著的相关关系;而几何图式... 为探查数学图式对数学解题的影响,本研究自编材料,对南宁市某非示范中学初三年级,随机抽取一个班,进行调查分析,结果发现数学图式和数学解题呈显著相关;从优差生的比较来看,学困生的数学图式和数学解题有更为显著的相关关系;而几何图式对于数学解题的影响更为显著。 展开更多

关键词 初中生 数学图式 数学解题

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IL-10基因修饰的大鼠树突状细胞表型分析及生物学特性的研究 被引量：4

9

作者 田丽华 李雪 +1 位作者 刁玉梅 李兵 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期227-230,236,共5页

目的研究IL-10基因修饰后的大鼠树突状细胞(DC)的表型及其生物学特性。方法以含IL-10基因的重组腺病毒载体体外转染大鼠骨髓来源的DC,Western blot测定转染后各组DC中IL-10蛋白的表达,流式细胞仪检测各组DC表面抗原CD83、CD86分子的表... 目的研究IL-10基因修饰后的大鼠树突状细胞(DC)的表型及其生物学特性。方法以含IL-10基因的重组腺病毒载体体外转染大鼠骨髓来源的DC,Western blot测定转染后各组DC中IL-10蛋白的表达,流式细胞仪检测各组DC表面抗原CD83、CD86分子的表达情况,混合淋巴细胞反应法测定各组DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果 IL-10基因修饰组DC可检测到IL-10高表达,表面抗原CD83、CD86低表达,其刺激T淋巴细胞增殖水平较其他各组低。结论 IL-10基因修饰的DC可有效的表达有功能的IL-10,为研究IL-10修饰的DC诱导同种异体移植免疫耐受奠定了基础。 展开更多

关键词 树突状细胞 IL-10 基因修饰 大鼠

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IL-10修饰的树突状细胞在大鼠角膜移植中的作用 被引量：4

10

作者 苏海英 刁玉梅 李兵 《国际眼科杂志》 CAS 2011年第4期588-590,共3页

目的:探讨IL-10修饰的供体树突状细胞(dendritic cells,DC)在大鼠角膜移植中的作用。方法:建立Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植动物模型,Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体。受体大鼠42只随机分为3组,每组14只。A组为对照组,受体不经任何预处... 目的:探讨IL-10修饰的供体树突状细胞(dendritic cells,DC)在大鼠角膜移植中的作用。方法:建立Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植动物模型,Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体。受体大鼠42只随机分为3组,每组14只。A组为对照组,受体不经任何预处理,即行角膜移植术;B组角膜移植前3d,每只受体鼠经尾静脉注射供体的未成熟DC,细胞数为2×107个;C组角膜移植前3d,每只受体鼠经尾静脉注射经IL-10修饰的供体未成熟DC,细胞数为2×107个。结果:以混浊、水肿和新生血管3项指标作为临床评估标准,观察各组角膜植片的存活时间。角膜植片的存活时间3组分别为:10.1±1.7,17.8±1.8,26.4±1.6d。各干预组与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。B,C组间比较差异有显著性(P<0.01)。结论:摄取供体抗原的不成熟DC能显著延长角膜植片的存活时间;IL-10修饰的DC可进一步延长角膜植片的存活时间。 展开更多

关键词 IL-10 树突状细胞 角膜移植

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初中生数学学习迁移能力的调查与分析

11

作者 王秀冬 赵继源 刁玉梅 《数学教学研究》 2011年第8期50-52,共3页

本研究是在告知迁移的前提下，从纵横两方面考察学生在新旧知识上的迁移能力有无差异性．结果表明：学生整体在新旧知识上表现出很大的差异，在旧知识方面相对比较容易迁移；学优生、学困生的迁移能力没有显示出很大的差异，但学中生却... 本研究是在告知迁移的前提下，从纵横两方面考察学生在新旧知识上的迁移能力有无差异性．结果表明：学生整体在新旧知识上表现出很大的差异，在旧知识方面相对比较容易迁移；学优生、学困生的迁移能力没有显示出很大的差异，但学中生却表现出显著的差异性． 展开更多

关键词 初中生 数学学习 迁移能力

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悬臂式头架输煤皮带机设计 被引量：5

12

作者 刁玉梅 《一重技术》 2003年第4期5-7,共3页

阐述带有悬臂梁头架的输送皮带机的设计方法和注意事项。

关键词 悬臂结构 皮带机 输送皮带 线载荷 破碎机

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小分子化合物诱导人胚胎干细胞分化为角膜上皮样细胞 被引量：1

13

作者 肖文田 秦丽敏 +2 位作者 刁玉梅 刘晶劼 王丽强 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2021年第4期407-412,共6页

背景角膜缘干细胞缺乏是角膜盲的主要病因,种子细胞来源有限是细胞移植疗法的瓶颈。目的诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化为角膜上皮祖细胞和成熟的角膜上皮细胞(corneal epithelial cells,CECs)。方法采用拟胚... 背景角膜缘干细胞缺乏是角膜盲的主要病因,种子细胞来源有限是细胞移植疗法的瓶颈。目的诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化为角膜上皮祖细胞和成熟的角膜上皮细胞(corneal epithelial cells,CECs)。方法采用拟胚体联合小分子化合物(SB505124和IWP-2)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人胚胎干细胞H9系(hESCs H9)进行诱导,分别于诱导10 d、15 d和20 d时观察细胞形态,用免疫荧光法和实时定量PCR法对特征性标志物OCT4、SOX2、ΔNp63、CK14、CK3和CK12进行基因及蛋白水平的检测。结果小分子化合物诱导后胚胎干细胞形态改变,类似角膜上皮细胞形态。诱导后干性标志物OCT4和SOX2表达下调(P均<0.01),角膜上皮祖细胞及角膜上皮细胞标志物ΔNp63、CK14、CK3和CK12表达均上调(P均<0.05)。结论通过拟胚体联合小分子化合物的方法,可以将ESCs诱导为角膜上皮样细胞。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 小分子化合物 角膜上皮细胞 拟胚体 CK3

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篮球承载希望 艺术放飞梦想

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作者 刁玉梅 王洋 《辽宁教育》 2016年第9X期62-63,共2页

丹东市福春街小学始建于1950年,现有17个教学班,600名学生,教职工45人。作为全国特色学校,我们充分发挥学校的传统优势,以篮球为载体,以艺术为主线,切实加强学校体育、艺术工作,走特色发展之路,努力实现着'精品学校、特色教育,幸福... 丹东市福春街小学始建于1950年,现有17个教学班,600名学生,教职工45人。作为全国特色学校,我们充分发挥学校的传统优势,以篮球为载体,以艺术为主线,切实加强学校体育、艺术工作,走特色发展之路,努力实现着'精品学校、特色教育,幸福师生'的教育目标。一、营造氛围,形成机制(一)提高认识。 展开更多

关键词 特色发展之路 学校体育 艺术工作 特色学校 体育艺术 特色教育 教育目标 篮球文化 行进间 篮球比赛

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容器夹套筒壁开孔翻边成形工艺及压模设计

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作者 刁玉梅 《一重技术》 2003年第4期4-5,共2页

阐述在特殊夹套压力容器制造中对筒壁进行开孔翻边冲压成形的工艺技术。

关键词 翻边 成形工艺 冲压成形 套筒 夹套 压模 制造 开孔 筒壁 容器

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小学语文课堂提问有效性初探

16

作者 刁玉梅 《小学教学研究（理论版）》 2010年第4期18-18,共1页

课堂提问是教学活动的重要组成部分．有效的提问．能激发学生的学习兴趣．促进思维的发展．还能及时反馈学生的学习信息．从而取得良好的教学效果。因此．提高课堂提问的有效性显得尤为重要。

关键词 课堂提问 有效性 小学语文 教学效果 学习信息 学习兴趣 教学活动 学生

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让开放的课堂成为师生求真的舞台——一则教学案例引发的思考

17

作者 刁玉梅 《小学教学参考（综合版）》 2007年第9期67-68,共2页

教师的教学必须走进学生．让学生主体参与，自主建构。这需要有个开放的空间，给学生以心灵自由。师生共同回归生活，寻找真实生活的体验。“真”就是说实话办实事。只有回归生活，师生共同营造开放的课堂．学生才能敢于在课堂上说真话... 教师的教学必须走进学生．让学生主体参与，自主建构。这需要有个开放的空间，给学生以心灵自由。师生共同回归生活，寻找真实生活的体验。“真”就是说实话办实事。只有回归生活，师生共同营造开放的课堂．学生才能敢于在课堂上说真话，尤其是在达成培养学生诚信品质这样的教学内容时，更需要师生敞开心扉，真诚对话，达成目标。 展开更多

关键词 教学案例 师生 课堂 开放 学生主体参与 舞台 求真 真实生活

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“回归生活——活动建构”教学模式初探

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作者 刁玉梅 《小学教学参考（综合版）》 2007年第11期68-68,共1页

一、“回归生活——活动建构”模式的基本环节 根据冈特模式有效性三个条件之一：模式必须遵循明晰的教学步骤。我们为“回归生活——活动建构”模式设计了四个教学环节：“点击生活——活动链接——引导提升——回归生活”。将教材的... 一、“回归生活——活动建构”模式的基本环节 根据冈特模式有效性三个条件之一：模式必须遵循明晰的教学步骤。我们为“回归生活——活动建构”模式设计了四个教学环节：“点击生活——活动链接——引导提升——回归生活”。将教材的话题纳入模式的框架内，从点击学生已有的生活经验入手，通过链接学生的家庭、学校和社会生活，在活动中感悟、体验，建构生成新的意义世界，并回归生活去验证。整个模式以活动相链接，活动成为学生自我建构的过程，回归生活既是课程建构的起点，又是课程建构的归宿。 展开更多

关键词 生活经验 回归 教学模式 课程建构 教学步骤 教学环节 社会生活 意义世界

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《父母的疼爱》教学实录及反思

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作者 刁玉梅 《小学教学参考（综合版）》 2006年第5期52-53,共2页

关键词 《父母的疼爱》 教学实录 教学目标 家庭亲情 知识能力 孝敬父母 教学重点 学生体验

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浮头式后冷却器设计与GB151-1999标准应用

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作者 刁玉梅 《一重技术》 2004年第1期10-11,共2页

阐述浮头式冷却器设计要点,对折流板布置进行失稳当量优化设计及应用GB151-1999《管壳式换热器》新标准。

关键词 尿素装置 浮头式后冷却器 GB151-1999 换热器 折流板

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