2019—2022年广西鸭圆环病毒分子流行病学研究

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作者 熊陈勇 曾素先 +11 位作者 刘惠心 赵康 施开创 施喻文 谢守玉 韦显凯 龙凤 冯淑萍 屈素洁 王露霞 林昌华 尹彦文 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期373-381,共9页

【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株... 【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株核苷酸和氨基酸序列相似性,使用RDP4和SimPlot 3.5.1软件分析DuCV重组事件,采用Mega 7.0软件构建遗传进化树,应用BioEdit软件分析DuCV Cap蛋白氨基酸变异位点。【结果】DuCV阳性率为22.5%,基因组大小为1988~1996 bp。广西DuCV毒株全基因组、Rep和Cap基因与参考毒株核苷酸序列相似性分别为71.9%~99.6%、83.1%~99.9%和52.8%~99.9%。基因重组分析显示,DuCV-GX13-2019和DuCV-GX14-2020存在重组事件。Cap蛋白共有78个氨基酸位点发生突变,与DuCV-1相比,DuCV-2在第3、12、15、23、31、42、56和64位氨基酸处完全变异。广西毒株为DuCV-1和DuCV-2基因型,DuCV-1为主要优势毒株,且DuCV-1b亚型流行最为广泛。【结论】广西地区DuCV发病较严重,部分毒株存在重组事件,Cap蛋白突变率高,DuCV多种亚型均有流行。研究结果为广西地区DuCV流行病学调查提供基本数据。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒(DuCV) 遗传进化 相似性 流行病学

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鹅细小病毒、番鸭细小病毒及鸭圆环病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用 被引量：1

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作者 谢守玉 刘惠心 +11 位作者 熊陈勇 郑敏 施开创 韦显凯 冯淑萍 龙凤 梁凤 吕思明 屈素洁 陆文俊 尹彦文 李军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期38-44,共7页

为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光... 为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光定量PCR方法。利用该方法检测GPV、MDPV、DuCV及禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、鸭坦布苏病毒、番鸭呼肠孤病毒等主要水禽源病毒,结果显示,该方法仅能扩增出GPV、MDPV及DuCV,与其他主要水禽源病毒均无交叉反应,特异性强;利用该方法检测等体积混合后的GPV、MDPV及DuCV质粒标准品混合物,结果显示,该方法对3种质粒标准品的检测限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,普通单一PCR对上述3种质粒标准品混合物的检测限均为7.5×10^(3)拷贝/μL,表明本研究建立方法的敏感性高于普通PCR;该方法组内与组间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性好。利用该方法与MDPV和GPV双重荧光定量PCR方法及DuCV荧光定量PCR方法同时检测96份临床发病鸭的组织样品,该方法检测结果显示,共检出58份阳性样品,其中GPV检出率为18.75%(18/96),MDPV检出率为4.17%(4/96),DuCV检出率为37.50%(36/96),GPV与DuCV混合感染率为8.33%(8/96),阴性样品38份。与GPV和MDPV双重荧光定量PCR及DuCV荧光定量PCR方法的检测结果均一致,三者的符合率达100%。本研究建立的GPV、MDPV及DuCV多重TaqMan荧光定量PCR方法为临床鉴别检测该3种病原及其流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术手段。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 鸭圆环病毒 荧光定量PCR 临床应用

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A型塞尼卡病毒与O型、A型、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：3

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作者 施开创 谢守玉 +8 位作者 赵晶 莫胜兰 刘惠心 尹彦文 司红彬 屈素洁 陆文俊 冯淑萍 粟艳琼 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第2期84-92,共9页

为建立鉴别检测A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、A型、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)的方法,针对SVA 3D基因与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因,分别设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同时检测SVA与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV的TaqMa... 为建立鉴别检测A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、A型、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)的方法,针对SVA 3D基因与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因,分别设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同时检测SVA与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。所建立的方法能特异性扩增SVA及O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV,与其他主要猪源病毒无交叉反应;对SVA与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV质粒标准品的检出下限分别为2.50×10^(1)、2.50×10^(2)、2.50×10^(2)、2.50×10^(2)copies/μL;组内与组间重复性试验的变异系数均小于2%。应用所建立方法检测2019年来自广西的30份临床疑似样品,SVA和O型FMDV的检出阳性率分别为20%和70%,而未能检出A型和亚洲Ⅰ型FMDV。结果表明,本研究所建立的多重荧光定量RT-PCR方法为SVA与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV的临床检测和流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术手段。 展开更多

关键词 A型塞尼卡病毒 口蹄疫病毒 荧光定量RT-PCR 检测方法

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“济特福”临床试验总结 被引量：1

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作者 关宝莲 李庭凯 +8 位作者 柏晋梅 牛天福 解一玲 刘惠心 郭爱琴 郭兴华 苏琪 贾士芳 徐怡 《山西中医》 1993年第3期19-20,共2页

我们自1987年以来参照国际上对有机铬研究的新进展,同中科院微生物研究所合作研制成功了富含有机铬的活性酵母,结合我们20多年来在中医临床实践中筛选出的具有降糖降脂的中药山药等,综合制成济特福胶囊。经临床应用,发现它具有良好的调... 我们自1987年以来参照国际上对有机铬研究的新进展,同中科院微生物研究所合作研制成功了富含有机铬的活性酵母,结合我们20多年来在中医临床实践中筛选出的具有降糖降脂的中药山药等,综合制成济特福胶囊。经临床应用,发现它具有良好的调节糖脂代谢的作用,现将临床试验资料总结如下。 一、一般资料 临床共观察195例病人,其中糖尿病病人96例,全部采用济特福治疗观察,各种原因引起的高脂血症病人99例,随机分为观察组和对照组。高脂血症观察组共79例。 展开更多

关键词 济特福 降血脂药 中成药 药理

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鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒及番鸭呼肠孤病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与临床应用 被引量：7

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作者 谢守玉 刘惠心 +7 位作者 尹彦文 施开创 屈素洁 陆文俊 黄小武 廖东安 王露霞 吴双燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期952-958,共7页

为建立鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的方法,本研究分别针对DTMUV E基因与NDRV、MDRV S3基因,设计特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时检测DTMUV、NDRV及MDRV的... 为建立鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的方法,本研究分别针对DTMUV E基因与NDRV、MDRV S3基因,设计特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时检测DTMUV、NDRV及MDRV的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法仅能扩增DTMUV、NDRV及MDRV,与禽呼肠孤病毒(ARV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭瘟病毒(DEV)等主要禽源病毒均无交叉反应,特异性强;对DTMUV、NDRV及MDRV质粒标准品的检测下限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;组内与组间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性好。利用该方法与已报道的坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法及NDRV与MDRV双重RTPCR方法同时检测82份临床疑似患病鸭的肝脾组织样品,结果检出阳性样品22份,其中,DTMUV阳性检出率为10.98%(9/82),NDRV阳性检出率为2.44%(2/82),MDRV阳性检出率为13.41%(11/82),检出阴性样品60份。与参考方法的检测结果一致,三者的符合率达100%。本研究建立的方法为临床DTMUV、NDRV及MDRV鉴别检测和流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术支撑。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 新型鸭呼肠孤病毒 番鸭呼肠孤病毒 荧光定量RT-PCR 临床应用

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A型塞尼卡病毒与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：4

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作者 谢守玉 刘惠心 +7 位作者 施开创 赵晶 屈素洁 尹彦文 王树培 陆文俊 冯淑萍 粟艳琼 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期905-911,共7页

为建立鉴别A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒(FMDV)的快速检测方法,本研究分别设计4对特异性引物,用于扩增SVA 3D基因(157 bp)、O型FMDV VP1基因(240 bp)、亚洲I型FMDV VP1基因(460 bp)、A型FMDV VP1基因(320 bp)。经... 为建立鉴别A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒(FMDV)的快速检测方法,本研究分别设计4对特异性引物,用于扩增SVA 3D基因(157 bp)、O型FMDV VP1基因(240 bp)、亚洲I型FMDV VP1基因(460 bp)、A型FMDV VP1基因(320 bp)。经优化引物浓度、退火温度等反应条件,初步建立了同时检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV的多重RT-PCR方法。利用该方法同时检测SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型(PCV2)、PCV3等主要猪源病毒,结果显示该方法仅对SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV检测为阳性,其他均为阴性,特异性较强;SVA、O型、亚洲I型、A型FMDV重组质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的多重RT-PCR方法检测,结果显示同一反应体系中,4种重组质粒标准品的检出下限均为2.5×10^2拷贝/μL,敏感性较高;批内、批间重复性试验结果一致,该方法重复性较好。利用本实验建立的方法对2019年采集自广西30份临床疑似样品进行检测,结果显示,SVA、O型FMDV的阳性检出率分别为16.67%和63.33%;未检出亚洲I型及A型FMDV;同时采用国家标准《口蹄疫诊断技术》(GB/T18935-2003)中RT-PCR方法以及文献报道的SVA套式RTPCR方法对FMDV、SVA检测,结果与本实验建立的多重RT-PCR方法检测结果的符合率为100%。本研究首次建立的多重RT-PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,为鉴别检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV提供了有效的技术方法。 展开更多

关键词 A型塞尼卡病毒 口蹄疫病毒 多重RT-PCR 检测方法

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浅谈学生英语学习兴趣的培养 被引量：3

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作者 刘惠心 《南京广播电视大学学报》 2008年第4期75-78,共4页

学习兴趣的培养是教师在教学中最重要的工作任务之一,那么如何培养学生学习英语的兴趣呢?文章认为应该从以下几个方面着手:渲染气氛,培养兴趣,激发兴趣;帮助学生养成良好的习惯,树立信心;在日常生活中关爱学生,建立和谐的师生关系;创设... 学习兴趣的培养是教师在教学中最重要的工作任务之一,那么如何培养学生学习英语的兴趣呢?文章认为应该从以下几个方面着手:渲染气氛,培养兴趣,激发兴趣;帮助学生养成良好的习惯,树立信心;在日常生活中关爱学生,建立和谐的师生关系;创设情景,采用Group task等手段激励学生说英语,体会成就感;引导学生运用知识,持续兴趣;欣赏学生,多给学生以肯定和鼓励;在优化教学过程、改革教学方法的过程中,不断激发学生学习英语的兴趣;善于抓两头、带中间,使所有学生都有兴趣;组织竞赛,挖掘学生的英语学习兴趣。 展开更多

关键词 英语 学习兴趣 培养

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TS型密封三维桥梁伸缩装置施工技术

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作者 刘惠心 王德来 《市政技术》 1992年第2期51-53,共3页

一、工程概况: 桥梁伸缩装置是为解决桥梁因气温变化面产生的热胀冷缩的必备装置。我工区在西厢菜户营立交桥工程的二环路1号桥、2号桥等共八座桥梁中使用了TS8型伸缩缝十四条(其中异型Y型缝一条,)它适用于伸缩量为0至8cm;TS16型伸缩缝... 一、工程概况: 桥梁伸缩装置是为解决桥梁因气温变化面产生的热胀冷缩的必备装置。我工区在西厢菜户营立交桥工程的二环路1号桥、2号桥等共八座桥梁中使用了TS8型伸缩缝十四条(其中异型Y型缝一条,)它适用于伸缩量为0至8cm;TS16型伸缩缝十条,它适用于伸缩量为8至16cm。 展开更多

关键词 桥 伸缩装置 TS型 施工 安装

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心脏病术后代谢异常2例 被引量：1

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作者 张庆祥 刘静魁 +5 位作者 李月梅 刘惠心 查光彦 孔祥荣 张雪梅 李艳丽 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 2002年第1期14-14,共1页

关键词 心脏病 手术后 代谢异常

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全动脉化冠状动脉搭桥术治疗冠心病15例

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作者 孔祥荣 查光彦 +7 位作者 张海彬 张庆祥 刘惠心 崔光浩 孔德平 刘立新 刘静魁 李宗肖 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期284-284,共1页

关键词 冠心病 全动脉化冠状动脉塔桥术 乳内动脉 胃网膜右动脉 桡动脉

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冠状动脉旁路移植术前、后心脏功能变化的观察——附2例报告

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作者 王湛 安丽敏 +3 位作者 张连娟 刘惠心 夏宏运 尹金花 《心血管康复医学杂志》 CAS 2001年第4期363-364,共2页

关键词 冠心病 冠状动脉旁路移植术 心脏功能

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猪粪还田处理方法研究进展 被引量：1

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作者 张鹂镔 刘惠心 +2 位作者 丁撷瑛 何扬 司红彬 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第23期26-31,共6页

在我国生猪养殖向集约化、规模化高速转型的背景下,猪粪排放日益集中,排放量不断增加,猪粪的处理问题逐渐成为制约养猪业发展的瓶颈。猪粪还田作为传统的处理猪粪的主要手段,显现出越来越重要的地位。文章总结了猪粪还田的主要处理方法... 在我国生猪养殖向集约化、规模化高速转型的背景下,猪粪排放日益集中,排放量不断增加,猪粪的处理问题逐渐成为制约养猪业发展的瓶颈。猪粪还田作为传统的处理猪粪的主要手段,显现出越来越重要的地位。文章总结了猪粪还田的主要处理方法并提出将猪粪转化为液态肥进行资源化利用的思路,以期为实现农牧循环、限制猪粪污染、提高猪粪的利用率、促进我国农牧行业的健康发展提供参考借鉴和理论依据。 展开更多

关键词 猪粪 还田 处理方法 液态肥 资源化利用

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猪圆环病毒三重PCR检测方法的建立及其广西地区流行病学调查 被引量：5

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作者 赵晶 施开创 +5 位作者 刘惠心 尹彦文 龙凤 陆文俊 屈素洁 司红彬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期413-420,共8页

针对当前我国流行的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)1型(PCV1)、2型(PCV2)和3型(PCV3),设计3对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度和循环次数的优化,建立了鉴别检测PCV1、PCV2和PCV3的三重PCR方法。结果显示,该方法具有良好的特... 针对当前我国流行的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)1型(PCV1)、2型(PCV2)和3型(PCV3),设计3对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度和循环次数的优化,建立了鉴别检测PCV1、PCV2和PCV3的三重PCR方法。结果显示,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,只能检出PCV1、PCV2和PCV3,其他猪病毒均未能扩出;对PCV1、PCV2和PCV3质粒标准品的检测下限分别为3.63×10^(3),3.63×10^(1),3.63×10^(2)拷贝/μL;相同条件下的扩增获得均匀一致的结果。利用所建立的三重PCR方法检测2018—2020年采自广西各地的1308份猪组织病料,结果显示,PCV1、PCV2和PCV3的阳性率分别为2.14%,56.65%,5.58%,并存在混合感染现象;PCV1、PCV2阳性率逐年下降,PCV3阳性率稳定控制,不同地市之间阳性率有所差异。结果表明,本研究成功建立了一种快速、特异、灵敏、经济的三重PCR方法,可用于PCV1、PCV2和PCV3的鉴别检测和流行病学调查;当前广西猪群普遍感染PCV1、PCV2和PCV3,应加强防控。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 三重PCR 流行病学调查

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广西新型鸭呼肠孤病毒流行毒株GX01-2020全基因组分子特征分析

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作者 谢守玉 刘惠心 +9 位作者 周媛 熊陈勇 施开创 屈素洁 苏文广 温新瑞 李媛 李春英 邓桂潮 尹彦文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期643-650,661,共9页

为了解广西新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段进行全基因组序列扩增,经克隆、测序、拼接后,获得1株NDRV全基因组序列(命名为GX01-2020株)。结果显示,GX01-2020株基因组全长23353 bp,分... 为了解广西新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段进行全基因组序列扩增,经克隆、测序、拼接后,获得1株NDRV全基因组序列(命名为GX01-2020株)。结果显示,GX01-2020株基因组全长23353 bp,分为10个片段,大小从1194 bp(S4)至3958 bp(L1)不等。同源性分析显示,GX01-2020株10个片段核苷酸同源性与NDRV代表毒株最高,为86.2%~99.4%,其中μB片段核苷酸同源性最低的毒株为番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV),其他片段则为鸡源禽呼肠孤病毒(chicken-origin reovirus,CRV),说明不同片段来源祖先不完全相同。遗传进化分析显示,10个片段遗传进化树中,L2、L3片段中MDRV参考毒株及σA片段中NDRV参考毒株均形成两个进化分支,与其他片段不同,说明不同片段与参考毒株的遗传关系不尽相同。重组分析显示,GX01-2020株的L1片段存在重组信号,重组亲本毒株分别为北京MDRV_J18株和福建DRV_NP03株。本研究丰富了NDRV基因库相关信息,同时为广西地区NDRV的分子流行病学研究和有效防制措施制订提供了一定的参考。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) 全基因组测序 遗传进化

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