运用实时荧光RT-PCR技术检测柑橘碎叶病毒 被引量：11

1

作者 刘科宏 周常勇 +3 位作者 宋震 周彦 李中安 唐科志 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期748-751,共4页

柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光RT-PCR体系,并对该体系的特异... 柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光RT-PCR体系,并对该体系的特异性、灵敏性和适用性进行了测试。结果表明,该检测体系能特异的检出CTLV,对测试的衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒和鳞皮病毒都不能检出;灵敏度比常规PCR高100倍;适用性广,可检测出多种柑橘类植物中的CTLV。实时荧光RT-PCR检测整个过程完全闭管,无需PCR后处理,且SYBR GreenI荧光染料成本较低,适用于检测柑橘体内含量较低的CTLV病毒。 展开更多

关键词 柑橘碎叶病毒(CTLV) 实时荧光RT—PCR 检测

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柑桔衰退病毒在3种寄主不同组织中分布的研究初报 被引量：5

2

作者 刘科宏 周彦 +2 位作者 王雪峰 唐科志 周常勇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第B08期109-110,共2页

应用直接组织点免疫(DTBIA)和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),对接种了柑桔衰退病毒(CTV)的3组共45株锦橙、凤凰柚和木并柑进行了检测,结果表明,CTV在嫩枝中的检出率最高,其次依次是嫩叶、老枝和老叶。

关键词 柑桔衰退病毒 寄主 组织分布 直接组织点免疫 反转录-聚合酶链式反应

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8种柑橘类植物对柑橘碎叶病毒分子组成的影响 被引量：1

3

作者 刘科宏 宋震 +2 位作者 周彦 李中安 周常勇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期90-93,共4页

探究不同柑橘类型对柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)变异的影响,为研究寄主-CTLV的互作关系提供基础。将CTLV分离株HH和XLB分别嫁接接种于8种柑橘类植物,对CTLV分离株和获得的亚分离株样品进行CP基因的限制性长度多态性(RF... 探究不同柑橘类型对柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)变异的影响,为研究寄主-CTLV的互作关系提供基础。将CTLV分离株HH和XLB分别嫁接接种于8种柑橘类植物,对CTLV分离株和获得的亚分离株样品进行CP基因的限制性长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,以及序列比较。结果表明HH和XLB与其各自在不同柑橘植株上的亚分离株的CP/Hinf I RFLP酶切图谱无明显差异;混合侵染的CTLV分离株HH和其亚分离株之间的SSCP谱型存在差异,株系构成单一的CTLV分离株XLB与其亚分离株间的SSCP谱型差异不明显。通过序列分析进一步证实CTLV在不同寄主上其CP基因有几个核苷酸位点发生了变异。CTLV可能受寄主植物的影响发生了变异。 展开更多

关键词 柑橘 柑橘碎叶病毒 CP基因

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温州蜜柑萎缩病毒研究进展 被引量：2

4

作者 刘科宏 李中安 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期497-500,共4页

温州蜜柑萎缩病毒(Satsuma dwarf virus,SDV)引起的温州蜜柑萎缩病是一种柑橘病毒病害,该病曾给日本的温州蜜柑产业造成了极大损失,20世纪80年代随引种传入我国。SDV可侵染几乎所有柑橘属及其近缘属植物,侵染温州蜜柑后可使其丧失经济... 温州蜜柑萎缩病毒(Satsuma dwarf virus,SDV)引起的温州蜜柑萎缩病是一种柑橘病毒病害,该病曾给日本的温州蜜柑产业造成了极大损失,20世纪80年代随引种传入我国。SDV可侵染几乎所有柑橘属及其近缘属植物,侵染温州蜜柑后可使其丧失经济价值。对SDV的分类地位,生物学特征,分子生物学特性进行了总结,重点阐述了运用生物学、血清学和分子生物学方法检测SDV的研究进展,并介绍了SDV的防治方法,最后对其急待解决的问题和研究的空白方面进行了分析,旨在为该病的防治提供信息。 展开更多

关键词 温州蜜柑萎缩病毒 检测 防治

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柑桔碎叶病的检测及其防治

5

作者 刘科宏 周常勇 卢志红 《中国南方果树》 北大核心 2009年第3期49-50,共2页

阐述了柑桔碎叶病在田间的表现症状以及利用生物学、血清学和分子生物学技术检测该病的方法;简要介绍了该病的防治措施。

关键词 柑桔碎叶病 检测 防治

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砧木品种与茎尖嫁接成活率关系的研究

6

作者 刘科宏 《安徽农业科学》 CAS 2012年第16期8866-8866,8917,共2页

[目的]明确砧木品种与茎尖嫁接成活率的关系。[方法]分别以枳(Poncirus trifoliata)、枳橙(Ruta"Citrange")和甜橙[Citrussinensis(L.)Osbeck]作为茎尖嫁接砧木,采用倒"T"字法对黄果柑、长泰芦柑、玉环高橙以及玉... [目的]明确砧木品种与茎尖嫁接成活率的关系。[方法]分别以枳(Poncirus trifoliata)、枳橙(Ruta"Citrange")和甜橙[Citrussinensis(L.)Osbeck]作为茎尖嫁接砧木,采用倒"T"字法对黄果柑、长泰芦柑、玉环高橙以及玉环柚进行茎尖嫁接脱毒。[结果]黄果柑和玉环高橙用甜橙作砧木成活率最高分别为75.0%和60.0%,长泰芦柑和玉环柚用枳橙作砧木成活率最高分别为46.7%和18.2%。[结论]茎尖嫁接成活率的高低与砧木和脱毒品种的亲和性有关,同一品种选用不同的砧木其茎尖嫁接成活率有差异。 展开更多

关键词 砧木 茎尖嫁接 成活率

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我国玉米主产区亚洲玉米螟越冬幼虫天敌调查 被引量：23

7

作者 何康来 王振营 +3 位作者 文丽萍 白树雄 刘科宏 周大荣 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2002年第2期49-53,共5页

对我国玉米主产区 9省 1 1个点的亚洲玉米螟越冬幼虫寄生性天敌资源进行了调查。寄生性天敌昆虫主要有玉米螟厉寄蝇、腰带长体茧蜂、大螟钝唇姬蜂 ;病原微生物有白僵菌、苏云金杆菌、玉米螟微粒子虫和Nosemasp 等。总体上看 ,病原微生... 对我国玉米主产区 9省 1 1个点的亚洲玉米螟越冬幼虫寄生性天敌资源进行了调查。寄生性天敌昆虫主要有玉米螟厉寄蝇、腰带长体茧蜂、大螟钝唇姬蜂 ;病原微生物有白僵菌、苏云金杆菌、玉米螟微粒子虫和Nosemasp 等。总体上看 ,病原微生物的感染率高于寄生性天敌昆虫的寄生率 ,但不同种类在各地之间的分布有明显差异。白僵菌为东北春玉米区优势种 ,在吉林省的公主岭和通榆发病率达 74 8%～ 80 4 % ,可能与当地长期使用白僵菌进行玉米螟防治有关。苏云金杆菌在夏玉米区的寄生率明显较高 ,为 6 7%～ 1 3 7%。微孢子虫的感染率为 0～ 2 3 1 % ,玉米螟微粒子虫为优势种 ,主要流行在春玉米区 ,而在夏玉米区郑州寄生的微孢子虫为Nosema属一未知新种。腰带长体茧蜂分布范围较广 ,寄生率为 0～ 1 7 9% ,以夏玉米区寄生率较高。大螟钝唇姬蜂仅在赤峰、朔州和敦化有寄生 ,寄生率分别为 1 5%、0 5%和 0 8%。玉米螟厉寄蝇在除赤峰和衡水外的各点均有分布 ,寄生率为 0 7%～ 6 3% ,以山西朔州的寄生率为最高 。 展开更多

关键词 亚洲玉米螟 越冬幼虫 寄生性天敌 天敌昆虫 寄生率 病原微生物 玉米螟厉寄蝇 玉米主产区 中国

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利用一步法RT-PCR检测柑橘裂皮病类病毒 被引量：14

8

作者 唐科志 彭军 +5 位作者 王雪峰 周彦 周常勇 刘科宏 刘英 杨方云 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期408-413,共6页

柑橘裂皮病(CEVd)是限制柑橘产量的一种重要类病毒病害,国内外已经建立了多种方法检测该病害的病原。本研究初步建立了快速灵敏检测CEVd的一步法RTPCR技术。经过与生物学鉴定和双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(sPAGE)方法的比较检测,表明该RTPC... 柑橘裂皮病(CEVd)是限制柑橘产量的一种重要类病毒病害,国内外已经建立了多种方法检测该病害的病原。本研究初步建立了快速灵敏检测CEVd的一步法RTPCR技术。经过与生物学鉴定和双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(sPAGE)方法的比较检测,表明该RTPCR方法检测周期短,灵敏度高,有利于对类病毒在春季和冬季浓度低时进行快速准确的检测。应用该技术对大量田间寄主进行了检测。 展开更多

关键词 柑橘裂皮病 一步法RT-PCR 生物检测 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳

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柑桔衰退病毒分离株分子特征初步研究 被引量：10

9

作者 周彦 周常勇 +3 位作者 王雪峰 刘科宏 刘金香 唐科志 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期147-150,共4页

柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)广泛分布于世界各柑桔产区,迄今已经摧毁了一亿株柑桔,目前仍然严重威胁着以酸橙作砧木的柑桔产区和对茎陷点型CTV敏感的葡萄柚、柚类和某些甜橙的安全。我国广泛分布着CTV的多种强毒株,随着近... 柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)广泛分布于世界各柑桔产区,迄今已经摧毁了一亿株柑桔,目前仍然严重威胁着以酸橙作砧木的柑桔产区和对茎陷点型CTV敏感的葡萄柚、柚类和某些甜橙的安全。我国广泛分布着CTV的多种强毒株,随着近年来柑桔产业结构调整的深入,茎陷点型CTV对柚类和某些甜橙的危害正变得日益严峻。国外的经验表明,弱毒株交叉保护(MSCP) 是目前防治茎陷点型CTV最有效手段。 CTV属于长线形病毒属(Closterovirus),基因组为19 296个核苷酸组成的正义单链RNA,具有 12个开放读码框(ORF),可以编码17种蛋白质, 其中25 kDa和27 展开更多

关键词 分离株 柑桔衰退病毒 CTV 分子特征 株系分化

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柑橘碎叶病毒外壳蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：8

10

作者 宋震 刘科宏 +3 位作者 杨方云 唐科志 李中安 周常勇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期3741-3748,共8页

【目的】了解中国CTLV分离物外壳蛋白(CP)基因的变异情况。【方法】对来源于中国不同地区、不同寄主品种的18个柑橘碎叶病毒(CTLV)分离物进行RT-PCR、克隆、测序,应用DNAMAN软件进行序列分析。【结果】18个分离物的CP基因全长714nt,推导... 【目的】了解中国CTLV分离物外壳蛋白(CP)基因的变异情况。【方法】对来源于中国不同地区、不同寄主品种的18个柑橘碎叶病毒(CTLV)分离物进行RT-PCR、克隆、测序,应用DNAMAN软件进行序列分析。【结果】18个分离物的CP基因全长714nt,推导的CP含237个氨基酸。CP核苷酸序列及推导的氨基酸序列最大相似性分别为88.5%～99.9%和91.1%～99.6%。与核苷酸序列G289→A或C、A409→C和G414→T的单碱基突变相对应,CTLV外壳蛋白第97、137、138位氨基酸在强、弱毒分离物之间存在差异,多数弱毒分离物为Q97或K97、Q137、H138,而多数强毒分离物为E97、R137或K137、Q138。在根据CP氨基酸序列构建的系统进化树上,本研究获得的18个CTLV分离物至少可以划分为2个组群,其中,在指示植物上表现较弱症状的多数(4/6)CTLV分离物划分在第Ⅰ组群,多数(10/12)CTLV强毒分离物划分在第Ⅱ组群。【结论】CTLV外壳蛋白基因相对保守,其第289、409、414位碱基在强、弱毒分离物之间存在差异,可能与病毒致病性相关。 展开更多

关键词 柑橘碎叶病毒 CTLV 外壳蛋白基因 克隆 序列分析

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应用PCR技术快速检测柑桔溃疡病的研究 被引量：13

11

作者 唐科志 周常勇 +3 位作者 王雪峰 周彦 刘科宏 刘英 《中国南方果树》 北大核心 2005年第2期1-4,共4页

应用PCR检测柑桔溃疡病,所用引物为5'TTGGTG TCGTCGCTTGTAT 3'和5'CACGGGTGCAAAAAATCT3'.从病样的叶片、果皮和枝皮抽提溃疡病菌的PCR扩增,其产物经琼脂粮凝胶电泳,产生大约220bp的特征条带,与纯培养溃疡病菌的PCR产物... 应用PCR检测柑桔溃疡病,所用引物为5'TTGGTG TCGTCGCTTGTAT 3'和5'CACGGGTGCAAAAAATCT3'.从病样的叶片、果皮和枝皮抽提溃疡病菌的PCR扩增,其产物经琼脂粮凝胶电泳,产生大约220bp的特征条带,与纯培养溃疡病菌的PCR产物一致.试验比较两种核酸抽提方法,微量快速抽提法的灵敏度明显高于高盐抽提法.有症状病样品的不同部位均能检测到溃疡病;病株的无症状叶片、果皮、枝皮有部分检测到病菌.病果园健康植株大多数检测不到病菌,少数植株PCR产物电泳务带较弱.取样量以10～20mg为宜.该PCR技术可用于快速检测柑桔溃疡病. 展开更多

关键词 柑桔溃疡病 溃疡病菌 植株 果皮 病株 叶片 果园 PCR产物 核酸 抽提方法

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利用弱毒株交叉保护技术防治甜橙茎陷点型衰退病 被引量：12

12

作者 周彦 周常勇 +2 位作者 李中安 王雪峰 刘科宏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期4085-4091,共7页

【目的】获得对中国甜橙茎陷点型衰退病具有防治作用的柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)弱毒株。【方法】对7个国内外CTV弱毒分离株进行褐色桔蚜接种强毒株的拮抗试验,并运用p25/HinfⅠRFLP组群分析、特异性RT-PCR分析和寄主植... 【目的】获得对中国甜橙茎陷点型衰退病具有防治作用的柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)弱毒株。【方法】对7个国内外CTV弱毒分离株进行褐色桔蚜接种强毒株的拮抗试验,并运用p25/HinfⅠRFLP组群分析、特异性RT-PCR分析和寄主植株症状观察的方法对拮抗试验效果进行检测。【结果】本研究中所用7个弱毒株对甜橙茎陷点型衰退病均有一定的防治作用,其中弱毒株CT9、CT17和CT77对茎陷点型强毒株CT14的拮抗效果最为明显,分别为70%,50%和40%。分子检测与生物学检测的结果相一致。【结论】初步筛选出的具有拮抗作用的CTV弱毒株CT9、CT17和CT77具有应用于交叉保护的潜力,可供进一步田间区试研究。 展开更多

关键词 柑桔衰退病毒 交叉保护 防效检测

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柑橘碎叶病毒巢式RT-PCR检测方法建立及应用 被引量：11

13

作者 宋震 周常勇 +1 位作者 刘科宏 李中安 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期458-462,共5页

柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)是威胁柑橘生产的重要病原之一。本研究在柑橘碎叶病毒一步法RT-PCR检测体系的基础上建立了CTLV的巢式RT-PCR检测方法,并对其检测灵敏度及特异性进行了分析。结果表明,该方法检测灵敏度比... 柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)是威胁柑橘生产的重要病原之一。本研究在柑橘碎叶病毒一步法RT-PCR检测体系的基础上建立了CTLV的巢式RT-PCR检测方法,并对其检测灵敏度及特异性进行了分析。结果表明,该方法检测灵敏度比一步法RT-PCR至少提高100倍,检测模板总核酸的最低浓度约1.27μg·L-1,具有良好的特异性。在对142个田间样品、24个茎尖苗及20个接毒的腊斯克枳橙的检测中,巢式RT-PCR的CTLV检出率最高,为21.5%,比半巢式RT-PCR检出率高3.2%,比一步法RT-PCR检出率高2.1%。该方法灵敏度高,特异性强,适用于对无病毒苗木生产的监控和田间样品的快速检测。 展开更多

关键词 柑橘碎叶病毒 巢式RT-PCR 检测技术

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利用RT-PCR检测柑桔碎叶病毒的研究 被引量：3

14

作者 唐科志 周常勇 +3 位作者 王雪峰 周彦 刘科宏 刘英 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期118-119,共2页

柑桔碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV) 的传统检测方法是指示植物测定,该方法检测周期较长,且需要温、网室等配套设施;酶联免疫吸附方法(ELISA)可用于检测CTLV,但使用的是针对苹果茎沟病毒(ASGV)的抗体,虽然CTLV和AS- GV的亲缘... 柑桔碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV) 的传统检测方法是指示植物测定,该方法检测周期较长,且需要温、网室等配套设施;酶联免疫吸附方法(ELISA)可用于检测CTLV,但使用的是针对苹果茎沟病毒(ASGV)的抗体,虽然CTLV和AS- GV的亲缘关系已经得到证实,但到目前为止没有对中国的分离株进行实验验证,这在一定程度上影响了结果的可靠性。本研究应用Halistones 等建立的半巢式RT-PCR技术对已感病柑桔品种进行了周年检测,现将研究结果报道如下。 展开更多

关键词 CTLV 指示植物 巢式 柑桔碎叶病毒 RT-PCR PCR

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柑桔黄脉病毒脱毒方法研究 被引量：5

15

作者 陈洪明 刘科宏 +3 位作者 周彦 王雪峰 周常勇 李中安 《中国南方果树》 北大核心 2014年第3期71-73,共3页

柑桔黄脉病是一种主要发生在柠檬上的新型病毒病害,引起叶片黄化、脉明、皱缩、反卷甚至落叶,影响树势和产量。该病已对我国部分产区的柠檬产业造成较为严重的影响。通过比较不同脱毒方法脱除柑桔黄脉病毒的效果发现,热处理+茎尖嫁接脱... 柑桔黄脉病是一种主要发生在柠檬上的新型病毒病害,引起叶片黄化、脉明、皱缩、反卷甚至落叶,影响树势和产量。该病已对我国部分产区的柠檬产业造成较为严重的影响。通过比较不同脱毒方法脱除柑桔黄脉病毒的效果发现,热处理+茎尖嫁接脱毒方法最有效。本研究对我国柠檬以及柑桔产业具有重要意义。 展开更多

关键词 柑桔黄脉病毒 茎尖嫁接 脱毒

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贡水白柚病毒病感染鉴定与脱毒情况简报 被引量：2

16

作者 刘英 杨方云 +4 位作者 李太盛 唐科志 周彦 刘科宏 周常勇 《中国南方果树》 北大核心 2006年第4期18-19,共2页

关键词 贡水白柚 病害鉴定 病毒病 脱毒 感染 分子生物学方法 优良单株 地方良种 经济效益 田间调查

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天草、不知火等日本柑桔品种的病毒病鉴定与脱毒 被引量：2

17

作者 唐科志 杨方云 +4 位作者 周常勇 赵学源 黄森 刘英 刘科宏 《中国南方果树》 北大核心 2005年第4期13-14,共2页

关键词 日本 柑桔 品种 病毒病 鉴定 脱毒效果

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第18届国际柑桔病毒学家组织者会议概况及巴西柑桔考察 被引量：2

18

作者 刘金香 刘科宏 +1 位作者 李中安 周常勇 《中国南方果树》 北大核心 2011年第2期75-78,共4页

近年来,国际柑桔嫁接性传播病害发生为害加重,虫传病害分布区域不断扩大,新病害不断出现,国际柑桔产业面临着巨大的挑战,国际柑桔病毒学家组织者会议（International Organization of Citrus Virologists,IOCV）为各国柑桔病毒学家提供... 近年来,国际柑桔嫁接性传播病害发生为害加重,虫传病害分布区域不断扩大,新病害不断出现,国际柑桔产业面临着巨大的挑战,国际柑桔病毒学家组织者会议（International Organization of Citrus Virologists,IOCV）为各国柑桔病毒学家提供了交流合作的平台。 展开更多

关键词 柑桔产业 病毒学 国际 会议概况 组织 巴西 发生为害 病害

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柑桔衰退病高效简便检测试剂盒的研制及应用 被引量：1

19

作者 宋震 唐科志 +2 位作者 周彦 刘科宏 周常勇 《中国南方果树》 北大核心 2006年第6期15-17,共3页

关键词 柑桔衰退病毒 检测试剂盒 应用 简便 逆转录聚合酶链式反应 VIRUS 太平洋地区 地中海地区

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引起重庆主栽柑桔品种衰退病的病毒株系组群分析 被引量：1

20

作者 王雪峰 周彦 +2 位作者 刘科宏 唐科志 周常勇 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期10-13,共4页

柑桔衰退病毒(CTV)存在着许多生物学特性不同的株系。通过铲除感染强毒株植株或利用弱毒株交叉保护的方式来防治柑桔衰退病都需要对CTV株系进行准确、可靠的鉴定。本文根据对CTV衣壳蛋白基因(CPG)的限制性片段长度多态性(RFLP)分析,发... 柑桔衰退病毒(CTV)存在着许多生物学特性不同的株系。通过铲除感染强毒株植株或利用弱毒株交叉保护的方式来防治柑桔衰退病都需要对CTV株系进行准确、可靠的鉴定。本文根据对CTV衣壳蛋白基因(CPG)的限制性片段长度多态性(RFLP)分析,发现在重庆主栽柑桔品种的衰退病毒主要以CP/Hinf I RFLP第1、3和6组群为主,并且在田间以多株系混合感染为主。 展开更多

关键词 柑桔衰退病毒 限制性片段长度多态性 交叉保护

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