为建立用于二代测序技术的最适细菌DNA提取方法。分别用磁珠法、热裂解法、试剂盒法(有溶菌酶处理和无溶菌酶处理)、超声波法、超声+热裂解法共6种方法提取等量混合的细菌DNA,特异性扩增其16S r RNA的V3-V4高变区基因,经二代测序并分析...为建立用于二代测序技术的最适细菌DNA提取方法。分别用磁珠法、热裂解法、试剂盒法(有溶菌酶处理和无溶菌酶处理)、超声波法、超声+热裂解法共6种方法提取等量混合的细菌DNA,特异性扩增其16S r RNA的V3-V4高变区基因,经二代测序并分析结果中的细菌种类及其相对含量分布。6种方法的测序结果中,细菌种类鉴定结果无明显差异;而在磁珠法和试剂盒法(有溶菌酶处理)结果中,不同细菌的含量分布最为接近样品中的真实情况。在6种方法中,磁珠法和试剂盒法(有溶菌酶处理)适合于二代测序技术中混合细菌DNA的提取。展开更多
以DNA条形码技术鉴别进出口监督抽检的鱼肉等水产制品的种类来源,用以判别其与申报或产品标签是否相符。分别提取鱼肉等样品的基因组DNA,以目前国际上比较公认的动物线粒体细胞色素氧化酶COⅠ基因通用引物进行PCR扩增。PCR产物经测序分...以DNA条形码技术鉴别进出口监督抽检的鱼肉等水产制品的种类来源,用以判别其与申报或产品标签是否相符。分别提取鱼肉等样品的基因组DNA,以目前国际上比较公认的动物线粒体细胞色素氧化酶COⅠ基因通用引物进行PCR扩增。PCR产物经测序分析后,将得到的扩增片段序列与Genbank数据库进行序列比对,同时提交Barcoding Life DNA条形码数据库(BOLD)进行鉴定分析。本批次监督抽检的16份鱼肉、鱼丸等水产制品中除1份样品未能成功获得鱼肉COⅠPCR扩增外,其余15份样品均顺利得到种类来源鉴定,鉴定结果约有31.25%的样品与产品标签标示不符。作为一种简单、快速、有效的分子鉴定技术,DNA条形码可以直接应用于鱼肉等动物源性食品的种类鉴定。展开更多
文摘为建立用于二代测序技术的最适细菌DNA提取方法。分别用磁珠法、热裂解法、试剂盒法(有溶菌酶处理和无溶菌酶处理)、超声波法、超声+热裂解法共6种方法提取等量混合的细菌DNA,特异性扩增其16S r RNA的V3-V4高变区基因,经二代测序并分析结果中的细菌种类及其相对含量分布。6种方法的测序结果中,细菌种类鉴定结果无明显差异;而在磁珠法和试剂盒法(有溶菌酶处理)结果中,不同细菌的含量分布最为接近样品中的真实情况。在6种方法中,磁珠法和试剂盒法(有溶菌酶处理)适合于二代测序技术中混合细菌DNA的提取。
文摘以DNA条形码技术鉴别进出口监督抽检的鱼肉等水产制品的种类来源,用以判别其与申报或产品标签是否相符。分别提取鱼肉等样品的基因组DNA,以目前国际上比较公认的动物线粒体细胞色素氧化酶COⅠ基因通用引物进行PCR扩增。PCR产物经测序分析后,将得到的扩增片段序列与Genbank数据库进行序列比对,同时提交Barcoding Life DNA条形码数据库(BOLD)进行鉴定分析。本批次监督抽检的16份鱼肉、鱼丸等水产制品中除1份样品未能成功获得鱼肉COⅠPCR扩增外,其余15份样品均顺利得到种类来源鉴定,鉴定结果约有31.25%的样品与产品标签标示不符。作为一种简单、快速、有效的分子鉴定技术,DNA条形码可以直接应用于鱼肉等动物源性食品的种类鉴定。