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重组酶介导等温扩增技术(RAA)在病原微生物检测中的应用进展
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作者 毛迎雪 刘蒙达 +7 位作者 张皓博 曲瑶 南文龙 苏华彬 刘建柱 孙淑芳 胡莉萍 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期60-66,共7页
重组酶介导等温扩增(RAA)是一种恒温快速核酸扩增技术,是重组酶等温扩增技术中具有代表性和前沿性的检测技术,其弥补了现有核酸体外扩增技术需要热循环的局限性,使得核酸体外扩增更加简便快捷,目前已被广泛应用于动物疫病检测。本文介绍... 重组酶介导等温扩增(RAA)是一种恒温快速核酸扩增技术,是重组酶等温扩增技术中具有代表性和前沿性的检测技术,其弥补了现有核酸体外扩增技术需要热循环的局限性,使得核酸体外扩增更加简便快捷,目前已被广泛应用于动物疫病检测。本文介绍了RAA技术的检测原理、引物探针设计及优缺点,综述了其在病毒、细菌、寄生虫及抗生素耐药基因检测等方面的应用进展,总结了国内现有RAA技术标准及检测产品开发情况,以期为拓展RAA技术的应用提供参考。 展开更多
关键词 重组酶介导扩增 等温扩增 病原检测 生物安全检测
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牛结节性皮肤病疫苗研究进展 被引量:4
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作者 李林 巩明霞 +6 位作者 迟田英 王英丽 于小静 杜秋明 南文龙 陈义平 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2023年第1期102-108,共7页
牛结节性皮肤病(LSD)是2019年8月传入我国的新发传染病,对养牛业产生了重大经济影响。疫苗免疫是控制LSD传播的关键措施。目前只有商品化弱毒活疫苗(LAV)用于预防LSD,包括同源弱毒活疫苗和异源羊痘弱毒活疫苗,而灭活疫苗以及多种病毒的... 牛结节性皮肤病(LSD)是2019年8月传入我国的新发传染病,对养牛业产生了重大经济影响。疫苗免疫是控制LSD传播的关键措施。目前只有商品化弱毒活疫苗(LAV)用于预防LSD,包括同源弱毒活疫苗和异源羊痘弱毒活疫苗,而灭活疫苗以及多种病毒的重组亚单位疫苗正在研究中;不管是同源疫苗还是异源疫苗,大都具有良好的临床保护效果,但部分疫苗不能提供足够的免疫保护;进行良好的疫苗质量控制可有效避免疫苗生产过程中的外源病毒污染以及类疫苗重组毒株的产生。我国可进一步借鉴国际先进经验,积极开展疫苗研发,以及流行病学、监测诊断等相关防控技术研究,尽早消灭LSD。本文着重介绍了国内外常用疫苗的种类、副作用及其免疫效果和质量控制等,可为该病控制和消灭提供技术支持。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病 疫苗 山羊痘病毒 绵羊痘病毒
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全球人兽共患结核病防控现状与展望
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作者 樊晓旭 张皓博 +7 位作者 付树芳 刘蒙达 亓菲 苏华彬 李桂梅 南文龙 孙淑芳 范伟兴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期487-491,共5页
人兽共患结核病(zoonotic tuberculosis,zTB)是指由共同的结核病病原引起、在动物与人类之间自然传播、存在流行病学关联的传染病。zTB不仅危及人类健康,还对动物健康、动物和动物产品国际贸易、畜产品质量安全,野生动物保护等方面造成... 人兽共患结核病(zoonotic tuberculosis,zTB)是指由共同的结核病病原引起、在动物与人类之间自然传播、存在流行病学关联的传染病。zTB不仅危及人类健康,还对动物健康、动物和动物产品国际贸易、畜产品质量安全,野生动物保护等方面造成影响。野生动物感染该病后,可充当储存宿主,持续威胁人和家畜健康。本综述介绍当前zTB防控现状,在“同一健康”理念下提出未来防控建议,为实现根除结核病目标提供参考。 展开更多
关键词 人兽共患 结核 同一健康
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多杀性巴氏杆菌荧光RAA快速检测方法的建立 被引量:2
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作者 杜秋明 郑秀红 +5 位作者 樊晓旭 赵永刚 乔启波 南文龙 许龙春 吴晓东 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期120-125,共6页
为建立一种敏感特异、简便快速的多杀性巴氏杆菌检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因保守区序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件优化筛选,建立了重组酶介导的等温扩增(RAA)荧光检测方法。结果显示,建立的多杀性巴氏杆菌RAA荧光检... 为建立一种敏感特异、简便快速的多杀性巴氏杆菌检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因保守区序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件优化筛选,建立了重组酶介导的等温扩增(RAA)荧光检测方法。结果显示,建立的多杀性巴氏杆菌RAA荧光检测方法在39℃恒温条件下20 min内即可特异性的检出多杀性巴氏杆菌,与鸭疫里默氏杆菌、副猪嗜血杆菌、支原体、链球菌、大肠杆菌、附红细胞体、新孢子虫无交叉反应,方法的最低检出限为10 copies/μL,组内和组间重复性试验的变异系数均小于10%,用该方法对45份临床样本进行检测,结果阳性率为33.33%,与荧光定量PCR方法检测结果一致。本研究建立的多杀性巴氏杆菌荧光RAA检测方法操作简单、反应时间短、具有较高的特异性和敏感性,不依赖于复杂的仪器,适合临床上对多杀性巴氏杆菌的快速检测。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 重组酶介导等温扩增 快速检测
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有关国际组织在布鲁氏菌病防控中发挥作用的经验和启示
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作者 焉鑫 孙明军 +4 位作者 南文龙 邵卫星 刘蒙达 孙淑芳 樊晓旭 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期153-156,F0003,共5页
布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella.spp)引起的慢性多器官损伤性人兽共患传染病。动物感染可引起流产和不育,人类感染会引起发热、肌肉和关节疼痛等,严重者完全丧失劳动能力[1]。该病严重威胁着养殖业健康发展、人类食品安... 布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella.spp)引起的慢性多器官损伤性人兽共患传染病。动物感染可引起流产和不育,人类感染会引起发热、肌肉和关节疼痛等,严重者完全丧失劳动能力[1]。该病严重威胁着养殖业健康发展、人类食品安全和公共卫生安全。鉴于此,在“同一健康”理念下,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)、联合国粮食及农业组织(Food and Agriculture Organization of the United Nations,FAO)、世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,WOAH)和世界贸易组织(World Trade Organization,WTO)等国际组织高度重视对布鲁氏菌病的防控。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 人兽共患传染病 世界动物卫生组织 动物感染 公共卫生安全 关节疼痛 世界贸易组织 经验和启示
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一株犬种布鲁氏菌的分离鉴定及其在巨噬细胞内存活能力的研究
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作者 焉鑫 陈霞 +7 位作者 孙世雄 田雪 邵卫星 孙翔翔 南文龙 樊晓旭 孙淑芳 孙明军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期889-894,共6页
为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性,本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份,将其涂布于布鲁氏菌选择培养基,分别在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)条件下37℃培养72 h,观察菌落形态,并经结晶紫染色,观察细菌类型。按照国家标... 为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性,本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份,将其涂布于布鲁氏菌选择培养基,分别在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)条件下37℃培养72 h,观察菌落形态,并经结晶紫染色,观察细菌类型。按照国家标准鉴定分离菌的生化特性。细菌分离结果显示,在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)的培养箱中2份流产犬全血样品在布鲁氏菌选择培养基上均长出边缘整齐、光滑的圆形菌落,透射光下,菌落呈浅黄色且有光泽;结晶紫染色结果显示分离菌为典型的粗糙型细菌;生化鉴定结果显示,分离株在TSA中的生长不依赖于CO_(2),且不产生H2S,氧化酶和脲酶试验均为强阳性。上述结果表明分离到一株犬种布鲁氏菌,命名为B. canis CQ3。对分离菌进行全基因组测序,利用MAUVE对分离株与GenBank中38株不同种的布鲁氏菌基因组进行比对,并构建分离菌全基因组的进化树。将不同种布鲁氏菌及分离株分别接种于TSB培养基中,通过测定不同时间的OD450nm值绘制各菌株的生长曲线。将各菌株及B. canis CQ3株分别以MOI 100感染小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,在感染后的不同时间(1 h、24 h、48 h和72 h)收集细胞,经相应处理后涂布TSA平板培养72 h后,经菌落计数分析分离菌株在细胞中的存活能力。全基因组序列比对及进化树结果显示,比对到犬种布鲁氏菌的序列数量最多,且B. canis CQ3株与欧洲分离的犬种布鲁氏菌NR-finland株的亲缘关系最近。生长曲线测定结果显示,在6 h~16 h (对数生长期) B. canis CQ3株的生长速度稍快于羊种布鲁氏菌B. melitensis XJ流行株和牛种布鲁氏菌B. abortus DT流行株;整个生长过程中B. canis CQ3株的生长速度与疫苗株A19和S2基本一致。巨噬细胞感染试验结果显示,感染1 h时,B. canis CQ3株进入巨噬细胞数量多于疫苗株A19和S2、B. melitensis XJ和B. abortus DT株。相比B. melitensis XJ和B. abortus DT株,B. canis CQ3株在胞内的活菌数均有所降低(感染后24 h)和极显著降低(感染后48 h)(P<0.001),但一直与疫苗株A19和S2在胞内的的活菌数相当。相比于感染后24 h,感染后48 h B. canis CQ3株的胞内活菌数升高了近10倍。上述结果表明,本研究分离鉴定的B. canis CQ3株的体外生长特性与疫苗株A19和S2基本一致,但在对数期的生长稍快于B. melitensis XJ株和B. abortus DT株,且其在RAW264.7细胞中的存活能力较好。本研究首次系统比较了犬种布鲁氏菌分离株与疫苗株A19、S2以及牛羊布鲁氏菌流行株在鼠源巨噬细胞中的存活能力,为进一步开展犬种布鲁氏菌病原学和流行病学调查提供了参考依据。 展开更多
关键词 犬种布鲁氏菌 分离鉴定 胞内存活
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基于流产布鲁氏菌重组BvrS蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 田雪 焉鑫 +5 位作者 范颖 孙明军 南文龙 刘建柱 孙淑芳 胡莉萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1135-1140,共6页
为建立检测流产布鲁氏菌(B.abortus)抗体的间接ELISA方法,本研究将表达该菌BvrS蛋白的重组质粒pET28a-BvrS转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的重组BvrS蛋白(rBvrS)。Western blot检测结果显示,BvrS能与布鲁氏... 为建立检测流产布鲁氏菌(B.abortus)抗体的间接ELISA方法,本研究将表达该菌BvrS蛋白的重组质粒pET28a-BvrS转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的重组BvrS蛋白(rBvrS)。Western blot检测结果显示,BvrS能与布鲁氏菌阳性血清结合,具有较强的反应原性,可作为建立间接ELISA(iELISA)检测方法的包被抗原。采用棋盘滴定法对以该蛋白为包被抗原的iELISA方法各条件优化,结果显示,最优的反应条件为:BvrS包被浓度为3.125μg/mL,4℃包被过夜;商品化封闭液37℃封闭2 h;待检血清稀释度为1∶100,37℃孵育1 h;辣根过氧化酶(HRP)标记的兔抗鼠SPG稀释度为1∶8000,37℃孵育40 min。特异性试验结果显示,除布鲁氏菌阳性血清外,该iELISA与大肠杆菌、沙门氏菌、霍乱孤菌、军团菌、结核杆菌的阳性血清均无明显交叉反应;将牛布鲁氏菌阳性血清2倍倍比稀释(1∶50~1∶6400)后,利用建立的iELISA检测,结果显示,该iELISA方法对阳性血清的检测限为1∶400,敏感性高于试管凝集试验(SAT)检测结果(1∶100),该方法敏感性较高;分别利用同一批次和不同批次rBvrS包被的酶标板,按照本研究建立的方法对已知血清进行重复性试验,结果显示,批内批间重复性试验的变异系数均小于10%,该方法重复性较好。利用本实验建立的iELISA方法与国外商品化试剂盒ID-VET同时检测220份临床牛血清样品,结果显示,二者检测结果符合率为99.5%。本研究建立的iELISA方法为牛布鲁氏菌病的血清学诊断提供了可行方法。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 间接酶联免疫吸附试验 BvrS
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荧光免疫层析技术原理及其在病原微生物检测中的研究进展
8
作者 苏华彬 刘蒙达 +7 位作者 南文龙 孙明军 焉鑫 毛迎雪 曲瑶 孙淑芳 李桂梅 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期67-71,共5页
荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,... 荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,特别适合在条件有限的实验室及野外开展动物疾病快速诊断。本文详细介绍了荧光免疫层析技术的原理及其在病毒、细菌、寄生虫等病原检测方面的应用研究,以期为病原微生物现场快速诊断技术的开发提供参考。 展开更多
关键词 荧光免疫层析技术 荧光微球 病原微生物检测
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量:16
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作者 南文龙 金宁一 +5 位作者 鲁会军 赵翠青 田明尧 谭磊 张金双 白靓 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期630-633,637,共5页
目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特... 目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构象模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA141~155、HA206~223、HA302~316。候选表位处于H5N1亚型禽流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H5N1亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H5N1亚型禽流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。本研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H5N1亚型禽流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 H5N1 抗原表位
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非洲猪瘟病原学检测方法研究进展 被引量:15
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作者 南文龙 李林 +3 位作者 巩明霞 陆游 吴晓东 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2020年第1期46-51,共6页
目前,非洲猪瘟(ASF)尚无有效疫苗可以预防,快速、准确的病原学检测是防控该病的重要技术手段。本文综述了ASF病原学检测方法:免疫荧光、ELISA、免疫层析试纸条等抗原检测方法,其使用方便、快速,目前主要应用于急性发病或病死猪的快速诊... 目前,非洲猪瘟(ASF)尚无有效疫苗可以预防,快速、准确的病原学检测是防控该病的重要技术手段。本文综述了ASF病原学检测方法:免疫荧光、ELISA、免疫层析试纸条等抗原检测方法,其使用方便、快速,目前主要应用于急性发病或病死猪的快速诊断及群体筛查;PCR、荧光定量PCR、环介导等温扩增等分子生物学检测方法仍是ASF病原检测的主要手段,特别是荧光定量PCR方法以其敏感、特异、快速、稳定的优点在我国实践中广泛应用。随着微流控、化学发光、基因芯片等新技术不断应用,各种自动化、一体化、便携式设备不断研发,将会为ASF防控提供有效技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 病原学检测 研究进展
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七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响 被引量:7
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作者 南文龙 巩明霞 +4 位作者 陆游 李林 王清华 吴晓东 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2021年第3期87-91,123,共6页
为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作... 为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作用30 min后,采用荧光定量PCR方法检测作用后产物。结果显示,与对应的阳性对照组相比,含氯类(二氯异氰尿酸钠)、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂,消毒后对荧光定量PCR检测结果影响最显著,检测Ct值显著上升或检测不到;戊二醛类、含碘类(主要成分聚维酮碘)消毒剂,核酸降解能力相对较弱,检测Ct值稍有上升;酚类、季铵盐类、含碘类(主要成分碘、磷酸、硫酸)类消毒剂,检测Ct值基本无变化。本研究评价了7类常用消毒剂消毒对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,可为防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 消毒剂 荧光定量PCR 消毒效果
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四类常用消毒剂对非洲猪瘟病毒灭活效果的评价 被引量:5
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作者 南文龙 巩明霞 +4 位作者 邹艳丽 刘珊 陆游 吴晓东 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2020年第12期135-140,共6页
为评价含碘、季铵盐、过硫酸氢钾、二氧化氯这四类常用消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的灭活效果,参考OIE参考实验室相关操作流程,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,根据说明书标明的浓度范围选择不同工作浓度,与ASFV... 为评价含碘、季铵盐、过硫酸氢钾、二氧化氯这四类常用消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的灭活效果,参考OIE参考实验室相关操作流程,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,根据说明书标明的浓度范围选择不同工作浓度,与ASFV分别在4℃和20℃条件下作用30分钟,10倍连续稀释后接种猪肺泡巨噬细胞,同时加入猪红细胞,培养观察红细胞吸附现象。结果显示,本试验四类消毒剂对ASFV均有灭活作用,但灭活效果因消毒剂的种类和工作浓度不同有所差异。相同工作浓度的同一消毒剂产品,在4℃和20℃这两种条件下的灭活效果基本一致。季铵盐类和二氧化氯类消毒剂,在说明书推荐的工作浓度下,均有效灭活ASFV;多数含碘类、过硫酸氢钾类消毒剂,需在其说明书标明浓度范围的较高工作浓度时,才可有效杀灭ASFV。本研究为非洲猪瘟防控工作中消毒剂的选择和使用提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 消毒剂 灭活 病毒 消杀
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PCR假阳性的原因分析及控制措施 被引量:13
13
作者 南文龙 张悦勇 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2015年第8期56-58,共3页
近二十年来,PCR作为一种重要的分子生物学技术,广泛应用于动物疫病的病原学、诊断方法、基因工程疫苗研究、检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控实际工作。如何控制好PCR检测的质量,减少假阳性,一直是研究者普遍... 近二十年来,PCR作为一种重要的分子生物学技术,广泛应用于动物疫病的病原学、诊断方法、基因工程疫苗研究、检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控实际工作。如何控制好PCR检测的质量,减少假阳性,一直是研究者普遍关注的问题。本文分析了PCR假阳性形成的原因,提出预防及控制措施,为促进实验室PCR实践工作提供参考。 展开更多
关键词 PCR 假阳性 原因分析 控制措施
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“21世纪海上丝绸之路”建设对我国南海地区的影响分析 被引量:5
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作者 南文龙 张争胜 赵亮 《海洋开发与管理》 2016年第6期84-91,共8页
"21世纪海上丝绸之路"是我国在新时期提出的重大战略举措,我国南海地区作为"21世纪海上丝绸之路"的起点海域和战略基点,同时也作为连接我国与东南亚、南亚以及非洲与欧洲的桥梁,在这一战略中扮演着举足轻重的角色... "21世纪海上丝绸之路"是我国在新时期提出的重大战略举措,我国南海地区作为"21世纪海上丝绸之路"的起点海域和战略基点,同时也作为连接我国与东南亚、南亚以及非洲与欧洲的桥梁,在这一战略中扮演着举足轻重的角色。文章立足于"21世纪海上丝绸之路"的丰富内涵并结合南海地区的历史发展脉络和开发利用现状,分别从地理位置、资源保护与开发、海洋经济繁荣与发展、地区安全稳定和国家海洋战略5个方面,分析"21世纪海上丝绸之路"建设对我国南海地区的影响:1强化南海地区"桥梁与枢纽作用";2促进南海地区海洋"资源宝库"保护与开发;3推动南海地区海洋经济发展与繁荣;4维护南海地区周边地区安全与稳定;5提升南海地区在国家海洋战略中的地位。南海地区必将在新时期我国建设海洋强国的潮流中大放异彩。 展开更多
关键词 21世纪海上丝绸之路 中国南海 海洋战略 海洋强国
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布鲁氏菌弱毒疫苗鉴别技术研究进展 被引量:2
15
作者 南文龙 谭鹏飞 +1 位作者 彭大新 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2014年第8期32-35,共4页
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种重要的人畜共患传染病,不仅给畜牧业造成严重的经济损失,并威胁人类健康。弱毒疫苗免疫是防控布病的重要手段,但弱毒疫苗的使用往往对布病的诊断和监测造成干扰。各国学者利用细菌学、免疫学、分子生... 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种重要的人畜共患传染病,不仅给畜牧业造成严重的经济损失,并威胁人类健康。弱毒疫苗免疫是防控布病的重要手段,但弱毒疫苗的使用往往对布病的诊断和监测造成干扰。各国学者利用细菌学、免疫学、分子生物学等技术手段,建立了病原分离鉴定、补体结合试验、利凡诺尔试验、酶联免疫吸附试验、荧光偏振实验、限制性片段长度多态性、PCR、real-time PCR等多种布鲁氏菌弱毒疫苗鉴别检测方法。研究表明,ELISA和FPT以其高通量以及操作方便的优势,在布鲁氏菌弱毒疫苗与野生菌株感染的血清学鉴别诊断方面前景良好;分子生物学特别是PCR、real-time PCR方法目前仍广泛用于布鲁氏菌纯培养物的鉴定。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 弱毒疫苗 鉴别 疫苗免疫 研究进展
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三类常用消毒剂对非洲猪瘟病毒灭活效果的评价 被引量:3
16
作者 南文龙 巩明霞 +4 位作者 邹艳丽 刘珊 陆游 吴晓东 陈义平 《中国兽药杂志》 2021年第1期1-6,共6页
为评价戊二醛类、酚类、含氯类常用消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的灭活效果,参考OIE参考实验室相关操作流程,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒的目的,根据说明书标明的浓度范围选择低、中、高3个工作浓度,在选定工作浓度下将消毒剂与ASF... 为评价戊二醛类、酚类、含氯类常用消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的灭活效果,参考OIE参考实验室相关操作流程,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒的目的,根据说明书标明的浓度范围选择低、中、高3个工作浓度,在选定工作浓度下将消毒剂与ASFV分别在4℃和20℃条件下作用30 min,10倍连续稀释后接种猪肺泡巨噬细胞,同时加入猪红细胞,培养观察红细胞吸附现象。结果显示,这三类消毒剂对ASFV均具有灭活作用,但效果因消毒剂种类和工作浓度不同有所差异。相同工作浓度的同一消毒剂产品,在4℃和20℃这两种条件下的灭活效果基本一致。戊二醛类和酚类消毒剂,在说明书推荐的工作浓度下均可有效灭活ASFV;含氯类消毒剂需在其说明书标明浓度范围的较高工作浓度时才可有效灭活ASFV。本研究评价了三类常用消毒剂对ASFV的灭活效果,可为生猪养殖、运输调运、屠宰加工、检验检疫等工作中消毒剂的选择和使用提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 消毒剂 灭活
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A型H3579亚型流感多表位核酸疫苗小鼠实验免疫研究
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作者 南文龙 金宁一 +6 位作者 鲁会军 陈义锋 赵翠青 田明尧 白靓 谭磊 张金双 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期536-539,共4页
目的为了应对流感流行多亚型并存的局面,进行了多表位核酸疫苗设计,并观察其免疫小鼠的细胞和体液免疫应答反应。方法设计并合成了含有H3、H9的HA和H5N1NA中和表位,M、NP基因保守序列CTL表位的多表位基因盒(Epi)。采用pVAX载体对H5HA、H... 目的为了应对流感流行多亚型并存的局面,进行了多表位核酸疫苗设计,并观察其免疫小鼠的细胞和体液免疫应答反应。方法设计并合成了含有H3、H9的HA和H5N1NA中和表位,M、NP基因保守序列CTL表位的多表位基因盒(Epi)。采用pVAX载体对H5HA、H7HA及Epi进行融合表达。经肌肉注射免疫6~8周龄雌性Balb/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中的针对H3579亚型流感抗体。三免后2周,分离脾淋巴细胞,进行T淋巴细胞转化试验和T淋巴细胞亚类数量检测。结果免疫小鼠获得了针对H3579亚型流感的体液和细胞免疫反应。结论完整HA抗原结合多表位的DNA疫苗模式的成功,预示了该DNA疫苗可能可以有效应对当前多种亚型流感并存的局面,并为其他种类流感疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 流感 核酸疫苗 多表位
原文传递
羊痘病毒属病毒通用Cycleave PCR检测方法的建立
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作者 南文龙 巩明霞 +8 位作者 陆游 李金明 王永杰 哈达 吴发兴 李林 王英丽 陈义平 吴晓东 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期107-111,共5页
为快速特异检测羊痘病毒属病毒(CaPVs),比较了牛结节性皮肤病病毒(LSDV)、山羊痘病毒(GTPV)和绵羊痘病毒(SSPV)的全基因组序列,选择保守区域设计特异性引物和探针,建立了一种CaPVs通用的Cycleave PCR检测方法。特异性结果显示,该方法在4... 为快速特异检测羊痘病毒属病毒(CaPVs),比较了牛结节性皮肤病病毒(LSDV)、山羊痘病毒(GTPV)和绵羊痘病毒(SSPV)的全基因组序列,选择保守区域设计特异性引物和探针,建立了一种CaPVs通用的Cycleave PCR检测方法。特异性结果显示,该方法在40 min内即可检出CaPVs,与口蹄疫病毒、羊口疮病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、蓝舌病病毒均无交叉反应;灵敏性结果显示,最低检出限为4.98 copies/μL;重复性结果显示,批内和批间重复变异系数均小于2%。对131份临床样本进行检测发现,该方法与世界动物卫生组织(WOAH)推荐的常规PCR方法相比,敏感性为100%,特异性为91.55%,总符合率为95.42%。以上结果表明,本研究建立的Cycleave PCR检测方法特异、敏感、重复性好,且操作简便,适用于CaPVs的高通量、快速检测。 展开更多
关键词 羊痘病毒属病毒 Cycleave PCR 检测
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H1N1亚型流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量:7
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作者 王开艳 李太元 +6 位作者 鲁会军 谭磊 南文龙 田明尧 张金双 刘昊 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期8-12,共5页
目的:应用生物信息学方法预测H1N1亚型流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性,为研制H1N1亚型流感病毒的表位疫苗奠定基础。方法:依据近年流感病毒流行趋势,从GenBank下载具有代表性的H1N1亚型流感病毒HA蛋白氨基酸... 目的:应用生物信息学方法预测H1N1亚型流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性,为研制H1N1亚型流感病毒的表位疫苗奠定基础。方法:依据近年流感病毒流行趋势,从GenBank下载具有代表性的H1N1亚型流感病毒HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过Balb/c小鼠H1N1亚型流感病毒阳性血清与表位肽的结合试验,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构像模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA73~87、HA125~139、HA188~205。候选表位处于H1N1亚型流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H1N1亚型流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠H1N1亚型流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H1N1亚型流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。此研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H1N1亚型流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 流感 血凝素 H1N1 抗原表位
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H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒构建 被引量:8
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作者 陈义锋 金宁一 +7 位作者 贾雷立 鲁会军 南文龙 田明尧 陈晓月 马海利 马鸣潇 刘成宏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期524-527,共4页
目的构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株。方法筛选流感病毒主要抗原(HANANPM)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7HA融合表达基因为骨架,将多... 目的构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株。方法筛选流感病毒主要抗原(HANANPM)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7HA融合表达基因为骨架,将多表位基因插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至鸡痘病毒表达载体pUTA-2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA。应用脂质体介导的转染法,将该重组鸡痘病毒中间转移载体与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压筛选挑斑纯化后传代,并对重组以鸡痘病毒进行PCR和IFA检测和Western blot分析。结果成功构建了重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA,PCR、IFA和Western blot检测阳性。结论筛选出稳定共表达H5H7HA基因和通用多表位基因的重组鸡痘病毒vUTA2-H7HA-Epi-H5HA株,该重组鸡痘病毒的构建为跨种通用型流感病毒活载体疫苗的研究奠定了物质基础。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 多表位基因(Epi) 构建
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